维生素K2诱导肝癌细胞株Hep-G2凋亡机制研究

目的 将维生素K2用于肝癌Hep-G2细胞株,观察它对BTG2和Cyclin D1表达的影响,以探讨其抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的机制.方法 CCK-8检测维生素K2对Hep-G2细胞增殖的影响;流式细胞术检测维生素K2对细胞周期及凋亡的影响;蛋白质印迹法检测BTG2和Cyclin D1蛋白的表达;RT-PCR检测BTG2和Cyclin D1的mRNA转录水平.结果 随着浓度增加,维生素K2(40、80、160μmol/L)可以抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性,药物干预细胞48 h后IC50=65.17μmol/L.流式细胞术结果显示,实验组G1期细胞比例(55±1.0)％较对照组的(44±1.0)％明显升高,差异有统计学意义(P=0.0003),说明维生素K2可将细胞周期阻滞在G1期.流式细胞术测细胞凋亡结果显示,实验组中晚期细胞凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(F=275.6,P<0.05),且该浓度的维生素K2诱导细胞凋亡的作用具有时间依赖性,F=693.3,P<0.01.蛋白质印迹法结果显示,维生素K2作用24、48和72 h,BTG2蛋白表达分别为0.138±0.001、0.258±0.013和0.330±0.007,其表达呈上升趋势,与对照组(0.021±0.001)相比,差异有统计学意义,F=993.7,P<0.01;Cyclin D1蛋白表达分别为0.411±0.002、0.372±0.005和0.232±0.006,其表达呈下降趋势,与对照组(0.733±0.032)相比,差异有统计学意义,F=489.7,P<0.01.RT-PCR结果显示,维生素K2作用24、48、72 h,BTG2 mRNA表达分别为1.13±0.46、1.15±0.03和1.22±0.37,其表达并没有随着维生素K2作用时间的延长而出现明显上升趋势,且与对照组(1.00±0.00)相比,差异无统计学意义,F=0.30,P=0.83;Cyclin D1 mRNA表达分别为0.63±0.03、0.44±0.05和0.14±0.03,其表达随着维生素K2作用时间的延长而逐渐下调(P<0.01),与对照组(1.00±0.00)比较,差异有统计学意义,F=415.6,P<0.01.结论 维生素K2可抑制肝癌细胞Hep-G2的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与其上调BTG2表达和下调Cyclin D1表达有关,为维生素K2成为治疗肝癌的天然药物提供了新的依据.

原发性肝癌B细胞异位基因2的表达及临床意义

目的 探讨B细胞异位基因2 (B cell translocation gene 2,BTG2)在原发性肝细胞癌中的表达及与术后生存期之间的关系.方法 共纳入125例可手术切除的原发性肝细胞癌患者,其中有完整随访记录101例;用免疫组化方法检测患者肿瘤组织中BTG2蛋白的表达,并分为3组:BTG2高表达组,BTG2蛋白中表达(++)或强表达(+++);BTG2低表达组,BTG2蛋白低表达(+);BTG2阴性组,BTG2蛋白无表达(-).分析BTG2表达水平与临床病理因素和术后总生存期的相关性.选取12对癌与癌旁配对组织,用RT-PCR检测其BTG2表达水平.结果 125例癌组织中,BTG2阴性组、低表达组和高表达组分别为106、13、6例;癌旁组织中,BTG2阴性组、低表达组和高表达组分别为41、14、22例,癌与癌旁组织BTG2表达差异有统计学意义(x2=28.102,P＜0.001).RT-PCR检测结果显示12对癌与癌旁配对组织中,癌组织BTG2表达水平低于癌旁的有8例.癌栓发生与BTG2表达有明显相关性(x2=8.305,P=0.013),其中低表达组癌栓发生率高.BTG2低表达组中位总生存期为36个月(95％ CI:8.437 ～ 63.564),而高表达和阴性表达组未达到中位总生存期(Log-Rank x2=4.512,P=0.105).亚组分析表明,BTG2高表达组患者总生存期显著长于低表达组(x2=4.266,P=0.039),而高表达与阴性组(x2=2.729,P=0.099)以及低表达与阴性组(x2=1.400,P=0.237)之间差异没有统计学意义.逐步Cox回归分析结果显示,分化程度、肝硬化、癌栓和转移情况是总生存期的独立预后因素.结论 BTG2蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈低表达,并且BTG2蛋白的高表达提示肝癌患者预后较好,可作为肝细胞癌的潜在预后指标.

BTG2基因干扰重组慢病毒的制备及在A549细胞中的表达鉴定

目的：用已构建好的 BTG2-siRNA重组的慢病毒表达载体包装成具有感染性的慢病毒颗粒，获得稳定BTG2-siRNA表达的 A549细胞。方法构建的 BTG2-siRNA 慢病毒表达载体，经测序后证实与标准序列一致。将BTG2-siRNA慢病毒表达载体与其他两种慢病毒包装载体质粒共转染293T细胞，获得BTG2基因siRNA重组慢病毒。感染A549细胞后，用25μg/mL的嘌呤霉素筛选稳定干扰BTG2表达的A549细胞。 CCK8法检测感染BTG2干扰慢病毒的A549细胞的增殖能力变化。结果 Western blot检测提示感染BTG2-siRNA慢病毒的A549细胞总蛋白中BTG2表达要明显低于正常的A549细胞。 CCK8实验显示，感染BTG2干扰慢病毒的A549细胞的增殖能力增加。结论成功制备了BTG2基因siRNA重组慢病毒颗粒，感染A549细胞后可检测到BTG2蛋白的表达明显降低。为进一步研究BTG2基因在恶性肿瘤中的生物学功能与相关机制的研究奠定了基础。

miR-25modulates NSCLC cell radio-sensitivity through directly inhibiting BTG2expression