首页 > 文献资料
-
长链非编码MEG3靶向miR-144表达对结肠癌细胞增殖转移潜能影响
目的 母系表达基因3(maternal expression gene 3,MEG3)在多种恶性肿瘤中表达异常,本研究评估MEG3和miR-144在结肠癌细胞中的表达状态,并进一步探讨MEG3与miR-144的相互作用,研究其与下游相关通路对结肠癌增殖和转移过程中的作用及其机制.方法 收集2016-01-10-2017-01-10宁波市鄞州区第二医院手术切除并且经病理检查确诊为结肠癌组织80例,同时取配对癌旁正常结肠组织80例.人结肠癌细胞株HT-29、SW480、SW620及RKO细胞株购于上海细胞研究所.qPCR检测MEG3和miR-144在不同结肠癌细胞株中的表达情况以及MEG3在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达;分析MEG3和结肠癌患者的临床病理资料之间的关联;双荧光素酶报告基因检测MEG3与miR-144之间的相互作用;MTT增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制MEG3后结肠癌细胞的增殖和侵袭能力的变化情况,及抑制miR-144表达后对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的恢复情况;蛋白质印迹法检测抑制MEG3后PTEN/AKT信号通路蛋白的表达情况.结果 与其他结肠癌细胞株相比,SW620细胞中MEG3表达低(0.52±0.08),t=9.968,P<0.001,miR-144的表达水平高(1.25±0.11),t=9.648,P<0.05;结肠癌组织中MEG3的表达水平相比癌旁正常组织明显降低;MEG3的表达水平与结肠癌的病理分期相关以及淋巴结转移情况有关,随着分期越高,MEG3在结肠癌组织中表达越高,淋巴结转移的患者中MEG3的表达也相对较高;双荧光素酶实验证实MEG3能与miR-144的3′UTR特异性结合,可以调控miR-144的表达与活性;抑制MEG3的表达后可以促进结肠癌细胞的增殖能力(3.52±0.59),t=3.289,P<0.05和侵袭能力(321.52±23.24),t=15.900,P<0.001,差异有统计学意义;同时抑制miR-144的表达水平过后,结肠癌细胞的增殖(3.63±0.48,t=4.303,P<0.05)和侵袭能力(89.52±8.19,t=15.327,P<0.001)得到一定程度的恢复;抑制MEG3的表达后,PTEN/AKT信号通路被相应的激活,PTEN(1.19±0.15)％,t=10.954,P<0.001;AKT(1.29±0.18)％,t=8.881,P<0.001.结论 MEG3可以调控miR-144的表达通过PTEN/AKT信号通路影响结肠癌细胞的增殖和侵袭能力,为临床结肠癌诊治分子靶标研究提供一定的理论支持.
-
5-氮杂-2-脱氧胞苷对母系表达基因3启动子超甲基化的逆转作用及其对卵巢癌细胞增殖活性的抑制作用
目的：探讨不同浓度 DNA 甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对母系表达基因3（ MEG3）基因启动子超甲基化的逆转作用，以及恢复MEG3表达对上皮性卵巢癌细胞增殖活性的影响。方法以0、1、5、10、20μmol／L的5-氮杂-2-脱氧胞苷作用上皮性卵巢癌OVCAR3细胞6 d后，采用甲基化特异性PCR（MSP）检测MEG3启动子的甲基化状态，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MEG3 mRNA的表达水平，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）掺入实验检测细胞增殖活性的变化。结果 MSP 检测显示，0μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组（对照组）、1μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组5、μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组的甲基化水平分别为1．00±0．00、0．79±0．00、0．67±0．00、06．5±0．03和0．61±0．01，各组间差异均有统计学意义（均P＜0．05）。RT-PCR检测显示，对照组、1μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、5μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组MEG3 mRNA的相对表达水平分别为1．00±0．00、2．04±0．16、2．44±0．17、3．19±0．34和5．34±0．39，各组间差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 MTT比色法检测显示，与对照组比较，1μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、5μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组OVCAR3细胞的增殖活性受到明显抑制，5-氮杂-2-脱氧胞苷作用2、4、6 d时，各组间细胞抑制率差异均有统计学意义（均P＜0．01）。 EdU掺入实验显示，对照组、1μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、5μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组OVCAR3细胞中的EdU阳性细胞率分别为（40．78±0．80）％、（35．65±0．33）％、（31．81±0．66）％、（27．33±1．27）％和（17．75±1．85）％，差异均有统计学意义（均P＜0．01）。结论5-氮杂-2-脱氧胞苷可逆转上皮性卵巢癌细胞抑癌基因MEG3启动子超甲基化状态，进而使MEG3重新表达，从而参与了抑制卵巢癌细胞的增殖活性。
关键词： 卵巢肿瘤 甲基化 细胞增殖 母系表达基因3 5-氮杂-2-脱氧胞苷 -
长链非编码RNAs MEG3和GAS5在胃癌组织中的表达及其与预后的关系
目的 研究长链非编码RNAs (lncRNAs)母系表达基因3(MEG3)、生长特异抑制物5(GAS5)在胃癌组织中的表达及其与预后的关系,并进一步探讨MEG3与凋亡相关蛋白P53、MDM2的相关性.方法 收集2012年9月至2013年6月手术治疗的胃癌切除标本(包括癌组织及对应的远端正常组织)55例,采用实时定量聚合酶链反应qRT-PCR检测胃癌组织中MEG3、GAS5的表达水平(以2-△△ct表示基因相对表达量),并分析其与临床病理参数的关系;Western blot法检测胃癌中P53、MDM2蛋白的相对表达水平,并分析其与MEG3的相关性.结果 (1)MEG3在胃癌组织的相对表达水平(7.98 ±0.19)低于正常组织(9.47 ±0.18,P＜0.01).GAS5在胃癌组织的相对表达水平(4.03 ±0.18)低于正常组织(6.06±0.18,P＜0.01).MEG3、GAS5相对表达水平与年龄、性别、肿瘤大小无相关性,与分化程度、是否淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05,P＜0.01).(2) P53蛋白在胃癌组织中的相对表达水平(0.185 5±0.014 7)低于正常组织(0.258 7±0.018 5),MDM2蛋白在胃癌组织中的相对表达水平(0.295 1 ±0.016 8)高于正常组织(0.195 5 ±0.015 1),差异均有统计学意义(P均＜0.01).(3)癌组织中MEG3的表达水平与P53蛋白水平呈正相关(r=0.591,P＜0.01),而与MDM2蛋白水平呈负相关(r=-0.346,P＜0.05).(4) MEG3、GAS5高表达者较低表达者中位生存期明显延长(P均＜0.01).结论 MEG3、GAS5基因在胃癌发生发展过程中起抑癌基因的作用,MEG3可通过p53途径发挥抑癌作用.检测MEG3、GAS5基因的表达水平对判断胃癌预后有一定价值.
-
长链非编码RNA母系表达基因3在肿瘤中表达的研究现状
长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)在多种肿瘤组织及细胞中异常表达,可通过不同的机制参与肿瘤的发生发展,并且与肿瘤转移、耐药及预后密切相关.作者就MEG3在肿瘤中表达的研究现状及作用机制作一综述.
-
结肠癌中MEG3和GAS5的表达及与预后的关系
目的:检测长链菲编码RNA(IncRNA)母系表达基因3(MEG3)、生长特异抑制物5(GAS5)在结肠癌组织中的表达水平,分析GAS5与细胞周期蛋白P21、E2F1的相关性以探讨其作用机制.方法:收集2014年12月-2015年12月结肠癌患者手术切除标本(包括癌组织及对应的远端正常组织).qRT-PCR检测63例结肠癌中MEG3、GAS5的表达,并分析其与临床病理参数的关系.Western'blot法检测结肠癌中P21蛋白、E2F1蛋白的表达水平,并分析其与GAS5的相关性.结果:(1)结肠癌组织中MEG3的表达水平(7.76±1.38)显著低于正常组织(9.52±1.31),差异有统计学意义(P＜0.05).(2)结肠癌组织中GAS5的表达水平(3.98±1.15)显著低于正常组织(6.21±1.33),差异有统计学意义(P＜005).(3)在结肠癌组织(r=-0.627,P=0.000)及远端正常组织(r=-0.807,P=0.000)中,P21与E2F1的表达呈负相关.GAS5的相对表达水平与P21存在正相关(r=0.410,P=0.001),与E2F1存在负相关(r=-0.366,P=0.003).(4)MEG3、GAS5高表达者较低表达者中位生存期明显延长(P＜0.05).结论:MEG3、GAS5在结肠癌中表达降低,表明其扮演抑癌基因的角色,P21和E2F1是GAS5发挥抑癌作用的重要靶点,检测MEG3、GAS5的表达水平对结肠癌预后有潜在价值.
-
胃癌组织lncRNA MEG3、GAS5表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系
目的 观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)、生长特异抑制物5(GAS5)表达变化,并分析其表达变化与患者临床病理特征和预后的关系.方法 选择胃癌组织及其癌旁正常组织各73例份,采用real-time PCR法检测MEG3、GAS5表达.以胃癌组织MEG3、GAS5相对表达量的均值为临界值,高于临界值作为高表达,低于或等于临界值作为低表达.分析胃癌组织MEG3、GAS5表达与患者临床病理特征和预后的关系.结果 胃癌组织MEG3、GAS5相对表达量均明显低于癌旁正常组织(P均<0.05).胃癌组织MEG3、GAS5表达均与肿瘤组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P均<0.05).MEG3高表达者36例、低表达者37例,GAS5高表达者38例、低表达者35例.MEG3、GAS5高表达者术后生存率和生存时间均明显高于MEG3、GAS5低表达者(P均<0.05).结论 胃癌组织MEG3、GAS5低表达,其低表达与胃癌进展和患者预后不良有关.
-
MEG3在神经胶质瘤、亨廷顿病、缺血性脑卒中发生发展中作用机制的研究进展
母系表达基因3(MEG3)是第一个被发现作为肿瘤抑制因子的长链非编码RNA(lncRNA).近年发现MEG3与神经胶质瘤、亨廷顿病和脑卒中等神经系统疾病的发病有关,可能是神经系统疾病新的生物标志物.MEG3在神经系统疾病中的作用涉及多种机制,包括参与基因调控、促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进血管生成等.MEG3在神经胶质瘤中表达缺失,主要由于DNA甲基转移酶1介导的MEG3启动子的高甲基化所致,以肿瘤抑制因子的角色发挥抗肿瘤作用.MEG3在亨廷顿病中表达下调,通过表观遗传调控多种基因的表达影响神经元活动,而在缺血性脑卒中中表达上调,可通过直接与p53基因的DBD270-281位点结合而促进p53表达,从而促进神经元凋亡.
-
长链非编码RNA MEG3在消化道肿瘤中的研究进展
长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)是一类能在多种生物学过程中发挥调控作用的大分子ncRNA,主要从遗传调控、转录调控及转录后调控三个层面调控基因分子的表达,进而参与到炎症、凋亡、肿瘤等多种病理、生理过程中.母系表达基因3(maternally expressed gene 3, MEG3)是一种由母系印记基因编码的lncRNA,对其功能的研究表明,MEG3在消化道肿瘤的发生、发展中发挥着重要的抑癌作用.本文就近几年对MEG3在胃癌、胆囊癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌等消化道肿瘤中的研究进展作一概述.
-
母系表达基因3在肺癌组织中的表达及其调控肺癌细胞增殖、迁移能力的生物学功能
目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)在肺癌组织中的表达及其调控肺癌细胞增殖、迁移的生物学功能.方法 应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测48例非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织和配对的远癌组织(距离癌组织超过5 cm)中MEG3的表达水平.在A549和H460肺癌细胞株中转染MEG3过表达质粒(Pc-DNA3.1-MEG3).分别利用噻唑蓝(MTT)实验和划痕实验分析MEG3过表达后对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响.应用Western blot实验检测相关生物学功能分子标志物的表达水平.结果 与远癌正常肺组织比较,肺癌组织中MEG3表达下调者25例占52.08％,显著高于上调表达者(P＜0.05);A549和H460细胞中转染空载pcDNA3.1和pcDNA3.1-MEG3后,MEG3表达水平分别为0.48 ±0.04、0.62±0.05和10.36±1.78、11.66±2.01,差异均有统计学意义(P＜0.05);MTT实验显示,转染MEG3后A549和H460细胞的增殖能力显著下降(P＜0.05);划痕实验显示,转染MEG3后A549细胞的迁移能力显著降低(P＜0.05);Western blot分析细胞增殖相关蛋白细胞周期素D1 (Cyclin D1,CCND1)的表达水平,结果显示,MEG3过表达可显著抑制A549和H460肺癌细胞中CCND1表达(P＜0.05).结论 NSCLC中MEG3表达水平明显降低,MEG3可通过调控Cyclin D1的表达来影响细胞的增殖和迁移能力.
-
长链非编码RNA母系表达基因3调节肾透明细胞癌增殖和凋亡的功能研究
目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)在人肾透明细胞癌组织和细胞株中的表达,探讨过表达MEG3后对细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测MEG3在32对配对人肾透明细胞癌组织和癌旁症状组织及6株人肾透明细胞癌细胞株中的表达水平;在786-0细胞中稳定转染MEG3过表达质粒,分别利用噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞实验分析MEG3过表达后对细胞增殖和凋亡的影响;Western blot检测增殖与凋亡相关分子标志物.结果 肾透明细胞癌组织和细胞株中MEG3的表达明显低于对应的正常组织和细胞株;空载pcDNA3.1细胞与稳定转染MEG3的pcDNA3.1-MEG3细胞MEG3表达水平分别为0.51 ±0.02和11.26±1.89,差异有统计学意义(P＜0.05);MTT实验结果显示,MEG3过表达后786-O细胞的增殖活性显著降低(P＜0.05);流式细胞术检测细胞凋亡比例,空载pcDNA3.1细胞与稳定转染MEG3的pcDNA3.1-MEG3细胞凋亡比例分别为(7.02±1.21)％和(13.95±5.48)％,差异有统计学意义(P＜0.05);两株细胞株中MEG3的过表达均可导致细胞周期素D1(Cyclin D1)下降和促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)上升.结论 肾透明细胞癌中MEG3表达降低;MEG3可通过影响细胞增殖和凋亡在肾透明细胞癌中发挥抑癌作用.
-
长链非编码RNA MEG3对肿瘤细胞调控作用的研究进展
长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类长度超过200 nt的不编码蛋白的RNA分子。lncRNA初被认为是转录噪音，在近年的研究中发现越来越多功能性的lncRNA，其重要性才渐渐被阐述。母系表达基因3(materally expressed gene 3，MEG3)是一种由母系印记基因编码的lncRNA，在对其功能的研究中发现MEG3几乎参与了所有的生理和病理过程，其在多种肿瘤中表现出抑制作用。本文就lnc RNA MEG3对肿瘤细胞调控的作用机制作一综述。
-
MEG3和腺苷对HepG2细胞自噬和增殖的影响
目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果.方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/L腺苷处理)和MEG3+腺苷组(腺苷组中加入MEG3慢病毒转染).Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量,CCK-8法观察细胞的活力,细胞计数仪检测活细胞数量.结果:与对照组比较,MEG3组和腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,mTOR表达增加,HepG2细胞的活力降低(P<0.05),自噬体减少.与MEG3组和腺苷组比较,MEG3+腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步降低,mTOR表达进一步增加,HepG2细胞的活力进一步降低,自噬体减少更加显著(P<0.05或P<0.01).MEG3组和腺苷组中HepG2活细胞数在24～72 h较对照组均明显降低(P<0.01),在MEG3+腺苷组中降低更为明显(P<0.01).结论:MEG3过表达和低浓度腺苷可激活mTOR通路,抑制HepG2细胞自噬和增殖.MEG3增强了腺苷对HepG2细胞的作用.
关键词： 母系表达基因3 腺苷 自噬 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 肝细胞癌 -
长链非编码RNA母系表达基因3与肿瘤发生的研究进展
母系表达基因(MEG)3是一个位于染色体14q32、编码与肿瘤发生相关的非编码RNA (ncRNA)的抑癌基因.MEG3RNA在许多正常组织中表达,而在一些原发性肿瘤则表达缺失.深入研究MEG3与肿瘤发生及其抑制肿瘤发生的有关机制有望为肿瘤的预防和诊治提供新策略.本文就长链ncRNA MEG3与肿瘤发生、发展的关系作一综述.
-
长链非编码RNA母系表达基因3多态性与胃癌关系的研究
目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)多态性与胃癌的关系.方法 选择2013年3月至2017年10月期间于云南省肿瘤医院住院治疗的汉族胃癌患者172例(胃癌组)及健康体检汉族个体224人(对照组)作为研究对象.采用TaqMan探针法对MEG3两个标签单核苷酸多态性(rs7158663和rs4081134)进行分型,并分析其与胃癌及其临床病理特征的关系.结果 MEG3 rs7158663以GG基因型作为参照,经x2检验并校正年龄和性别后发现,AG+AA基因型在胃癌组中的分布频率明显高于对照组[校正OR=1.71,95％CI为(1.14,2.56),P=0.010];以G等位基因作为参照,经x2检验并校正年龄和性别后发现,A等位基因在胃癌组中的分布频率明显高于对照组[校正OR=1.58,95％CI(1.15,2.19),P=0.005].rs4081134多态性的基因型和等位基因在2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.017).MEG3 rs7158663和rs4081134两位点多态性与胃癌患者的临床病理特征均无关(P＞0.017).结论 MEG3 rs7158663AG+AA基因型可能是中国汉族人群胃癌的易感基因之一.
-
MEG3对鼻咽癌细胞转移能力的影响及相关机制的初步探究
目的 探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene3,MEG3)对鼻咽癌细胞侵袭迁移能力的影响及相关机制.方法 慢病毒转染法在人鼻咽癌细胞CNE1中构建过表达MEG3的实验组细胞及转染空白载体的对照组细胞,荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术检测两组细胞MEG3表达水平,Transwell实验检测两组细胞侵袭迁移能力变化,免疫印迹技术(Western Blot)检测两组细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-链蛋白(β-catenin)表达水平.结果 实验组细胞MEG3表达显著高于对照组细胞,差异具有统计学意义(P＜0.01).Transwell侵袭实验结果示实验组细胞穿透基底膜的细胞数显著低于对照组细胞,Transwell迁移实验结果示实验组细胞迁出小孔细胞数显著低于对照组细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western Blot实验结果示实验组相比对照组细胞E-cadherin表达水平显著上调,而Vimentin及β-catenin表达水平显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MEG3可下调人鼻咽癌细胞CNE1的侵袭迁移能力,其机制与抑制细胞EMT进程有关.
