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定志小丸对miR-16及5-HT重摄取的影响
该研究观察抗抑郁中药古方定志小丸(DZ)在体内外对miR-16表达水平的影响,从转录后调控的角度探索定志小丸升高5-羟色胺(5-HT)水平的机制.首先建立慢性不可预知中等强度温和刺激(CUMS)结合孤养抑郁大鼠模型,观察不同剂量定志小丸(600,300,150 mg·kg-1)给药3周后对抑郁大鼠行为学指标的影响,高效液相色谱法(HPLC)观察对海马5-羟色胺(5-HT)含量的影响,PCR和Western blot法观察定志小丸对CUMS大鼠海马miR-16及SERT表达水平的影响.并在体外培养的大鼠原代海马神经元细胞中观察定志小丸(10,100,200,500 mg·L-1)作用48 h后对miR-16沉默和皮质酮/谷氨酸损伤导致的细胞模型中miR-16及SERT mRNA表达水平的影响.结果显示,300,600 mg· kg-定志小丸可显著改善CUMS大鼠行为学评分,升高大鼠海马内5-HT的水平,同时能够升高大鼠海马区miR-16的表达,降低SERT的表达.同时,在大鼠原代海马神经元细胞中,100,200,500 mg·L-1定志小丸可显著升高miR-16沉默和皮质酮/谷氨酸损伤模型细胞中miR-16的表达水平,并显著降低上述造模引起的细胞内SERT表达水平的升高.综上,笔者认为定志小丸可能通过上调miR-16表达水平,释放其对靶基因SERT的抑制作用,抑制5-HT的重摄取,进而升高脑内5-HT的水平,发挥抗抑郁作用.
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NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达
目的 分析宫颈癌移植瘤小鼠的癌与癌旁组织中miR-15b和miR-16的表达状况以及NF-κB信号通路在宫颈癌癌旁组织活化情况,为宫颈癌的诊断和治疗提供新思路.方法 建立小鼠宫颈癌移植瘤模型,取癌组织与癌旁组织,以及正常的脂肪组织,用实时荧光定量PCR方法检测miR-15b和miR-16的表达,用免疫组化检测NF-κB(P65)蛋白的表达及定位.结果 移植瘤造模成功.miR-15b在宫颈癌组织中表达为32.21±3.67,明显高于癌旁组织的25.16±1.86和正常组织的1.00 ±0.12(P ＜0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P＜0.05);miR-16在宫颈癌组织中表达为28.63±2.34,明显高于癌旁组织的22.16±1.76和正常组织的1.00±0.12(P ＜0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P＜0.05).在正常脂肪组织中,NF-κB(P65)蛋白主要定位于胞质,而在癌组织与癌旁组织中,NF-κB (P65)蛋白主要位于胞核.结论 NF-κB通路及其相关的miR-15b和miR-16可能参与了宫颈癌发生的早期分子事件.
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miR-16促进Neuro2a细胞的凋亡
目的 检测过表达miR-16对小鼠Neuro2a细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-16在肿瘤发病过程中的可能机制.方法 构建能够在细胞中过表达miR-16的真核表达载体pcDNA3.1-miR-16,利用Real-time PCR验证了表达载体的过表达效应.应用pcDNA3.1-miR-16载体转染Neuro2a细胞,利用流式细胞术和TUNEL法检测Neuro2a细胞周期及凋亡改变情况.结果 转染过表达pcDNA3.1-miR-16载体后,成熟的miR-16表达与对照组相比明显升高(P<0.05).在Neuro2a细胞中过表达miR-16后,用流式细胞术检测发现,Neuro2a细胞周期未见明显改变,与对照组相比,凋亡细胞数有显著增加;进一步通过TUNEL法验证,发现miR-16的过表达能够促进Neuro2a的细胞凋亡.结论 过表达miR-16能够显著促进Neuro2a细胞凋亡而对细胞周期并无影响,提示miR-16可能对肿瘤治疗起作用.
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miR-16在T淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴母细胞白血病中表达
本研究探讨miR-16在T淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴母细胞白血病(T-LBL/ALL)中的表达及其与预后的关系.应用免疫组织化学法对宜共市人民医院血液科有详细随访资料的38例T-LBL/ALL石蜡标本进行CD3、cCD3、CD10、CD20、CD34、CD43、CD99、TdT、PAX-5、BCL-2和Ki67免疫组织化学标记检测,采用real-time RT-PCR方法检测miR-16的表达水平,以15例淋巴结反应性增生作为对照.结果表明:38例T-LBL/ALL中TdT阳性率高(94.7％),CD34阳性低(22.1％),PAX-5及CD20为阴性.在39.5％病例中Ki67大于80％.与淋巴结反应性增生相比较,miR-16在T-LBL/ALL中表达上调,其表达量是淋巴结反性增生的4.87倍(P＜0.05).T-LBL中miR-16高表达组总体生存率下降(P＜0.05).BCL-2蛋白表达阳性组预后优于阴性组预后(P＜0.05).miR-16表达与BCL-2蛋白存在相关性(r=0.51,P＜0.05).结论:在T-LBL/ALL中miR-16的高表达组总体生存率明显高于低表达组,提示miR-16可能与预后有相关性,而BCL-2蛋白表达阳性组预后好于阴性组,可能也是一种影响预后的因素.
关键词： miR-16 淋巴瘤 T淋巴母细胞淋巴瘤 急性淋巴母细胞白血病 -
miR-16在肾癌中表达和临床意义的研究
目的：检测肾癌组织及癌旁正常组织中miR-16的表达，分析miR-16表达水平与临床病理特征之间的关系，为深入研究miR-16在肾癌的发生发展中功能作用奠定基础。方法在标本库中随机挑选48例手术切除的肾癌及配对癌旁组织标本，提取总RNA并通过反转录获得cDNA，实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测标本中 miR-16表达量，统计学分析其表达量与患者临床病理特征间的联系。结果48对标本中41例（85.42%）肾癌标本miR-16表达上调，统计学分析证实肾癌组织中miR-16表达量明显高于配对的癌旁正常组织（P＜0.01）。肾癌中miR-16表达量与患者性别、年龄、肾癌组织类型、TNM 分期、AJCC 临床分期无明显相关（P＞0.05）。结论 miR-16在肾癌标本中明显表达上调，提示其可能与肾癌的发生发展有关。
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miR-15a和miR-16通过调控bcl-2蛋白的表达逆转结肠癌细胞的耐药性
目的 研究miR-15a和miR-16靶向调控bcl-2的表达对结肠癌细胞耐药性的逆转作用.方法 将miR-15a和miR-16模拟物或抑制物转染结肠癌长春新碱(VCR)敏感细胞株HCT8或耐药细胞株HCT8/VCR,采用实时荧光定量PCR法检测miR-15a和miR-16的表达,Western blot法检测bcl-2和P糖蛋白(P-gp)蛋白的表达,细胞计数盒8(CCK8)法检测不同浓度VCR对HCT8和HCT8/VCR细胞生长的抑制作用.结果 实时荧光定量PCR法检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和转染miR-15a模拟物组HCT8/VCR细胞中miR-15a的相对表达量分别为1.00、0.87±0.24和223.44±59.07,转染模拟物后,miR-15a的相对表达量明显升高(P＜0.001);空白对照组、阴性对照组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞中miR-16的相对表达量分别为1.00、0.66±0.19和107.32±22.58,转染模拟物后,miR-16的相对表达量明显升高(P＜0.001).Western blot法检测结果显示,空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞中bcl-2蛋白的相对表达量分别为1.00、0.97±0.02、0.51±0.06和0.65±0.03,转染模拟物后,bcl-2蛋白的表达下调(P＜0.05).而P-gp蛋白的表达在转染模拟物后没有明显变化.CCK8法检测结果显示,经1、5、25和125 μg/ml VCR处理后,空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8/VCR细胞存活率的变化趋势基本一致,转染模拟物后,HCT8/VCR细胞的存活率明显降低(P＜0.05).实时荧光定量PCR法检测结果显示,转染抑制物后,HCT8细胞中miR-15a和miR-16的表达明显降低(P ＜0.001).Western blot法检测结果显示,转染抑制物后,HCT8细胞bcl-2蛋白的表达明显上调(P＜0.05),而P-gp蛋白的表达没有明显变化.CCK8法检测结果显示,转染抑制物后,HCT8细胞的存活率明显高于空白对照组(均P＜0.05).结论 miR-15a和miR-16可逆转结肠癌细胞的耐药性,其可能的机制是通过调控bcl-2蛋白的表达.
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miR-16表达载体的构建
目的 构建miR-16表达载体,为研完miR-16对HBV的干扰作用打下基础.方法 根据miRNA的成熟序列以及附近约100多碱基共270个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4联接到线性化的pSUPER质粒中,并对重组质拉(命名为pmiR-16)进行酶切及测序鉴定.结果 成功构建了重组质粒PmiR-16.结论 成功构建miR-16表达载体.
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miR-16对神经病理性疼痛模型大鼠脑干中缝核SERT表达作用的研究
目的 通过研究miR-16对神经病理性疼痛模型大鼠脑干中缝核中5羟色胺转运体(SERT)表达的作用,探讨miR-16通过作用于5羟色胺(5HT)再摄取影响神经病理性疼痛的可能机制.方法 选用雄性6周龄SD大鼠40只,采用慢性坐骨神经结扎法(chronic constriction injury,CCI)制备大鼠病理性神经痛模型.将大鼠随机分为4组:假手术组(S组),仅分离坐骨神经鞘不结扎;坐骨神经损伤组(CCI组),松弛结扎坐骨神经;坐骨神经损伤+氟西汀组(CCI/F组);对照组(C组),不做任何处理,每组10只.术前1d及术后第1、3、5、7、14天测定机械缩足痛阈值(MWT);14 d后处死大鼠,取大鼠脑干中缝核组织,通过实时定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-16表达情况;western blot检测SERT蛋白表达情况;组织匀浆后,ELISA法检测皮质组织内5羟色胺(5HT)浓度.结果 与术前相比,CCI组大鼠第1天MWT即出现下降,与S组相比差异具有统计学意义(t=5.167,P＜0.001),CCI/F组与S组相比MWT显著升高,差异具有统计学意义(t=4.664,P＜0.001),而S组及C组未见明显变化.qRT-PCR实验显示,与S组相比CCI组大鼠脑干中缝核组织匀浆中内源性miR-16表达显著降低(t=11.840,P＜0.001),CCI/F组升高(t=28.640,P＜0.001):western blot显示CCI组大鼠脑干中缝核SERT蛋白表达升高,CCI/F组SERT表达降低;ELISA实验显示CCI组皮质中5HT水平较S组显著降低(t=17.920,P＜0.001),而CCI/F组5HT水平升高(t=7.232,P=0.002),差异均具有统计学意义.结论 miR-16能够通过抑制脑干中缝核SERT表达,减少5HT再摄取影响病理性神经痛的维持.
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抑郁模型大鼠不同部位 miR-16 表达及其与 5-羟色胺转运体的关联性研究
目的 研究miR-16在慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠神经系统不同部位的表达及其与5-羟色胺(5-HT)转运体的关联性. 方法 对照组和慢性不可预知温和应激抑郁模型组大鼠各10只,模型组大鼠接受21天的不可预知温和应激刺激,对照组大鼠正常饲养. 两组大鼠麻醉后收集脑脊液,测定miR-16. 然后断头处死,分离前额叶皮质、中缝核、海马,测定miR-16和5-HT转运体蛋白. 结果 模型组大鼠脑脊液和中缝核的miR-16相对表达量低于对照组,中缝核miR-16与5-HT胺转运体呈负相关;而前额叶皮质和海马中的miR-16、5-HT转运体分别与对照组比较,差异均无统计学意义( P>0.05). 结论 中缝核miR-16可能通过调节5-HT转运体的表达,参与抑郁症的病理过程,脑脊液miR-16亦可能与抑郁症相关.
关键词： 慢性不可预知温和应激抑郁模型 miR-16 5-HT转运体 -
miR-16对小鼠胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖及新生血管化影响的在体实验研究
目的 探索miR-16对脑胶母细胞瘤细胞U87MG在体的增殖抑制作用.方法 通过携带miR-16基因的慢病毒感染U87MG细胞而获得miR-16过表达U87MG细胞,分别建立皮下移植瘤模型和原位脑胶质瘤模型.皮下接种后4周对皮下成瘤测算肿瘤生长曲线.颅内接种后3周对原位脑胶质瘤模型取鼠脑,测量瘤体大小,进行HE染色及cyclinD1、CD31免疫组化染色.结果 皮下成瘤后4周显示,过表达组无明显成瘤,而阴性对照组成瘤明显.原位成瘤后3周显示,过表达组胶质瘤成瘤(0.11 ±0.04)mm3明显小于阴性对照组(6.50±1.41) mm3和未感染组(6.41±0.91)mm3,差异有统计学意义(P＜0.05).cyclinD1免疫组化显示,过表达组胶质瘤阳性染色少于另外两组;CD31免疫组化显示,过表达组胶质瘤新生血管化(4.50±1.58)个/200倍,较阴性对照组(30.40±6.57) 个/200倍和未感染组(29.40士4.93)个/200倍减少,微血管计数(MVD值)差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-16能显著抑制脑胶质瘤细胞U87MG的在生长,这可能与抑制细胞增殖及使肿瘤血管新生减少相关.
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非吸烟女性肺腺癌组织中miRNAs的表达与表皮生长因子受体关系的研究
目的：探讨非吸烟女性肺腺癌(ADC)组织中miR-155、miR-16、miR-25及miR-133a的表达与表皮生长因子受体（EGFR）的关系及其临床意义。方法112例非吸烟女性ADC患者按EGFR类型分为EGFR野生型组（n=51）和EGFR突变型组（n=61）。用实时荧光定量PCR定量检测2组ADC组织中4种miRNAs的表达量，比较2组4种miRNAs表达水平的差异。4种miRNAs表达量以平均数分层为高表达组和低表达组，比较2亚组患者间的生存差异。按年龄（≤60岁，＞60岁）、EGFR类型和miRNAs的表达量分层，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归模型检验。结果 EGFR突变型组miR-25的表达水平高于EGFR野生型组（P<0.05）。不同年龄分层、不同EGFR类型组、miR-155、miR-16及miR-133a表达量患者的生存率差异无统计学意义，miR-25低表达者的生存率较高表达者更高（P<0.05）。在EGFR突变型组中4种miRNAs的表达量与ADC预后无关（P>0.05）；在EGFR野生型组中miR-16、miR-25、miR-133a低表达者较高表达者生存率更高（P<0.05）。Cox比例风险回归分析显示， miR-25高表达是非吸烟女性ADC患者预后死亡的独立危险因素（P<0.05）。结论 miR-25是非吸烟女性ADC的独立预后指标。miR-25在非吸烟女性ADC，特别是在EGFR野生型的患者中表达升高，可能提示患者预后不佳。
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miR-200C与miR-16在哮喘患儿血清及哮喘小鼠肺组织中的表达上调
目的 探讨miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达.方法 应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症.应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miR-200C与miR-16的表达.结果 与正常儿童相比,支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16表达水平显著升高(P＜0.01).哮喘小鼠模型组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数,炎症细胞浸润,肺组织miR-200C与miR-16表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论 miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达.
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miR-16及PTEN蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义
目的 探讨miR-16mRNA及PTEN蛋白和mRNA在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及意义.方法 实时定量PCR方法检测子宫内膜癌组织miR-16mRNA及PTEN mRNA的表达水平,Western blot方法检测子宫内膜癌组织PTEN蛋白表达;统计分析子宫内膜癌组织中miR-16与PTEN蛋白表达的相关性.结果 与癌旁正常组织相比,miR-16mRNA在子宫内膜癌组织中的表达水平明显升高(P＜0.01),PTEN蛋白和mRNA表达水平明显降低(P＜0.01),二者呈显著地负相关关系.结论 miR-16与PTEN在子宫内膜癌组织表达呈显著的负相关.
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慢性应激诱导的抑郁大鼠海马脑源性神经营养因子蛋白和miR-16的表达
目的 研究慢性应激对大鼠行为及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)和microRNA-16(miR-16)表达的影响.方法 在大鼠出生后1d,按窝别分为慢性应激组和对照组,各6只.慢性应激组大鼠在其出生后第1～14天每天接受6h母爱剥夺应激,然后喂养至10周龄时给予21d慢性温和应激,对照组不给予任何处理.两组大鼠均于13周龄时,采用强迫游泳、糖水偏爱和旷场试验测定大鼠的行为,采用免疫印迹法检测BDNF蛋白的表达情况,采用实时定量聚合酶链反应检测海马miR-16表达水平.结果 旷场实验中,应激组大鼠直立次数少于对照组(P＜0.05),而爬行总路程,中央格比例和大便颗数差异均无统计学意义(P＞0.05);强迫游泳实验中应激组大鼠的被动漂浮时间长于对照组(P＜0.05);糖水测验中应激组大鼠的糖水偏爱率低于对照组(P＜0.05).应激组大鼠海马BDNF蛋白表达量低于对照组(P＜0.05);应激组大鼠海马内miR-16的表达量高于对照组(P＜0.05).Pearson相关分析显示,两组大鼠的miR-16表达水平均与BDNF蛋白表达水平呈负相关(P＜0.05).大鼠直立次数和糖水偏爱率分别与海马内BDNF蛋白表达量与呈正相关(P＜0.05),与miR-16表达量呈负相关(P＜0.05)而被动漂浮时间与海马内BDNF蛋白表达量呈负相关(P＜0.05),与miR-16表达量呈正相关(P＜0.05).结论 慢性应激可导致大鼠抑郁样行为的出现及海马中miR-16与BDNF蛋白表达发生改变,并且大鼠的抑郁样水平与海马中miR-16和BDNF蛋白表达水平明显相关;大鼠海马中miR-16与BDNF蛋白可能参与了调节抑郁症的病理过程.
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miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与 凋亡的影响
背景与目的:miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一.该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡.该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsa-miR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响.结果:CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G1期细胞百分率数值明显下降,但S及G2/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05).miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡.结论:miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点.
关键词： miR-16 BEL-7402肝癌细胞 增殖 凋亡 -
miR-16在金黄色葡萄球菌脓毒症中的表达及意义探讨
目的 探讨miR-16表达水平与金黄色葡萄球菌脓毒症严重程度的关联性,进一步探讨其潜在的临床意义.方法 收集金黄色葡萄球菌脓毒症血液标本共计32例,脓毒性休克、严重脓毒症和一般脓毒症各8例,不同年龄段的健康对照24例;另外,收集革兰氏阴性菌脓毒症血液标本8例.用Trizol液裂解全血后提取microRNA,采用荧光定量PCR测定miR-16在不同组的表达水平(2-△△Ct法),用SPSS 13.0软件分析各组之间的统计学差异.采用SPSS 13.0软件将miR-16定量值与相应CRP和PCT值进行相关性分析.结果 miR-16表达水平与金黄色葡萄球菌脓毒症严重程度呈明显的负关联,各实验组与对照组相比均有统计学差异(P＜0.001),实验组之间也有统计学差异(P＜0.01).miR-16表达水平与CRP和PCT值呈负相关性,相关系数分别为-0.561和-0.769.结论 miR-16表达与金黄色葡萄球菌脓毒症有明显的负关联性,提示其可能作为该菌脓毒症严重程度的标记物.
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LPS诱发急性肺损伤中miR-16的表达及功能研究
目的 观察脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤中microRNA-16 (miR-16) 的表达变化及其对炎症因子TNF-ɑ等表达的调节.方法 通过生物信息学分析不同物种间miR-16基因序列的保守性.通过小鼠气道向其肺内注入LPS(10 mg·kg-1),构建小鼠急性肺损伤模型,采用实时荧光定量PCR分析miR-16、IL-6、TNF-ɑ的表达水平;在培养的肺上皮细胞A549中采用miR-16 mimic对miR-16进行过表达研究.结果 miR-16基因序列在斑马鱼、大鼠、小鼠和人中序列高度保守;miR-16在急性肺损伤病理过程中表达明显降低(P＜0.05);A549细胞中miR-16的表达水平显著升高(P＜0.01),相反,LPS诱导的炎症因子IL-6、TNF-ɑ的表达水平显著降低(P＜0.05).结论 miR-16在LPS诱发的急性肺损伤病理过程中的表达降低,miR-16过表达能够显著抑制LPS对炎症的诱发作用,表明miR-16在急性肺损伤的炎症发生过程中发挥着重要功能.
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鞘内注射miR-16模拟物对骨癌痛大鼠行为及其靶基因BDNF表达的影响
目的 探讨miR-16在骨癌痛大鼠脊髓中表达量的变化规律及鞘内注射miR-16模拟物(miR-16 mimics)对骨癌痛大鼠行为学及其靶基因BDNF表达的影响.方法 在大鼠右侧胫骨骨髓腔注入Walker 256乳腺癌细胞建立骨癌痛模型后,采用real-time PCR的方法检测假手术组(S组)和骨癌痛组(BCP组)造模前1d,造模后3,5,7,10和14 d脊髓miR-16的表达量变化;在造模后10d,11d,12d,BM组大鼠鞘内注射miR-16 mimics,BN组鞘内注射对照序列,检测大鼠行为学变化,造模后14 d测完行为学处死大鼠检测脊髓BDNF的表达变化.结果 与S组和基础值相比,骨癌痛组大鼠术后5d～14d脊髓水平miR-16的表达量呈时间依赖性下调,5 d(0.91±0.04),7 d(0.77±0.01),10 d(0.73±0.03),14 d(0.42±0.08),(均P＜0.05);造模后14 d,miR-16靶基因BDNF在BN和BP组大鼠脊髓中的表达量明显升高(2.78±0.31)(2.34±0.23)(均P＜0.01),而鞘内注射miR-16 mimics可明显降低骨癌痛大鼠的机械痛阈及其脊髓水平BDNF的表达(1.42±0.16)(P＜0.01).结论 miR-16在骨癌痛大鼠脊髓水平表达呈时间依赖性下调,鞘内注射miR-16的模拟物能够缓解骨癌.
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肝脏内源性microRNA调控乙型肝炎病毒基因的表达与复制
目的 探讨肝脏内源性microRNA对乙型肝炎病毒(HBV)复制与基因表达的影响.方法 通过miRNA靶点分析软件寻找与HBV序列之间相关联的肝脏内源性microRNA, 体外化学合成相应的microRNA分子,将合成寡核苷酸及对照与1.3倍HBV全基因组真核表达质粒pUC18-HBV1.3采用Lipofectamine2000共转染HepG2细胞,转染48 h后收集细胞培养上清;通过ELISA检测HBsAg、HBeAg的表达水平; Western 印迹检测HBcAg的表达水平;Trizol抽提转染细胞RNA,逆转录后用荧光定量PCR检测HBV mRNA的水平; 提取细胞基因组DNA, Southern印迹检测HBV的复制中间体.经以上检测从HBV蛋白表达、转录和复制水平评价相应的microRNA作用效应.结果 生物信息学方法提示miR-16和 miR-122存在与HBV 基因组作用的可能结合位点.经试验初步证实miR-16可下调HBV蛋白的表达及HBV DNA水平;miR-122可下调HBsAg、HBeAg的表达,上调HBV mRNA的水平.结论 肝脏内源性microRNA可以调节HBV的复制与基因表达.
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人miR-16真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建人miR-16真核表达载体,为研究其基因表达调控机制建立实验基础.方法 从人类基因组 DNA中扩增miR-16的前体序列,引入酶切位点和polyT转录终止序列,酶切后插入siRNA表达载体pSuper中,构建miR-16真核表达载体pmiR-16,然后进行酶切和测序鉴定;同时构建含miR-16完全互补序列及乙肝表面抗原HBsAg的报告质粒pXF3H-HBs.将pmiR-16与pXF3H-HBs共转染肝癌细胞系HepG2,通过HBsAg ELISA检测试剂盒检测表达产物HBsAg的改变,鉴定真核表达载体pmiR-16的生物学活性.结果 成功构建了人miR-16真核表达载体pmiR-16及其报告质粒.pmiR-16与pXF3H-HBs共转染HepG2后,pmiR-16组HBsAg的基因表达与对照组相比显著降低,证实pmiR-16转染真核细胞后具有生物学活性.结论 miR-16真核表达载体的成功构建为进一步研究其基因表达调控机制建立了实验基础.
