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抗纤灵对5/6肾切除小鼠转化生长因子-β及其下游因子表达的影响
目的 观察抗纤灵对5/6肾切除小鼠肾组织转化生长因子-β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 随机从50只C57小鼠中取40只建立5/6肾切除慢性肾衰肾纤维化模型,术后2周根据肌酐值将40只小鼠分为抗纤灵低、中、高剂量治疗组和模型组,每组10只.另10只小鼠为假手术组.治疗12周后,用western blot法、RT-qPCR 法分别测定各组小鼠肾组织TGF-β、CTGF蛋白及mRNA表达水平.结果 模型组小鼠肾组织TGF-β、CTGF蛋白及mRNA表达较假手术组升高(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵中、高剂量组小鼠肾组织TGF-β及CTGF蛋白、mRNA表达下调(P＜0.01),两剂量组间TGF-β、CTGF的蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抗纤灵中、高剂量治疗组均能下调5/6肾切除小鼠肾组织TGF-β、CTGF蛋白及mRNA表达,两剂量治疗组间尚不存在量效相关性.提示抗纤灵可能通过调控TGF-β及其下游因子延缓肾纤维化,保护残肾功能.
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抗纤灵水煎剂对慢性肾衰模型小鼠PI3K-AKT-mTOR mRNA表达的影响
目的:探讨不同剂量的抗纤灵水煎剂对慢性肾衰模型小鼠磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸及苏氨酸蛋白激酶(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mRNA表达的影响,并探讨其作用机制.方法:C57 BL/6J小鼠50只采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化小鼠模型,同时设立假手术组10只,造模成功的小鼠随机分为模型组,雷帕霉素组(0.8 mg·kg-1),抗纤灵水煎液低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg-1),连续ig8周后处死小鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测PI3K-AKT-mTOR mRNA表达的含量.结果:与假手术组比较,模型组小鼠肾组织纤维化组织增多,肾损伤评分明显升高,PI3K-AKT-mTOR mRNA表达明显增强,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,雷帕霉素组和抗纤灵各剂量组肾组织纤维化减轻,PI3K-AKT-mTOR mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01);与雷帕霉素组比较,抗纤灵水煎液中、高剂量与雷帕霉素组间无显著性差异,低剂量组疗效差于雷帕霉素(P＜0.05),高、中、低剂量组比较,低剂量组与高、中剂量组之间有明显差异(P＜0.05),高、中剂量组之间无显著性差异.结论:抗纤灵水煎液可降模型小鼠表达PI3K-AKT-mTOR mRNA的表达,减轻肾脏纤维化纤维化,抗纤灵水煎液中、高剂量与和雷帕霉素等同.
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抗纤灵有效单体对活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株的影响
目的:观察抗纤灵有效单体对活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株的影响.方法:采用体外培养肾成纤维细胞株和系膜细胞株的方法,将其分为空白对照组、TGF-β12ng/mL组、TGF-β12ng/mL+中药10-5g/mL组和TGF-β12ng/mL+中药10-6g/mL组.采用MTT法观察24h中药单体对两种细胞株的作用以及ELISA法对TGF-β的分泌情况.结果:与空白对照组相比,加入TGF-β1刺激因子可以促进两种细胞株的活化(P＜0.05),以及TGF-β的分泌(P＜0.01),中药单体可以抑制活化的细胞株增殖和TGF-β的分泌(P＜0.05,P＜0.01).结论:抗纤灵中药单体可以抑制活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株增殖,有效防治肾纤维化,其作用机制可能与其抑制TGF-β的分泌有关.
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抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β和Ⅰ型胶原的抑制作用
目的 观察抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β(TGF-β)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ)的抑制作用.方法 将抗纤灵方煎至含原药材3.2 g/mL,福辛普利配成含药0.33 mg/mL,给大鼠灌胃(正常组给予蒸馏水灌胃),制备抗纤灵血清、福辛普利血清和正常血清.用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、TGF-β1组、TGF-β1＋福辛普利组和TGF-β1＋抗纤灵组.以大鼠肾组织体外培养骨髓来源的成纤维细胞为材料,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检测骨髓来源的成纤维细胞collagenⅠ和TGF-β的表达.结果 加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β和CollagenⅠ较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及福辛普利药物血清可明显抑制其表达.结论 抗纤灵药物血清可以通过抑制骨髓来源的成纤维细胞TGF-β的表达,减少细胞外基质collagenⅠ的沉积,从而延缓肾纤维化的进程.
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抗纤灵方有效单体对5/6肾切除大鼠细胞外基质成分的影响
目的：观察抗纤灵方有效单体对5/6肾切除模型大鼠肾功能及细胞外基质成分的影响,为抗肾纤维化有效中药的筛选提供依据。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、大黄酚组、丹参多酚酸A组、齐墩果酸组、氯沙坦钾组。采用手术方法建立大鼠肾纤维化模型,各给药组给予相应药物干预2个月后,观察肾脏病理变化,检测大鼠肾功能水平,并采用实时定量 PCR 法检测大鼠肾组织的层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(C-Ⅲ)、Ⅰ型胶原(C-Ⅰ)mRNA 的表达。结果模型组大鼠尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)显著升高,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；丹参多酚酸A组大鼠SCr、BUN显著下降,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；丹参多酚酸 A 组与氯沙坦组比较,BUN 明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。各单体组能不同程度降低C-Ⅲ、C-Ⅰ、LN的表达。结论抗纤灵方有效单体可通过降低细胞外基质成分的表达而起到抗纤维化、改善肾功能作用。
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抗纤灵药物血清对人肝癌细胞体外生长的抑制及机理研究
目的:研究抗纤灵的抑癌作用及分子机理.方法:采用人肝癌细胞(HepG2)体外培养,血清药理学及免疫组织化学等方法.结果:含抗纤灵血清18、9、3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率分别为63.09%±5.08%,55.09%±4.09%,48.08%±4.08%,细胞毒活性分别为48.06%±4.08%,38.09%±5.01%,25.00%±4.1 3%,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清比较,差异有显著性或无显著性(P＜0.05或P＞0.05).含抗纤灵血清1 8、9、3g/kg体重各组HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组((P均＜0.01).结论:抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机理与该方提高HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达有关.
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抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究
目的 探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)所致肾纤维化的作用及机理.方法 雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只.用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)mRNA和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TGF-β1受体(TβRⅠ及TβRⅡ)及肝细胞生长因子受体(C-Met)蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ、C-Met蛋白表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调.中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβR Ⅰ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调.结论 抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβR Ⅰ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGFmRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能.
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抗纤灵颗粒剂对尿毒症维持性血液透析患者微炎症状态的影响
目的 观察抗纤灵颗粒剂对尿毒症维持性血液透析患者微炎症状态的影响.方法 将尿毒症维持性血液透析患者78例随机分为治疗组40例和对照组38例,并设15名健康组进行对照.治疗组和对照组均予对症处理,治疗组在此基础上口服抗纤灵颗粒剂,8周为1个疗程,治疗2个疗程后检测C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及血浆白蛋白(A1B)、前白蛋白(PAB)、血红蛋白(Hb)、转铁蛋白(TF),并计算患者体重指数(BMI)、透析充分性(Kt/V)等指标.结果 尿毒症维持性血液透析患者各项指标与健康组比较差异有统计学意义(JP＜0.05).治疗后治疗组血IL-6、CRP、TNF-a水平有明显下降,与治疗前及对照组治疗后比较差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组A1B、PAB、TF、BMI均有提高,与治疗前及对照组治疗后比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用抗纤灵颗粒剂可以在一定程度上改善尿毒症维持性血液透析患者的微炎症状态.
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抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响
目的 采用5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组以5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,1周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组、福辛普利组和抗纤灵组.福辛普利组给予3.3 mg·kg-1·d-1福辛普利灌胃,抗纤灵组给予23 g·kg-1·d-1抗纤灵灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,8周后采用免疫组化、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达.结果 模型组大鼠肾组织中肾小管及间质区Ⅰ型胶原及α-SMA表达较假手术组明显升高(P<0.01),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01);模型组大鼠表达α-SMA mRNA和Ⅰ型胶原mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01或P<0.05);模型组大鼠表达α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均显著下降(P<0.001).结论 抗纤灵可降低肾间质成纤维细胞α-SMA的表达,减少肌成纤维细胞的活化与形成,继而使细胞外基质Ⅰ型胶原生成减少,从而延缓慢性肾衰竭大鼠肾纤维化进程,保护残肾功能.
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何立群教授应用抗纤灵系列方治疗肾脏纤维化经验
介绍何立群教授应用抗纤灵方、抗纤灵二号方治疗肾脏纤维化的经验.何教授根据血瘀贯穿慢性肾脏病各个阶段的特点,提出早、中期慢性肾功能衰竭即使没有血瘀证的典型表现,也要给予活血化瘀抗纤维化的治疗原则.
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抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用
目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.
关键词： 抗纤灵 肝细胞癌 P21WAFI/CIP1 -
何立群教授运用抗纤灵治疗慢性肾脏纤维化的经验?
何立群教授是上海中医药大学附属曙光医院肾内科主任、上海中医药研究院肾病研究所所长、博士研究生导师，擅长活血化瘀法治疗慢性肾脏纤维化，并依据多年的临床经验，认为慢性肾脏纤维化属于中医“水肿”、“虚劳”、“癃闭”等范畴，基本病机为肾虚血瘀，故治疗应以活血化瘀为主，在此基础上，创立了中药汤剂--抗纤灵，经前期10余项临床实验及50余项动物实验证明，其对慢性肾脏纤维化具有很好的疗效。笔者有幸跟老师学习，受益颇深，现就其抗纤灵的成方依据及临床运用做以总结分析，以便抛砖引玉。
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抗纤灵对肾小球硬化大鼠脂质代谢和24h尿蛋白定量的影响
目的:观察抗纤灵对5/6肾切除所致肾小球硬化大鼠肾功能、血脂和24h尿蛋白定量的影响.方法:采用5/6肾切除法建立肾小球硬化大鼠模型,4周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组和抗纤灵低、中、高剂量治疗组,8周后测定各组大鼠肾功能、血脂和24h尿蛋白定量.结果:模型组大鼠血肌酐、尿素氮、血脂水平和24h尿蛋白定量较正常组明显升高(P＜0.01);3个剂量治疗组与模型组比较均明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:抗纤灵可通过降低模型大鼠血脂和24h尿蛋白定量延缓肾小球硬化进展.
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抗纤灵对慢性肾衰心脏病变小鼠NO、ADMA、NT-proBNP影响
目的:观察抗纤灵对5/6肾切除小鼠慢性肾功能衰竭心脏病变NO、ADMA、NT-proBNP的影响, 从氧化应激的角度探讨抗纤灵治疗慢性肾功能衰竭心脏病变的作用机制.方法:按Platt法建立慢性肾衰小鼠模型, 造模成功后, 随机将手术组小鼠分为模型组、缬沙坦组、抗纤灵组.抗纤灵组予抗纤灵方煎剂0.5 m L灌胃, 药物浓度为20 g/kg, 每日1次;缬沙坦组予缬沙坦0.5 m L灌胃, 药物浓度为20 mg/kg, 每日1次;模型组和假手术组均予等量蒸馏水灌胃, 连续灌胃22周.22周后取材, 测量各组小鼠的心脏质量指数, 生化法检测小鼠血清NO水平, Elisa法检测ADMA、NT-proBNP水平.结果:与假手术组比较, 模型组的心脏质量指数、ADMA、NT-proBNP显著增高 (P＜0.01), NO明显降低 (P＜0.01) .与模型组比较, 抗纤灵组的心脏质量指数有改善 (P＜0.05), NO、ADMA、NT-proBNP有显著改善 (P＜0.01) .缬沙坦组的心脏质量指数、NO、ADMA、NT-proBNP明显改善 (P＜0.01) .抗纤灵组与缬沙坦组组间比较, 缬沙坦在改善NT-proBNP和心脏质量指数方面优于抗纤灵组 (P＜0.05), 抗纤灵组在降低ADMA、升高NO方面优于缬沙坦 (P＜0.05) .结论:抗纤灵能通过调节氧化应激水平改善慢性肾功能衰竭引起的心脏病变.
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抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织核因子κB、血管紧张素Ⅱ及其受体表达的影响
目的:观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织核因子KB(NF-κB)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)及其受体(ATlR)表达的影响.方法:采用5/6肾切除法建立慢性肾衰大鼠模型,4周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组和抗纤灵低、中、高剂量治疗组,8周后测定肾组织NF-κB、ATⅡ和ATlR-mRNA表达.结果:模型组大鼠肾组织NF-κB及ATⅡ、ATlRmRNA表达均较正常组明显升高(P＜0.01);三个剂量治疗组与模型组比较均有不同程度下降.结论:抗纤灵可通过降低模型大鼠肾组织NF-kB及ATⅡ、AT1RmRNA表达延缓肾纤维化进展.
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抗纤灵对慢性肾功能衰竭骨代谢影响的临床研究
目的 观察抗纤灵治疗早中期慢性肾功能衰竭(CRF)的临床疗效及其对骨代谢的影响.方法 将早中期61例CRF患者随机分为治疗组31例和对照组30例,分别给予抗纤灵冲剂和蒙诺治疗,疗程两个月.观察治疗后各组患者肾功能、钙磷代谢、血甲状旁腺激素(PTH)的变化及临床症状改善情况.结果 抗纤灵能降低血肌酐(Scr)、PTH,升高血钙(P＜0.05),临床总体疗效优于蒙诺(P＜0.05).结论 抗纤灵可改善CRF患者的肾功能及负钙平衡,具有降低早中期慢性肾衰PTH水平的作用.
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抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠Akt-mTOR信号通路的影响
目的 观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾脏纤维化小鼠磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及Akt,mTOR mRNA表达的影响,从Akt-mTOR信号通路角度探讨抗纤灵的作用机制.方法 C57BL/6J雄性小鼠采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化模型.2周后根据肌酐水平将手术组小鼠分为模型组、雷帕霉素组和抗纤灵组,同时设立假手术组,每组10只.雷帕霉素组、抗纤灵组分别给予雷帕霉素(0.8 μg/g)、抗纤灵(20 g/kg)每天0.5 ml灌胃治疗,模型组和假手术组灌胃等量蒸馏水.连续用药8周后处死小鼠,检测各组小鼠肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白(24 h UP)含量;采用蛋白质印迹法(Western blotting)、RT-PCR检测肾脏组织中p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、mTOR mRNA的表达.结果 与假手术组比较,模型组Scr、BUN、24 h UP、p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、mTOR mRNA显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,雷帕霉素组、抗纤灵组Scr、UN、24 h UP、p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt,mTOR mRNA均有所降低(P＜0.05,P＜0.01).雷帕霉素组与抗纤灵组比较,在降低Scr、24 h UP方面,抗纤灵组明显优于雷帕霉素组(P＜0.05);在降低p-mTOR蛋白及mTOR mRNA方面,雷帕霉素优于抗纤灵组(P＜0.05).结论 抗纤灵可能通过调节Akt-mTOR信号通路,对肾纤维化有一定的改善作用.
关键词： 抗纤灵 慢性肾纤维化 Akt-mTOR信号通路 -
抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠模型不同时期Col Ⅰ、α-SMA、FN的影响
目的 观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠模型不同时期Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 小鼠随机分为假手术组、模型组、雷帕霉素和抗纤灵组,前2组给予生理盐水、后2组分别给予雷帕霉素(0.16 mg/100 g)、抗纤灵(2g/100 g),灌胃8周和12周后取材,采用West-ern blot和RT-PCR法检测各组小鼠肾组织Col Ⅰ、α-SMA、FN的变化.结果 第12周与8周比较,假手术组各指标无明显变化,模型组上述指标明显增高;与模型组比较,第8、12周时,雷帕霉素,抗纤灵组指标均有所下降;雷帕霉素与抗纤灵比较,8周时,在Col Ⅰ、α-SMA蛋白及mRNA表达方面,雷帕霉素优于抗纤灵,第12周时组间无显著性差异.结论 随着造模后时间的延长,纤维化指标Col Ⅰ、α-SMA、FN蛋白和mRNA表达水平逐步升高,雷帕霉素、抗纤灵能够降低上述指标的表达水平,第8周时,抗纤灵稍差于雷帕霉素;第12周时,抗纤灵和雷帕霉素具有相似的作用.
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抗纤灵治疗血吸虫病肝纤维化效果及B超影像变化
为探讨血吸虫病肝纤维化的早期防治途径,1996年我们运用B超影像学技术作为诊断和疗效评价指标,用中药制剂抗纤灵治疗慢性血吸虫病肝纤维化(简称慢血肝纤)患者32例,取得较好疗效.现报告如下.
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抗纤灵治疗慢性肾功能衰竭的动物实验研究述评
抗纤灵是何立群教授多年的经验方,经反复临床实验证明,具有较好的临床疗效.近10年来,笔者在不断总结其疗效的基础上,采用不同的造模方式,运用不同品系的动物,采取不同形式的给药途径,围绕着引起肾纤维化的四大因素,从致炎因子或炎症因子、促纤维因子(细胞因子,生长因子,血管活性因子的表达,趋化黏附因子)、纤维化形成因子、肾结构和功能改变等方面着手,结合信号通路,对抗纤灵机制及疗效做了详细的观察和探讨,结果表明抗纤灵能够通过部分信号通路,影响肾纤维化的部分指标,进而抑制肾脏纤维化,延缓肾功能衰竭.同时,通过总结,发现仍有许多需要改进的地方,为今后抗纤灵的进一步研究提供新的思路和方向.
