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芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管生成抑制因子干预作用的机制研究
目的 研究芍甘附子汤(SGFZ)加味对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜内皮抑素(ES)、血管生成抑素(AS)蛋白表达水平的影响.方法 健康雌性Wistar大鼠60只,分为正常组10只和造模组50只,采用牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂建立大鼠CIA模型.造模成功后分组,正常组、模型组给予等量蒸馏水灌胃,雷公藤多甙组按8.75 mg/(kg·d)灌胃,SGFZ加味小、中、大剂量组依次按每毫升药液含0.708、1.42、2.83 g生药灌胃,均为每日1次,连续给药28天.造模后第0、14、28、42、56天观察大鼠关节炎指数(AI),灌胃治疗结束后Western blot法检测ES、AS表达水平.结果 与正常组比较,造模组AI评分显著升高(P＜0.01);经药物治疗后,与模型组比较,雷公藤多甙组与SGFZ加味大、中剂量组AI评分降低(P＜0.01).与正常组比较,模型组ES、AS蛋白表达水平均下调(P＜0.01);与模型组比较,雷公藤多甙组和SGFZ加味各剂量组ES蛋白表达水平均上调(P＜0.01),SGFZ加味大、中剂量组AS蛋白表达水平上调(P＜0.01).结论 SGFZ加味可有效改善CIA大鼠关节肿胀程度,其作用机制可能与调节ES、AS蛋白表达水平有关.
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内皮抑素和血管生成抑素融合基因修饰的单纯疱疹病毒对胶质瘤干细胞杀伤作用的实验研究
目的 探讨内皮抑素和血管生成抑素(Endo-Angio)融合基因修饰的单纯疱疹病毒(VAE)对胶质瘤干细胞(GSCs)荷瘤裸鼠胶质瘤的溶瘤作用.方法 采用人脑胶质瘤标本经原代培养获得稳定传代的GSCs,构建裸小鼠脑内原位GSCs移植瘤模型,瘤内注射VAE治疗,通过MRI观察VAE对GSCs荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响,RT-PCR和Western blot检测Endo-Angio融合蛋白的表达,免疫组化CD31染色检测其对微血管密度(MVD)的影响;观察病毒处理后荷瘤裸小鼠的生存情况.结果 (1)从36例胶质母细胞瘤标本中培养出6例稳定传代的GSCs,能够表达CD133,具有自我更新和多向分化能力.(2)VAE感染GSCs荷瘤裸鼠10d后,有Endo-Angio融合基因和蛋白的表达,该融合蛋白使MVD明显降低(p＜0.05).(3)MRI检查发现VAE感染GSCs荷瘤裸鼠后,颅内肿瘤体积明显减小.(4)GSCs荷瘤裸鼠感染VAE后生存时间明显延长(P＜0.05).结论 VAE能感染GSCs荷瘤裸鼠并表达Endo-Angio融合蛋白,杀伤GSCs的同时抑制肿瘤血管生成,为脑胶质瘤病毒-基因治疗开辟了新的途径.
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联合转染p53与血管生成抑素基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响
目的 探讨联合转染p53和血管生成抑素(AS)基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响.方法 用脂质体转染法分别将p53、AS基因、p53和AS基因转染人胃癌细胞系SG7901.以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过细胞集落形成实验、MTT生长曲线、细胞周期检测观察其生物学特性变化.结果 p53或AS基因均能抑制转染细胞的生长,而联合转染两种基因的细胞生长抑制更明显.结论 p53和AS基因具有协同抑制恶性肿瘤细胞生长作用,提示联合多种基因可能有利于恶性肿瘤的基因治疗.
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血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究
目的：将从人胎肝组 织克隆的 血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化，检测重组endostatin的生物学活性。方法：利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin，利 用肝素Sepharose亲和层析及Sephacryl S-200分子筛纯化；通过体外内皮细胞（ECV304） 增殖实验及体内鸡胚尿囊膜（CAM）新生血管实验检测其抑制活性。结果：Endostatin在DH5α中的表达率为28.5%，纯化后纯度可达90.5%。Endostatin可明显抑 制体外培养的内皮细胞增殖，IC50为72 μg/ml；20 μg/ml时使细胞于48 h发生明显 凋亡；200 μg/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%。 结论：研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用，提示其在肿瘤及新生血管性疾病 的治疗中有潜在的应用前景。
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血管生成抑素的原核表达及纯化
目的:构建血管生成抑素(angiostatin)的原核表达载体,并转入大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化.方法:设计引物扩增angiostatin的cDNA,然后亚克隆入原核表达载体pET32a,并转化入大肠杆菌BL21中诱导表达.结果:通过重组质粒酶切和测序分析等方法,筛选出重组阳性克隆,转化入大肠杆菌BL21中诱导表达,并纯化成功.结论:通过构建的原核表达,获得了纯化的angiostatin蛋白.
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血管生成抑素、K-5和内皮抑素抑制眼新生血管的研究进展
血管生成抑素、K-5和内皮抑素均是内源性新生血管抑制因子,结构上分别是纤维蛋白溶酶原和胶原ⅩⅧ的酶解片段.基因治疗眼新生血管方面的研究不断取得进展,本文对其进行了综述.
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联合转染血管生成抑素和Fas基因对裸鼠移植瘤生长的影响
目的 探讨联合转染血管生成抑素(AS)基因和Fas基因对移植于裸鼠的人结肠癌生长的影响.方法 构建pcDNA3-AS和pcDNA3-Fas质粒,建立裸鼠皮下移植人结肠癌模型,通过瘤内注射分别将As、Fas、As和Fas基因转染皮下肿瘤,定期检测肿瘤大小,用免疫组化检测肿瘤的微血管密度(MVD).结果 成功构建了pcDNA3-AS和pcDNA3-Fas质粒.质粒转染后6 d,Fas组和联合转染组的肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05);质粒转染后9 d.As组的肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05);质粒转染后12 d,联合转染组的肿瘤体积明显小于Fas组和AS组(P＜0.05).质粒转染后15 d,联合转染组和AS组肿瘤的MVD明显小于对照组(P＜0.05).结论 联合转染AS和Fas基因对裸鼠移植人结肠肿瘤有协同抑制作用.
