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中药调控血脑屏障对Aβ的转运＊
阿尔茨海默病发病（Alzheimer’s Disease，AD）主要病理改变是脑组织中β-淀粉样蛋白（β-amyloid Protein，Aβ）的异常堆积所形成的淀粉样老年斑块（Senile Plaques，SP）。血脑屏障(Blood-brain Barrier，BBB)可以调控Aβ脑内的代谢，通过相关的转运体完成Aβ的跨血脑屏障转运。本文主要通过介绍血脑屏障晚期糖基化终产物受体（Receptor for Advanced Glycation End Products，RAGE）及低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（Low Density Lipoprotein Receptor-related Protein-1，LRP-1）这两个主要转运体来阐释Aβ的脑内堆积及其产生的炎性因子对神经元毒性的作用机理，由此进一步探讨利用中医药对血脑屏障RAGE与LRP-1两种转运蛋白的调节，减少Aβ脑内的异常沉积、缓解脑内炎症反应，保护脑神经元。
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异常黏液质成熟剂对APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆和脑组织RAGE、LRP1蛋白表达的影响
目的：观察异常黏液质成熟剂对APP/PS1转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆和脑组织RAGE、LRP1蛋白表达的影响，探讨其作用机制。方法选取3月龄APP/PS1转基因AD模型小鼠并将其随机分为模型组、阳性药组和异常黏液质成熟剂高、中、低剂量组，每组18只，另取18只3月龄C57BL/6J小鼠作为正常组。各给药组给予相应药物灌胃，连续6个月。跳台实验观察小鼠学习和记忆能力；免疫组化和Western blot检测LRP1、RAGE蛋白表达。结果与正常组比较，模型组学习成绩反应期时间和错误次数增加，记忆成绩潜伏期时间减少、错误次数增加（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组学习成绩反应期时间和错误次数减少，记忆成绩潜伏期时间增加、错误次数减少（P＜0.05，P＜0.01）；免疫组化和Western blot结果显示，与正常组比较，模型组小鼠脑组织LRP1表达降低、RAGE表达增加（P＜0.05)；与模型组比较，异常黏液质成熟剂各剂量组小鼠脑组织 LRP1表达增加、RAGE 表达降低（P＜0.05，P＜0.01)。结论异常黏液质成熟剂可改善APP/PS1转基因AD小鼠空间学习记忆能力，调整RAGE和LRP1的表达。
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糖基化终产物和高糖对小牛主动脉血管细胞的损伤作用
目的研究糖基化终产物(AGEs)和高浓度葡萄糖对血管细胞的损伤及对其糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响.方法分别用10 g/L糖基化终产物、10 mol/L葡萄糖和两者的混合作用于牛主动脉血管细胞,利用生化方法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)、还原型谷胱甘肽(GSH)和NO2-/NO3-的含量,用MTF法测定细胞的活性.用CELL-ELISA和RT-PCR检测细胞RAGE的表达.结果与正常组(C)相比,高糖组(G)、AGEs组(A)和联合损伤组(G+A)对主动脉内皮细胞的生长有明显的抑制作用(P＜0.01)和对平滑肌细胞的生长有明显的促进作用,主动脉血管细胞LDH的泄漏量明显增高,GSH和NO2-/NO3-的含量明显减少(P＜0.01);且在联合损伤组的作用强.同时,联合损伤组血管细胞的RAGE表达水平明显高于AGEs组和高糖组.结论 AGEs比高浓度葡萄糖更具损伤血管细胞的作用,且AGEs与高糖联合作用对细胞的损伤为明显,这种联合损伤的过程也是通过RAGE介导的.
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HMGB-1促进人支气管上皮细胞炎性反应的机制
目的 研究细胞外高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)诱导人正常支气管上皮细胞(NHBE)炎性反应的作用机制.方法 实验分组为空白对照组、HMGB-1组、HMGB-1+RAGE抗体(RAGE-Ab)组、HMGB-1+JNK抑制剂SP600125组、RAGE-Ab组.采用免疫荧光技术分析RAGE蛋白的表达;ELISA实验检测NHBE细胞上清液中的炎性细胞因子TNF-α、IL-8、IL-10和MCP-1的水平;采用蛋白免疫印迹分析RAGE、p-JNK和p-NF-κB p65蛋白的表达.结果 HMGB-1能剂量依赖性的诱导RAGE蛋白的表达.在浓度为5和10μg/ml时,与空白对照组相比HMGB-1能显著增加荧光的强度(P<0.05),HMGB-1+RAGE-Ab组RAGE表达显著下降(P<0.05),而HMGB-1+SP600125组RAGE蛋白的表达没有显著变化.与空白对照组相比,用HMGB-1处理后TNF-α、IL-8、IL-10和MCP-1的水平均显著增加(均P<0.05),HMGB-1+RAGE-Ab组和HMGB-1+SP600125组各炎性因子的释放均显著下降(均P<0.05).与空白对照组比较,用HMGB-1处理NHBE细胞后RAGE、p-JNK和p-NF-κB p65蛋白表达呈现剂量依赖性增加(P<0.05),HMGB-1+RAGE-Ab组中RAGE、p-JNK和p-NF-κB p65蛋白的表达显著下降(P<0.05),而HMGB-1+SP600125组中p-JNK和p-NF-κB p65蛋白的表达显著下降(P<0.05),但RAGE的表达没有显著变化.结论 NHBE细胞中HMGB-1诱导的炎性反应是通过RAGE/JNK/NF-κB信号通路介导的.
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可溶性晚期糖基化终产物受体与糖尿病慢性并发症
晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)是糖尿病血管并发症产生的关键因素之一.AGEs与血管内皮晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)结合,刺激活性氧(ROS)生成,血管内皮细胞凋亡、脱落,内皮细胞损伤,低密度脂蛋白沉积于损伤部位,导致微血管的玻璃样变;在大血管则导致血管平滑肌细胞增生,动脉粥样硬化斑块形成.所以,AGEs与RAGE结合启动一系列连锁反应是导致糖尿病微血管病变和心脑血管事件发生的原因之一;如果抑制.AGEs与RAGE结合及作用,可从源头抑制糖尿病慢性并发症(DCC)发生发展,本文就近年来可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)在糖尿病诊治中的作用机制研究进展进行综述.
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泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠模型的治疗作用以及对RAGE/NF-κB信号通路的影响
目的 探讨泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠模型的治疗作用以及对RAGENF-κB信号通路的影响.方法 随机选取糖尿病肾病(DN)大鼠模型(♂)60只,随机数字表法进行分组,根据治疗方式分为中药组、西药组、联合组、模型组,各15只DN大鼠模型,另随机选取同批次健康SD大鼠(♂)作为对照(对照组),中药组给予单纯泄浊解毒、活血通络方治疗,西药组给予单纯厄贝沙坦片治疗,联合组采用单纯泄浊解毒、活血通络方联合厄贝沙坦片治疗,模型组与对照组均给予生理盐水治疗,干预4月,观察治疗效果和肾脏晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)及细胞核因子-κB(NF-κB)的表达水平.结果 四组DN大鼠给药前平均体重明显较健康对照组轻,与对照组比较(p＜0.05),四组DN大鼠模型给药前空腹血糖水平均明显高于健康对照组,差异比较(p均＜0.05);中药组、西药组和联合组三组大鼠平均体重均大于模型组,差异比较(p＜0.05),而中药组和联合组小鼠体重变化较西药组更为显著,与西药组比较(p均＜0.05).模型组空腹血糖水平持续升高,而中药组、西药组和联合组均降低,但仍高于对照组,差异比较(p均＜0.05),联合组和中药组GLU均值明显低于西药组,差异比较(p均＜0.05);四组DN模型大鼠FINS水平均明显低于对照组(p均＜0.05),治疗三组大鼠FINS水平与模型组比较(p均＜0.05),中药组和联合组与西药组比较(p均＜0.05);治疗后三组大鼠HbAlc水平均低于模型组,中药组与联合组HbAlc水平与西药组和模型组比较(p均＜0.05);与对照组相比,4组DN模型大鼠RAGE与NF-κB蛋白表达明显升高,差异比较(p均＜0.05);而三组药物治疗后的DN模型大鼠RAGE与NF-κB蛋白表达均低于模型组,差异比较(p均＜0.05),而中药组和联合组DN模型大鼠RAGE与NF-κB蛋白表达较西药组更低,差异比较(p均＜0.05).结论 泄浊解毒、活血通络方治疗DN大鼠疗效明显,可有效降低DN模型大鼠RAGE与NF-κB蛋白表达,进而降低氧化应激反应,抑制炎性通路的激活,对DN大鼠肾脏具有一定的保护作用.
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糖基化终极产物对心血管系统的损伤作用及干预措施
目的糖基化终极产物(AGEs)是体内蛋白质与糖在无酶条件下发生反应后的产物.正常人体内AGE水平随年龄增长而缓慢增加,疾病状态下,如糖尿病时循环和组织中AGE修饰蛋白水平明显增加.AGEs主要通过与其受体RAGE相互作用介导一系列病理反应,研究表明AGEs可以通过损伤内皮功能、促进平滑肌细胞增殖、诱导心肌细胞凋亡、促进胶原蛋白交联、促进炎症因子及生长因子表达、干扰脂质代谢、影响凝血状态等机制对心血管系统产生损伤,阻滞AGEs/RAGE是心血管疾病治疗的新的靶点.
关键词： 糖基化终极产物(AGEs) RAGE 内皮细胞 平滑肌细胞 心肌细胞 -
鼻咽癌组织RAGE表达与微血管发生的相关性研究
目的 本实验旨在研究鼻咽癌组织高级糖基化终产物受体(Receptor for advanced glycation end products,RAGE)的表达与微血管发生的相关性,探讨RAGE表达与肿瘤转移的关系.方法 106例确诊鼻咽癌患者的初次活检病理标本,10例正常鼻咽黏膜组织标本.免疫组化法检测组织中RAGE表达并进行微血管计数.结果 ①RAGE高表达于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质,在鼻咽癌高分化组、中分化组、低分化组及未分化组中RAGE表达无显著差异;②RAGE表达及微血管计数在鼻咽癌淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异具有统计学意义(P=0.0041),并与微血管计数呈正相关关系(r=0.89).结论 RAGE可能通过促进肿瘤组织中微血管的生成参与鼻咽癌的侵袭和转移.
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中药抑制AGEs-RAGE系统治疗糖尿病血管并发症的研究进展
中药应用于糖尿病患者血管并发症的临床治疗具有明显效果.高血糖所形成的AGEs(高级糖基化的终产物)与RAGE(其受体)所介导的信号路径于糖尿病的血管并发症其发生与发展中都起着重要的作用.
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RAGE在不同宫颈鳞癌细胞中的表达及意义
目的 探讨人宫颈鳞癌细胞中晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced-glycation end products,RAGE)的表达水平及定位,筛选出合适的细胞用于研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响.方法 选取人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A及CaSki,采用免疫细胞化学染色检测癌细胞中RAGE蛋白的定位,应用qRT-PCR法检测癌细胞中RAGE mRNA的表达水平.应用免疫印迹法检测癌细胞中RAGE蛋白的表达水平.采用酶联免疫吸附法检测4种人宫颈鳞癌细胞分别培养至12、24、36、48及72h时,上清中分泌型RAGE蛋白的表达水平.结果 RAGE蛋白主要在人宫颈鳞癌细胞的胞质和胞膜中表达,大部分位于胞质.RAGE mRNA的表达量在SiHa细胞中高,为0.986±0.053,而在MS751细胞中的表达量相对低,仅0.111 ±0.008(P ＜0.05).RAGE蛋白在SiHa细胞中的表达量相对高的(0.982±0.096),而在MS751细胞中的表达量相对低(0.250±0.056),差异有统计学意义(P＜0.05).SiHa、MS751、C33-A及CaSki细胞各个时间点均检测到其分泌至上清中的RAGE蛋白,且4种细胞随着培养时间的延长,其分泌型RAGE的表达量逐渐增高.结论 RAGE在4种人宫颈鳞癌细胞中均有表达.C33-A和CaSki细胞适合用做后续RAGE干扰和过表达实验;SiHa细胞可在培养液中加入抗RAGE抗体改变RAGE表达量;用于后续研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响.
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金芪降糖片对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究
[目的]观察金芪降糖片对糖尿病大鼠肾组织晚期糖化终末产物受体(RAGE)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.[方法]测定造模后20周糖尿病组(DM组)、糖尿病给药组(DD组)和对照组(N组)大鼠24h尿微量白蛋白定量(UMA)、平均血糖(APG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、内生肌酐清除率(Ccr)、RAGE、TGF-β1、VEGF、CTGF水平及肾脏形态学改变,评价金芪降糖片的肾保护作用.[结果]与DM组相比,DD组平均血糖、TC差异无统计学意义,Ccr高于DM组,而UMA、TG、RAGE、TGF-β1、VEGF、CTGF水平降低,差异有统计学意义;光镜和电镜下,DD组肾组织损伤程度均轻于DM组.[结论]金芪降糖片可以减轻糖尿病慢性肾损伤的程度,其肾保护作用可能与其降脂及降低RAGE、TGF-β1、VEGF、CTGF水平有关.
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路怒症都市人的痛
路怒症,顾名思义就是带着愤怒去开车."路怒"(road rage)一词被收入新版牛津词语大辞典,用以形容在交通阻塞情况下开车压力与挫折所导致的愤怒情绪.随着私家车快速增多,因驾车引发的情绪冲突也越来越多,成为一些都市人的痛.
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当归四逆汤对糖尿病周围神经病变AEGs及其受体的影响
目的:观察当归四逆汤对糖尿病周围神经病变的临床疗效及对患者AEGs和其受体的影响.方法:选取60例糖尿病周围神经病变患者随机分为治疗组和对照组,在糖尿病基础治疗基础上治疗组给予当归四逆汤,对照组给予甲钴胺片,比较两组患者临床疗效、治疗前后神经传导速度、血液流变指标及AEGs及其受体水平.结果:治疗后治疗组患者的运动神经(腓总神经)、感觉神经(胫神经、腓总神经)传导速度较对照组患者显著提高;全血黏度、血浆黏度及红细胞压积较对照组患者显著降低;AEGs及其受体水平较对照组患者显著降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:在糖尿病基础治疗之上加服当归四逆汤较加服甲钴胺片治疗糖尿病周围神经病变可提高临床疗效,加快神经传导速度,改善血液流变,重要的是降低患者AEGs及其受体的水平参数.
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RAGE及sRAGE与糖尿病肾病关系的研究进展
研究发现,长期高血糖引起的蛋白质非酶糖基化,导致糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGKs)形成与堆积是糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发病机制之一.
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晚期糖基化终末产物受体及配体高迁移率族蛋白-1在矽肺肺纤维化中的作用
本实验通过测量小鼠矽肺模型肺灌洗液中高迁移率族蛋白(HMGB)-1、TNF-α和肺组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达改变,进而探讨RAGE及HMGB-1在矽肺肺纤维化中的作用,现报告如下.
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NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用
目的:探讨NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用.方法:选取16周龄的雄性BXSB小鼠(狼疮性肾炎模型组)和同周龄C57BL/6 小鼠(正常对照组)作为研究对象,透射电镜和PAS染色观察肾组织的超微结构形态改变;RT-PCR技术检测小鼠全血中HMGB1mRNA的表达变化.采用ELISA方法检测血清中HMGB1蛋白浓度;免疫组织化学检测肾组织中HMGB1和PCNA蛋白的表达变化;Western blot和流式细胞术检测肾组织中RAGE、p-NF-κB和 IκB蛋白的表达.结果:16周时,与正常的C57BL/6 小鼠相比,BXSB小鼠血清中BUN水平及尿中微球白蛋白水平明显升高;与正常的C57BL/6 小鼠相比,BXSB小鼠全血中HMGB1mRNA水平和血清中HMGB1蛋白浓度明显升高;16周时,与正常的C57BL/6 小鼠相比,BXSB基底膜明显增厚,部分足突融合,内皮细胞下可见团块状电子致密物沉积;与正常的C57BL/6 小鼠相比,BXSB小鼠肾组织的肾小球中可见较多的PCNA阳性表达,肾小管上皮细胞核内也可见少量的表达;BXSB小鼠肾组织中HMGB1蛋白表达升高,HMGB1蛋白尤其在细胞增生明显而肥大的肾小球呈高表达,主要位于细胞浆和细胞外;而在C57BL/6小鼠肾脏组织中以小管细胞核表达为主;与对照组相比,BXSB小鼠肾组织p-NF-κB和RAGE蛋白表达明显升高;而IκB蛋白表达明显降低;HMGB1蛋白与p-NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.833,P=0.000);p-NF-κB蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.621,P=0.018);HMGB1蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.848,P=0.000);p-NF-κB蛋白与IκB蛋白表达呈显著负相关(r=-0.759,P=0.002).结论:HMGB1在小鼠狼疮性肾炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体RAGE,激活NF-κB信号途径,促进肾小球固有细胞的增生,从而导致增生性肾小球肾炎形成而实现的.
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类风湿关节炎滑膜组织RAGE的表达及意义
目的:探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在类风湿关节炎滑膜组织中的表达与临床意义.方法:收集2009年7月至2013年12月在我院接受手术治疗的类风湿关节炎患者(20例)术中切除的滑膜组织标本,以及骨关节炎患者(16例)的关节滑膜组织,通过免疫印迹法和反转录聚合酶链(RT-PCR)反应法检测RAGE的mRNA和蛋白在类风湿关节炎滑膜组织中的表达量,并与下游相,关炎性因子TNF-α和IL-1β的表达做相关性分析.结果:与骨关节炎组相比,RAGE的mRNA(P=0.001)和蛋白(p=0.000 4)表达量明显增加,下游炎性因子IL-1β(P=0.003)和TNF-α(P=0.005)的表达量也明显增加,两种炎性因子的含量与RAGE的表达量存在显著正相关性(IL-1β:r=0.768,P=0.012; TNF-α:r=0.836,P=0.008).结论:RAGE是类风湿性关节炎发病机制中的重要参与者,靶向RAGE的治疗可能对于改善类风湿性关节炎的预后具有重要的意义.
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当归四逆汤对大鼠DPN抑制作用及AGEs/RAGE的调节
目的 观察当归四逆汤对糖尿病大鼠坐骨神经传导速度的影响及糖基化终末产物(AGEs)和AGEs受体(RAGE)的调节作用.方法 采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,模型鼠随机分为中药组、西药组、模型组,另设健康鼠为正常组.分别干预8 w后,检测糖尿病大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经病理形态、AGEs含量、RAGE mRNA表达水平.结果 与模型组相比,中药能够保护坐骨神经结构,显著降低AGEs含量、下调RAGE mRNA水平(P<0.05).结论 当归四逆汤能够通过下调AGEs/RAGE含量提高坐骨神经传导速度、保护坐骨神经结构,进而抑制大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)的发生发展.
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Rho/ROCK信号通路在HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏及β淀粉样蛋白沉积中的作用
目的 探讨Rho/ROCK信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障破坏及对β淀粉样蛋白(Amyloid-beta,Aβ)沉积中的作用.方法 将培养的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelial cells,hCMEC/D3)予以不同浓度的Rho/ROCK信号传导通路抑制剂盐酸法舒地尔(Hydroxyfasudil,HF)刺激细胞,并设立对照组,观察其对细胞活力的影响,分别予以HIV-1 Tat、HF刺激细胞,以蛋白免疫印迹法和实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测hCMEC/D3中紧密连接蛋白Occludin、晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE,转移血液Aβ到脑组织)的蛋白和mRNA表达的变化.结果 HF在30μmol/L(0.17±0.02)以下时对hCMEC/D3活力无明显影响(P＞0.05).HIV-1 Tat能抑制hCMEC/D3的Occludin 蛋白(0.71±0.03、P＜0.001)与mRNA(0.41±0.05、P＜0.05)表达,同时上调RAGE蛋白(0.83 ±0.01、P＜0.001)和mRNA(1.93±0.66、P＜0.05)表达.HF预处理细胞2h后与HIV-1 Tat共培养可以显著增加Occludin蛋白与mRNA的表达(0.93±0.03、P＜0.001;1.04±0.45、P＜0.05),同时可以明显减少RAGE蛋白与mRNA的表达(0.54±0.01、P＜0.001,1.08±0.43、P＜0.05).结论 HIV-1 Tat可使紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达下调导致血脑屏障破坏,诱导Aβ转运受体RAGE的蛋白和mRNA过度表达,从而可能导致Aβ在脑内沉积增加;阻断Rho/ROCK信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏作用,阻止RAGE蛋白和mRNA的过度表达.
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RAGE、sRAGE指标在诊断溃疡性结肠炎方面的临床价值分析
目的：观察RAGE、sRAGE指标在诊断溃疡性结肠炎方面的临床价值。方法：将2013年1月至2013年12月我院收治的20例溃疡性结肠炎患者作为观察组，将同期我院收治的20例非结肠炎患者作为对照组，对比分析两组患者sRAGE、CRP、TNF-a及RAGE的水平。结果：与对照组患者相比，观察组患者血清sRAGE、CRP和TNF-a的水平较高，差异显著(P＜0.05)，有统计学意义。观察组患者进行血清RAGE检测的阳性率为95%，对照组患者进行血清RAGE检测的阳性率为5%，二者相比差异显著（P＜0.05），有统计学意义。结论：RAGE、sRAGE指标在诊断溃疡性结肠炎方面具有重要的价值。
