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茉莉酸甲酯影响阳春砂挥发性萜类代谢和基因转录
目的：研究茉莉酸甲酯对阳春砂挥发性萜类合成的影响，深入了解挥发性萜类生物合成的分子调控机制。方法：用不同浓度茉莉酸甲酯溶液喷施阳春砂的叶片和果实，用微波法提取果实中的挥发性萜类成分，应用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术检测挥发性萜类成分的变化，通过转录组测序构建cD-NA文库并进行生物信息学分析。结果：果皮和种子团中分别检测到20种和33种挥发性萜类成分，600μmol·L-1 MeJA喷果24 h后果皮和种子团中大部分挥发性萜类成分的积累量明显增加，如乙酸龙脑酯、樟脑和龙脑等；而200μmol·L-1 MeJA喷施叶片或果实对果皮及种子团中不同挥发性萜类含量的影响存在差异，且200μmol·L-1 MeJA喷施果实比喷施叶片更能提高种子团中挥发性萜类成分的积累量。此外，转录组测序共获得68168个Unigene，通过与公共数据库比对，共有48627个Unigene获得注释。对KEGG代谢通路的注释结果进行初步分析，发现挥发性萜类代谢密切相关的Unigene有208个，MYC2类转录因子（JA信号转导的重要调控因子）相关的Unigene有22个。结论：MeJA能有效调控阳春砂中挥发性萜类成分的代谢，转录组测序获得了多个与挥发性萜类合成相关的候选基因，为深入开展阳春砂挥发性萜类生物合成相关功能基因的发掘及调控研究提供了丰富的数据资源。
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风湿宁胶囊对类风湿关节炎治疗效果的转录组测序研究
目的:基于转录组测序技术探索风湿宁胶囊(FSN)治疗RA的关键基因.方法:大鼠按随机数字表法分为正常、CIA、复合模型、FSN-CIA低、中、高及FSN-复合低、中、高、Tofacitinib、塞隆风湿组各12只,正常组、模型组生理盐水灌胃,给药组FSN每日1次28 d,通过关节肿胀度、关节病理、相关炎性细胞水平观察FSN治疗效果;Illumina HiSeq 4000测序分析正常、CIA、复合模型、FSN-CIA高剂量、FSN-复合高剂量5组大鼠,对差异基因进行GO、KEGG分析.结果:模型组大鼠关节肿胀度、炎性细胞因子水平明显升高,治疗组关节红肿减轻、关节病理特征改善,炎性细胞因子水平降低,共检测9070个新转录本,GO分析表明,差异基因富集在细胞进程、代谢、免疫等;KEGG分析表明,差异基因富集在遗传信息进程、人类疾病等,复合模型与其给药组、CIA与复合模型组、CIA与其给药组差异基因分别上调54、1和65个以及下调30、2和0个.结论:FSN胶囊可明显改善CIA大鼠相关生理指标及关节病理特征,YB-1可能为FSN胶囊治疗RA的关键蛋白之一.
关键词： 转录组测序 风湿宁胶囊(FSN) 类风湿关节炎 差异基因 -
基于转录组测序揭示适度干旱胁迫对甘草根基因表达的调控
适度干旱胁迫可促进甘草有效成分的积累,提高药材质量.该研究以栽培6个月的甘草根为材料,设置适度干旱胁迫组(土壤相对含水量40％ ～ 45％)和对照组(土壤相对含水量70％～75％),分别应用Illumina HiSeq 2000进行转录组双末端测序,分析甘草根响应适度干旱胁迫的差异表达基因.在适度干旱胁迫组和对照组中分别得到80 490 490,82 588 278个Clean reads,经序列拼接和去冗余处理分别得到94 828,305 100个Unigene序列,序列长度的中位数分别为1 007,1 125 nt.差异表达基因分析表明,适度干旱胁迫抑制细胞壁中β-木糖苷酶、天冬酰胺酰内肽酶、GDP-L-岩藻糖合酶等酶的基因表达,可能抑制根细胞的初生壁降解与程序性细胞死亡;促进萜类、黄酮类化合物生物合成的关键酶基因的表达,进而促进甘草有效成分的积累;促进生长素、乙烯、细胞分裂素的生物合成和信号转导,进而促进根的发生和细胞增殖;促进脱落酸、茉莉酸的生物合成和信号转导,进而提高甘草对干旱胁迫的适应能力;抑制赤霉素、油菜素内酯等激素的生物合成和信号转导,进而抑制地上茎的伸长.
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膜荚黄芪的转录组测序质量评估及其SSR位点信息分析的研究
该实验采用Roche 454 GS FLX测序仪获得黄芪的转录组数据,使用454 Sequencing System Software分析软件进行转录组从头拼接;利用MISA工具筛选了黄芪转录组测序获得的9 893条unigenes,对其SSR位点信息进行了分析.结果表明,进行测序所得的reads的平均长度为413 bp,约86％的reads参与了拼接,拼接的N50长度为1 205 bp,所测得的unigene数量基本涵盖了全部转录组信息;黄芪转录组搜索到1 729个SSR位点,SSR的发生频率为9.24％,SSR在黄芪整个转录组中出现的频率为13.42％,SSR的平均距离为7.97 kb.一共发现核心重复序列127种,占优势的是二核苷酸型中的TG/AC型,出现的频率占总SSR位点的4.25％.黄芪转录组的测序结果揭示了黄芪转录组的整体表达特征,并得到大量黄芪转录组unigene序列,并且黄芪转录组SSR位点出现频率高,类型多样,多态性潜能高.
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鸭肠炎病毒感染鸭脾脏的转录组分析
为探明鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)感染鸭脾脏的转录组情况,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50 d鸭,于接种后66h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,采用Illumina HiSeq 2000TM对试验组和对照组样品进行测序,筛选DEV感染鸭脾脏组织的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析.结果显示,差异表达基因共511个,其中表达上调312个,表达下调199个.GO功能分类结果显示,差异表达基因主要涉及氧运输、整合素活化、补体激活等生物学过程,胞外区、血红蛋白复合物、细胞外间隙等细胞组分,氧转运活动、氧结合、核糖体的结构成分等分子功能.KEGG分析表明这些差异表达基因参与ECM受体相互作用、核糖体、CAMs、JAK-STAT信号通路、细胞因子和细胞因子受体相互作用、PPAR信号通路、神经活性配体/受体相互作用信号通路.本研究为深入探究DEV与鸭脾脏组织互作、宿主抗病机制及相关功能基因的筛选奠定了基础.
关键词： 鸭肠炎病毒(DEV) 鸭脾脏 转录组测序 -
肾脏纤维化大鼠模型尿液中差异表达基因筛选及生物信息学分析
目的研究大鼠肾脏纤维化(RF)模型尿液中差异表达的基因,并对其进行生物信息学分析.方法将大鼠分为对照组和纤维化模型组,单侧输尿管结扎术建立大鼠肾脏纤维化模型,收集尿液.提取总RNA,构建测序文库并进行转录组测序.对差异表达的mRNA进行了GO分析和KEGG分析,并对miRNA的前体和lncRNA的家族进行预测和分类.结果肾脏纤维化模型组的尿液和对照组相比,得到813条表达上调转录本数据以及213条表达下调的转录本数据.结论利用转录组高通量测序结合相关生物信息学分析,可为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能.
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EGFR敏感突变肺腺癌患者纵膈淋巴结转移相关基因的检测与分析
目的 本研究采用转录组测序和生物信息学分析等方法,以期筛选出肺腺癌淋巴结转移相关基因.方法 分别检测伴和不伴纵膈淋巴结转移的EGFR敏感突变肺腺癌临床标本转录组表达谱,筛选出差异表达基因(DEGs);对这些DEGs进行相关生物信息分析,探索这些基因在淋巴结转移进程中可能发挥的作用.q-PCR法验证高表达基因在PC9细胞株(EGFR敏感突变细胞株)中的表达情况.结果 共检测了10例肺腺癌标本的转录组表达谱,通过差异基因表达分析筛选出169个DEGs,其中,68个在肺腺癌样本中表达上调、101个基因表达下调.q-PCR结果显示:高表达基因在PCO细胞中,ZNF572、BRPF3、MMACHC等7个基因的表达量为中丰度,SMOC1、A1BG、BARX1等9个基因为低丰度,其余均为高丰度.结论 TFF3及DUSP6等多个差异表达基因可能涉及肺腺癌纵膈淋巴结转移进程.
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应用转录组和外显子组测序分析不同年龄组的胶质母细胞瘤中基因表达与突变的差异
目的 探讨通过转录组和外显子组测序分析不同年龄组的胶质母细胞瘤的差异.方法 多形性胶质母细胞瘤(GBM)数据下载自TCGA项目.将样本分为2组,不高于60岁的样本为中低年龄组,共78例;高于60岁的样本为高年龄组,共76例.使用R语言DESeq2软件包对RNA-seq原始基因水平的reads数目数据进行差异表达分析.使用Cytoscape插件ClueGO进行不同年龄组别差异表达基因功能富集分析.结果 GBM致病基因在两组之间大部分基因表达趋势一致,但存在差异基因.在中低龄组中差异基因主要和神经前体细胞增殖相关,而高年龄组偏重于代谢方面.在两组中高突变的基因有很多重叠.样本突变率不同的基因主要为中低年龄组特有,且具有高样本突变率的基因.结论 中低年龄组和高龄组GBM患者在基因表达和基因突变上存在明显差异.
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转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路
目的 探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用.方法 构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,Tree View和DAVID生物信息数据库(DAVID BioinformaticsResources)以及Enrichr分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路,绘制热图(heatmap).结果 BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P ＜0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1、Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P＜0.05),克隆大小明显降低.结论 HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和黏附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用.总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用.
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细粒棘球绦虫原头蚴水通道蛋白编码基因的转录组分析
目的 应用转录组测序及生物信息学分析细粒棘球绦虫原头蚴水通道蛋白(aquaporins,AQPs)编码基因转录特征及其在细胞代谢通路中的作用. 方法 应用RNA测序(RNA-seq)技术对细粒棘球绦虫原头蚴进行转录组测序.从原头蚴样品中提取总RNA,纯化mRNA并制备链特异性文库,通过Illumina Hiseq X测序平台对RNA进行测序,然后对原头蚴的AQPs进行生物信息学分析,然后将过滤后序列(Clean Reads)与公共数据库进行BLAST比对.将检测样品与NCBI的参考基因组的序列比对,进行基因表达量分析、可变剪接预测分析及新基因的发掘,查找细粒棘球绦虫水通道蛋白基因型和转录本. 结果 测序获得6.73 Gb Clean Reads,Clean Reads与BLAST比对显示11 593条单基因簇得到功能注释;从检测样品中发掘新基因513个,其中286个得到功能注释;发现细粒棘球绦虫水通道蛋白共5个基因型、8个转录本. 结论 细粒棘球绦虫原头蚴存在AQPs,该蛋白是定位在细胞膜上的主要内在膜蛋白家族成员,主要参与胆汁分泌代谢通路Ko04976、碳酸氢盐代谢通路Ko04964,可作为细粒棘球蚴病治疗的药物靶点.
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基于RNA-Seq技术对血链球菌spxA2敲除株的转录组分析
目的 应用RNA测序(RNA-Seq)技术分析spxA2调控的靶基因,以期揭示spx蛋白的转录调控机制,为血链球菌致病机制的深入研究奠定基础. 方法 采用高通量测序技术对血链球菌野生株和spxA2突变株进行转录组分析,将测序所产生的数据绘到SK36参考基因组上,获得各个基因的表达信息,应用基因组比对结果进行基因定量.利用edgeR软件分析△spxA2和WT中的基因差异表达情况.随机抽取若干差异表达基因,通过实时定量PCR对基因的差异表达情况进行验证.应用GOTermFinder软件,找出差异表达基因中显著富集GO条目,并推测差异表达基因行使的主要生物学功能;通过Pathway分析进一步了解差异表达基因所参与的代谢通路及其具体的生物学意义. 结果 将序列数据与公共数据库COG、GO、KEGG、NR、NT和Swiss-Pro进行BLAST比对,89.1％(1203个)独立基因得到功能注释.其中,859个独立基因注释到COG并被划分到25个功能类别,910个独立基因注释到GO数据库,707个(52.4％)独立基因被归为KEGG中的32条代谢途径.对△spxA2组和WT组进行基因表达差异分析,确定spxA2基因敲除株有17个基因表达上调,5个基因表达下调.GO功能显著性富集和Pathway显著性富集分析,表明筛选到的差异表达基因主要富集在氨基酸代谢生物学过程和酶活性细胞组分,共得到2条显著富集的代谢通路,涉及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢及牛磺酸和牛磺酸代谢. 结论 RNA-Seq所得序列数据在测序深度、覆盖率以及与血链球菌SK36标准株基因组的比对结果均较理想,转录组测序结果基本能反映血链球菌的整个转录组情况.spxA2是一个全局性转录调控因子,参与多个基因的转录调控,该蛋白的改变可导致血链球菌丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及牛磺酸和牛磺酸代谢通路发生变化,可为深入研究血链球菌致病机制及其与代谢途径之间的联系提供重要依据.
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SFTS病毒感染脾脏网状成纤维细胞系的建立
目的 分离、纯化、培养和永生化小鼠脾脏原代网状成纤维细胞(fibroblastic reticular cells,FRCs),筛选和鉴定永生化的FRCs克隆,证明永生化FRCs可用于SFTS病毒(SFTSV)体外感染研究.方法 使用磁珠和流式细胞分选等技术分离、纯化和培养小鼠脾脏FRCs;使用SV40永生化FRCs,筛选单克隆并培养50代以上,使用转录组测序(RNA Sequencing,RNA-seq)和激光共聚焦技术对原代和永生化的FRCs进行比较和鉴定;用SFTSV体外感染的永生化的FRCs.结果 成功得到4个永生化的FRCs克隆;鉴定结果显示Clone02符合FRCs表型,且纯度均达到了99％;转录组测序相关性分析显示Clone02细胞株基因表达与原代FRCs接近;基因表达分析和激光共聚焦实验证实Clone02的表型和原代FRCs相同;SFTSV在MOI值0.5的条件下即可成功感染Clone02细胞.结论 永生化的FRCs Clone02细胞保持了原代细胞的形态学、免疫学特征,与原代FRCs基因表达谱接近,可被SFTSV体外感染,是一个新的有潜力的SFTSV体外研究的细胞平台.
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转录因子 HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路研究
目的：：探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法：构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力；Western blotting检测上皮-间质转化( EMT )相关蛋白表达水平的变化；平板克隆实验检测细胞的增殖能力；转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,treeview和DAVID生物信息数据库(DA-VID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析KEGG信号通路,绘制热图( heatmap)。结果：BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低( P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物 N-cadherin, Twist1,Slug蛋白表达水平显著下调；平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少( P<0.05),克隆大小明显降低。结论：HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖；HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和粘附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子( TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。
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小鼠CD4T细胞转化的双阴性T细胞的效应分子研究
目的 研究小鼠CD4 T细胞转化的CD4-CD8-双阴性T细胞的功能特点,进一步明确双阴性T细胞的免疫抑制作用机制.方法 应用转录组测序和蛋白质质谱技术分析了小鼠转化的双阴性T细胞基因表达谱.应用流式细胞术等技术验证了细胞活化分子CD44、CD69和OX40的表达水平并应用CFSE染色法验证双阴性T细胞的杀伤功能.结果 小鼠转化的双阴性T细胞表达了与其他成熟CD4 T细胞不同的细胞表型.小鼠转化的双阴性T细胞明显高表达细胞表面活化分子CD44、CD69和OX40,以及颗粒酶、穿孔素等细胞杀伤相关基因.穿孔素基因敲除的双阴性T细胞抑制淋巴细胞增殖的能力明显降低.结论 小鼠CD4 T细胞转化的双阴性T细胞是与其他成熟CD4 T细胞不同的T细胞终末分化亚群.小鼠转化的双阴性T细胞高表达细胞活化分子和免疫杀伤类细胞因子,并主要通过穿孔素途径发挥免疫抑制功能.
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基于转录组测序技术的重症手足口病相关基因研究
目的：应用转录组测序技术（RNA-seq）分析重症手足口病（SHFMD）患者外周血单个核细胞（PBMC）转录组情况，筛选SHFMD相关基因，探讨其发生的可能免疫机制。方法收集2014年5月至8月深圳市第三人民医院收治的重症和轻症手足口病（MHFMD）患儿各5例，以及5例健康体检儿童的外周血，均分离PBMC，采用转录组测序技术筛选显著的差异表达基因（DEGs），并通过实时荧光定量PCR对DEGs进行验证。结果 SHFMD组相对健康对照组共117个DEGs，其中108个基因上调，9个基因下调；SHFMD组相对MHFMD组共26个DEGs，其中14个基因上调，12个基因下调；两组DEGs中共有8个相同基因，其中TNFRSF13C、IL-7R、THBS1和VEGFA下调，S100A8、S100A12、IL-8和IL-1β上调（P均＜0.05）。结论S100A8、S100A12、IL-8、IL-1β、TNFRSF13C、IL-7R、THBS1和VEGFA是SHFMD相关的差异表达基因，可能在SHFMD的发生中起重要作用，有望成为手足口病重症化的预测基因。
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模拟失重下氧化应激对EA.hy926细胞影响的转录组学研究
目的 探索回转模拟失重下EA.hy926细胞(人脐静脉内皮细胞与人肺腺癌细胞株A549的融合细胞)氧化应激后差异表达基因及其生物学意义.方法 以EA.hy926细胞为研究对象,设置对照组(Con组)、对照氧化应激组(Con+ H2O2)、模拟失重组(MG组)和模拟失重后氧化应激组(MG+ H2O2组),采用Illumina HiSeq 2500平台开展转录组测序,筛选差异表达基因;采用在线分析工具对差异基因进行Gene Ontology (GO)功能富集分析、KEGG信号通路分析以及STRING蛋白互作分析;以qRT-PCR技术验证筛选出的差异基因.结果 测序结果表明,与Con组相比,MG+ H2O2组差异基因253个;与Con+H2O2组相比,MG+H2O2组差异基因169个.GO及KEGG通路显著性富集分析结果显示,与Con+H2O2组相比,MG+H2O2组差异基因可显著富集于细胞因子刺激的细胞反应等生物过程及TNF等信号通路.蛋白互作分析表明CXCL蛋白处于互作的关键位置;qRT-PCR结果显示筛选的差异表达基因BCL-2A1、CXCL-8、FAM196B在各组间的表达变化与测序结果一致.结论 模拟失重下氧化应激可诱导EA.hy926细胞产生不同的生物学反应,并通过调节BCL-2A1、CXCL-8、FAM196B基因表达对内皮细胞增殖、凋亡等生理功能发挥调控作用.
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一种基于双重PCR结合毛细管电泳验证转录组测序结果的新方法
目的：将双重PCR与毛细管电泳技术相结合，建立一种验证转录组测序结果的新方法。方法根据前期进行转录组测序的分析结果，挑选8个差异基因作为靶基因，分别使用双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳、双重PCR结合毛细管电泳以及实时荧光定量PCR进行验证，比较三者的验证率。结果双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳的验证率为50％；双重PCR结合毛细管电泳和实时荧光定量PCR的验证率均为100％。结论双重PCR结合毛细管电泳可作为转录组测序结果验证的一种有效方法。
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基于转录组测序的放射性肠损伤基因动态变化
目的 探讨致死剂量的电离辐射对小鼠空肠组织转录组动态变化.方法 小鼠经14 Gy137Cs γ射线腹部照射后,分别于6h,3.5和5d提取各组小鼠空肠总RNA进行转录组测序.表达变化倍数在2倍以上即视为显著差异,对表达差异的基因进行IPA、Funrich、GO和KEGG软件分析.结果 小鼠在腹部照射后6h和3.5d共同激活了p53信号通路.在照射后第3.5天的差异基因中,基因相互作用网络分析结果表明,Lck、Cdk1和Fyn可能起关键作用,通路分析表明,上调了DNA损伤修复信号通路,下调了细胞黏附分子、黏着斑和IgA分泌途径信号通路.结论 p53信号通路以及Lck、Cdk1和Fyn等基因在放射性肠损伤中可能起关键作用.
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基于转录组测序技术研究黄芪水煎液对虚寒证大鼠免疫机能的影响
目的 探讨虚寒证的发生及黄芪水煎液对虚寒证产生治疗作用的分子机制.方法 选用传统中药复方(生石膏、龙胆草、黄柏、知母)按照2:1.2:1:1.5的比例,灌胃给药16 g/(kg·d),持续14 d,建立虚寒证大鼠模型.模型建立后,采用SPSS软件随机分为虚寒模型组及黄芪水煎液组,黄芪水煎液组给予5.40 g/(kg·d)灌胃给药,连续7 d,应用转录组测序技术检测空白组、虚寒模型组、黄芪水煎液组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,根据GO功能标准,对免疫相关基因进行注释,荧光定量PCR对测序结果进行验证.结果 与空白组相比,虚寒模型组筛选出差异基因323条;与虚寒模型组相比,黄芪水煎液组筛选出差异基因333条,主要涉及刺激应答与防御应答功能.GO功能分析显示,虚寒模型大鼠出现以刺激、防御应答为代表的多种免疫应答相关基因表达的下调,影响机体的免疫应答功能,削弱机体免疫;给予黄芪水煎液治疗后,通过上调刺激、防御应答相关基因表达,进一步改善机体对外界的免疫应答情况,使机体免疫状态得以增强、恢复.结论 虚寒证发生及黄芪水煎液对虚寒证治疗作用的分子机制可能与机体免疫机能及其相关基因表达密切相关.
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辛伐他汀缓释微球影响骨组织工程成骨性能的体外实验
背景:近年来国内外研究将辛伐他汀缓释微球组装在支架材料上,发现其可完成骨缺损的修复,取得不错的效果.目的:探讨辛伐他汀缓释微球对组织工程成骨性能的影响.方法:采用薄膜分散法制作纳米脂质体辛伐他汀缓释微球,检测其粒径和多分散系数及包封率.采用透析装置检测游离辛伐他汀溶液与辛伐他汀缓释微球溶液的缓释性能.将第3代人胎盘间充质干细胞接种于多孔羟基磷灰石陶瓷支架上,待细胞贴壁生长后分2组培养,实验组加入辛伐他汀缓释微球溶液,空白组加入普通培养基,7,14,21 d后进行转录组测序,实时荧光定量PCR验证成骨基因表达水平.结果与结论:①辛伐他汀缓释微球平均粒径为(77.27±6.4)nm,多分散系数为0.131±0.040,包封率为85.6％;②游离辛伐他汀溶液在前3 d迅速释放超过了总药量的80％,辛伐他汀缓释微球溶液在前3 d的药物释放量仅约40％,此后也一直较缓慢持续释放至14 d,14 d累计释放量接近80％;③转录组测序显示,实验组骨形态发生蛋白2、骨形态发生蛋白4和血管内皮生长因子等成骨相关基因富集表达;④实时荧光定量PCR检测显示,实验组7,14,21 d的骨形态发生蛋白2、骨形态发生蛋白4、血管内皮生长因子基因表达均高于空白组(P<0.05);⑤结果表明,辛伐他汀缓释微球可促进组织工程成骨性能表达.
