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下调E2-EPF水平对宫颈癌Caski细胞生物学行为的影响
目的 探讨下调泛素结合酶E2-EPF对宫颈癌细胞株Caski细胞增殖、细胞周期及对放、化疗效果等方面的影响. 方法 采用RNA干扰技术下调Caski株E2-EPF的表达后,采用流式细胞术、MTT细胞增殖实验方法研究E2-EPF低表达对Caski株细胞生长速率的影响;通过不同剂量X线照射及常用化疗药物作用后,检测细胞凋亡及细胞增殖情况,了解下调E2-EPF对放、化疗的影响. 结果 通过瞬时转染E2-EPF-siRNA质粒载体,Caski株细胞内E2-EPF的mRNA水平下降至对照组的5％左右,其相应蛋白水平低至难以检出;与对照组相比,E2-EPF低表达Caski株细胞生长速率明显减低(P＜0.05),对拓扑替康和依托泊苷药物的敏感性明显增强(P＜0.05),但对放疗效果无明显影响(P＞0.05). 结论 E2-EPF参与宫颈癌细胞株Caski的生长调控,瞬时下调E2-EPF可以抑制肿瘤细胞生长、增强细胞对拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和拓扑异构酶Ⅱ抑制剂类化疗药物的敏感性.
关键词： 泛素结合酶E2-EPF siRNA 宫颈癌 Caski 拓扑异构酶抑制剂 -
RAGE在不同宫颈鳞癌细胞中的表达及意义
目的 探讨人宫颈鳞癌细胞中晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced-glycation end products,RAGE)的表达水平及定位,筛选出合适的细胞用于研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响.方法 选取人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A及CaSki,采用免疫细胞化学染色检测癌细胞中RAGE蛋白的定位,应用qRT-PCR法检测癌细胞中RAGE mRNA的表达水平.应用免疫印迹法检测癌细胞中RAGE蛋白的表达水平.采用酶联免疫吸附法检测4种人宫颈鳞癌细胞分别培养至12、24、36、48及72h时,上清中分泌型RAGE蛋白的表达水平.结果 RAGE蛋白主要在人宫颈鳞癌细胞的胞质和胞膜中表达,大部分位于胞质.RAGE mRNA的表达量在SiHa细胞中高,为0.986±0.053,而在MS751细胞中的表达量相对低,仅0.111 ±0.008(P ＜0.05).RAGE蛋白在SiHa细胞中的表达量相对高的(0.982±0.096),而在MS751细胞中的表达量相对低(0.250±0.056),差异有统计学意义(P＜0.05).SiHa、MS751、C33-A及CaSki细胞各个时间点均检测到其分泌至上清中的RAGE蛋白,且4种细胞随着培养时间的延长,其分泌型RAGE的表达量逐渐增高.结论 RAGE在4种人宫颈鳞癌细胞中均有表达.C33-A和CaSki细胞适合用做后续RAGE干扰和过表达实验;SiHa细胞可在培养液中加入抗RAGE抗体改变RAGE表达量;用于后续研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响.
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宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力
目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用.方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化.结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P＜0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P＜0.01或P＜0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P＜0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P＜0.05).结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展.
关键词： 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) 宫颈癌 Hela Caski 细胞活力 -
不同HPV感染状态宫颈癌细胞中INK4a表达研究
[目的]探讨不同HPV感染状态的宫颈癌细胞中INK4a基因的表达情况.[方法]提取细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测宫颈癌细胞CaSki(HPV 16感染)、HeLa(HPV 18感染),C-33A(无HPV感染)中INK4a表达水平.[结果]不同HPV感染状态的宫颈癌细胞Ca5ki(0.3967±0.0491),HeLa(0.5567± 10.1037),C-33A(0.5633±0.0722)中INK4amRNA表达无明显差异(P>0.05).[结论]不同HPV感染状态的宫颈癌细胞中INK4a表达规律趋于一致.检测INK4a基因表达对于宫颈癌的早期诊断和筛查具有重要意义.
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靶向Survivin的shRNA表达载体的构建和对宫颈癌Caski细胞Survivin表达的影响
[目的]探讨RNA干扰对Caski细胞Survivin基因表达的抑制作用. [方法]构建针对Survivin基因编码区和非编码区的两对短发夹状RNA真核表达载体,分别命名为pGenSurl、pGenSur2.以脂质体介导的转染方法将其导入宫颈癌Caski细胞株,采用荧光定量RT-PCR和western blot检测转染后24、48、72 h Survivin基因mRNA和蛋白质表达水平. [结果]成功构建Survivin基因shRNA真核表达载体pGenSur1、pGenSur2.与野生型Caski细胞、阴性对照相比,Caski/pGenSur1细胞和Caski/pGenSur2细胞中Survivin mRNA和蛋白表达随着干扰时间增加有显著性减少(P<0.01),72h到达低值,mRNA抑制效率分别达到63.3%±1.44%和79.7%±2.12%,蛋白抑制效率达到64.2%±2.02%和79.4%±1.77%. [结论]靶向Survivin的shRNA质粒载体均可显著抑制宫颈癌Caski细胞内源Survivin的mRNA和蛋白的表达(P<0.01).
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角质细胞生长因子及其受体在CaSki细胞中的表达及其作用
目的 确定角质细胞生长因子(KGF)及受体(KGFR)在CaSki细胞中的表达及KGF对CaSki 细胞增殖、迁移的影响.方法 取对数增长期的CaSki细胞,ELISA和Western blot确定KGF及KGFR在CaSki细胞中的表达;3H-TdR掺入试验测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞增殖的影响;Millicell测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞迁移的影响.结果 ①KGF、KGFR 在CaSki细胞中有表达;②人重组KGF因子对CaSki细胞的增殖、迁移有促进作用(P＜ 0.05);③用KGF抗体中和CaSki细胞自分泌的KGF 后,CaSki细胞的增殖、迁移减弱(P＜0.05).结论 KGF和KGFR在CaSki细胞中有表达;人重组KGF及CaSki细胞自分泌KGF对CaSki细胞的增殖、迁移均有促进作用.
