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固本止咳中药治疗慢性阻塞性肺疾病的黏膜上皮创伤修复机制研究
创伤修复是在各类细胞生长因子共同作用下的协调有序过程, 可分为炎症反应、细胞增殖、基质沉积及组织重塑4个时期.围绕"正气卫外"和"肺在体合皮"等中医理论, 学者们探讨了中医药影响呼吸道上皮的创伤修复功能.目前基于动物实验和临床试验的证据支持, 中医诊疗用药可以修复已损伤的呼吸道黏膜结构, 改善支气管黏膜完整性, 提高黏膜免疫的机械屏障的防御作用, 增强呼吸道的免疫能力.故从"正气卫外"和"肺在体合皮"理论角度探讨中医药与创伤修复的关系, 并以此为基础论述固本止咳中药对呼吸道黏膜免疫的改善, 终达到治疗及预防慢性阻塞性肺疾病的可能.
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KGF和EGFP双基因共表达的重组腺病毒转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究
为了将角质生长因子(KGF)基因通过腺病毒载体转染到间充质干细胞(MSC)中,增强MSC胸腺修复功能,利用DNA重组技术,将目的基因KGF克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中包装、扩增,并测定病毒滴度.转染至小鼠骨髓MSC中,为胸腺组织修复免疫功能恢复提供前期实验基础.结果表明:重组穿梭质粒pShuttle-GFP-mKGF重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.6kh和5.1 kb 2个条带；重组腺病毒载体质粒pAdxsi-mKGF病毒质拉经酶切鉴定得到阳性克隆；测定重组腺病毒Ad-EGFP-mKGF半数组织培养感染量的滴度为1.6×1010 pfu/ml.转染后10 hMSC开始表达荧光,6-8 d达高峰,转染率可达92.3％,28d仍有表达.结论:pAdxsi-mKGF病毒质粒构建成功并能高效、安全地转染MSC.
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角质细胞生长因子对胸腺作用的研究进展
角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)是1989年Rubin等[1]人从人胚胎肺成纤维细胞的培养E清中分离并纯化的.因这种细胞因子具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用,故将其命名为角质细胞生长因子.
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角质细胞生长因子对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响
目的 研究角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响.方法 MTT法检测不同浓度的重组人角质细胞生长因子(K102)对CBRH-7919细胞增殖的影响;免疫细胞化学技术检测角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor, KGFR)在CBRH-7919细胞中的表达.结果 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中均有表达,MTT实验显示K102对CBRH-7919细胞增殖作用与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中存在表达,但K102对肝癌细胞CBRH-7919的增殖无明显作用.
关键词： CBRH-7919细胞 KGF KGFR 细胞增殖 -
TGF-β1、KGF在矽肺壹期患者血清中的表达意义
目的:检测矽肺壹期患者血清中TGF-β1、KGF水平,探讨其在矽肺发生中的意义.方法:用酶联免疫吸附法,对60例矽肺壹期患者和60例健康人血清TGF-β1、KGF水平进行检测.结果:矽肺壹期患者血清TGF-β1水平明显高于对照组,(P＜0.05).而KGF水平明显低于对照组,(P＜0.05).结论:检测矽肺壹期患者血清中TGF-β1、KGF水平对了解矽肺发病情况有一定意义,可能对矽肺发病、早期诊断、疗效观察及病情检测有一定价值.
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谷氨酰胺对急性肺损伤大鼠HGF及KGF的影响
目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肺损伤时的肝细胞生长因子(HGF)及角细胞生长因子(KGF)的作用.方法 采用盲肠结扎穿刺法复制大鼠脓毒症急性肺损伤模型,40只健康SD大鼠,分为3组,即对照组、手术组[采用盲肠结扎穿刺法]、谷氨酰胺治疗组[采用盲肠结扎穿刺法后静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg].实验中手术组死亡6只,治疗组死亡3只,在手术6h后手术组随机处死6只,24 h后处死剩下5只,治疗组药物处理6h后处死6只,24 h后处死剩下的8只,4 000 r/min离心10 min,收集血清,置于-20℃冰箱保存待用.E1isa法测定血清中HGF和KGF的量.并进行各组织的病理学光镜检查.研究谷氨酰胺对血清中HGF和KGF的影响.结果 与手术组比较,谷氨酰胺治疗组血清HGF和KGF浓度明显升高(P＜0.05).结论 静脉给予谷氨酰胺能促进脓毒症大鼠急性肺损伤时HGF和KGF的分泌,促进受损组织的修复.
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腺病毒介导的KGF基因修饰促进表皮干细胞增殖
目的 构建KGF腺病毒表达载体并转染表皮干细胞,观察其对表皮干细胞增殖的影响.方法RT-PCR自人成纤维细胞中扩增KGF基因片段,pAD-easy Ⅰ腺病毒系统构建KGF腺病毒表达载体,以MOI=50感染表皮干细胞；MTT法检测表皮干细胞增殖,流式分析细胞周期变化.结果 RT-PCR成功扩增KGF基因片段,成功构建的KGF腺病毒质粒经Pac Ⅰ内切酶酶切获得4.5 kbp的特异条带,MOI=50的病毒转染效率超过90％；KGF基因修饰后的表皮干细胞增殖效率与对照组比较有显著差异(P＜0.05),并且G2/M期细胞数量明显增多.结论 成功构建腺病毒KGF表达载体,腺病毒载体介导的KGF基因修饰促进了表皮干细胞的增殖.
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角质细胞生长因子对无排卵功血子宫内膜上皮细胞PCNA、ER和PR表达的影响
目的 观察角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)对离体培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞EEC中增殖细胞核抗原PCNA、雌激素受体ER和孕激素受体PR表达的影响.方法 体外培养无排卵型功血子宫内膜上皮细胞,加入不同浓度的KGF作用后,免疫组化法检测PCNA、ER和PR的表达变化,RT-PCR检测ER和PR mRNA表达的变化.结果 免疫组化染色结果,PCNA蛋白表达位于细胞核,ER和PR蛋白表达主要位于细胞核内,少数可见细胞质着色;50 ng/ml KGF作用后,正常组和功血组PCNA表达分别较作用前的对照组显著增高,ER和PR表达分别较作用前的对照组显著增高(P＜0.05);PCNA和ER表达的增加幅度在正常组和功血组之间无显著差异(P>0.05);而功血组PR表达的增加幅度显著高于正常组(P＜0.05);50.ng/ml KGF作用后,RT-PCR方法检测正常组和功血组ER和PR的mRNA表达,分别较作用前的对照组显著增高(P＜0.05).结论 KGF对体外培养的无排卵型功血和正常的子宫内膜上皮细胞均有增加PCNA、ER和PR表达的作用,但增加程度有差异,提示两组的子宫内膜上皮细胞生长均受KGF的影响,但无排卵功血可能存在与正常的子宫内膜上皮细胞不同的生长机制.
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角质细胞生长因子对肠上皮细胞辐射损伤的防护作用
目的探讨角质细胞生长因子(KGF)的辐射防护作用与机制,为应用KGF防护肠道辐射损伤提供实验依据.方法应用正常及不同剂量γ射线损伤的肠上皮细胞(IEC-6),通过在培养体系中加入不同剂量的KGF后检测细胞增殖活性的变化以及凋亡细胞百分率,作为KGF辐射防护效应和细胞辐射敏感性变化的指标.结果正常培养的IEC-6细胞,KGF呈剂量依赖型促细胞增殖作用;10 Gy照射后KGF促细胞增殖作用显著减弱.KGF预处理能显著降低IEC-6细胞辐射敏感性,其IP50(50%增殖抑制照射量)从对照(15.3±0.6) Gy降至(12.2±0.4) Gy.结论 KGF具有促肠上皮细胞增殖作用,其辐射防护作用表现为降低细胞辐射敏感性,抑制辐射诱导的细胞凋亡可能是其作用机制之一.
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角质细胞生长因子及其受体在CaSki细胞中的表达及其作用
目的 确定角质细胞生长因子(KGF)及受体(KGFR)在CaSki细胞中的表达及KGF对CaSki 细胞增殖、迁移的影响.方法 取对数增长期的CaSki细胞,ELISA和Western blot确定KGF及KGFR在CaSki细胞中的表达;3H-TdR掺入试验测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞增殖的影响;Millicell测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞迁移的影响.结果 ①KGF、KGFR 在CaSki细胞中有表达;②人重组KGF因子对CaSki细胞的增殖、迁移有促进作用(P＜ 0.05);③用KGF抗体中和CaSki细胞自分泌的KGF 后,CaSki细胞的增殖、迁移减弱(P＜0.05).结论 KGF和KGFR在CaSki细胞中有表达;人重组KGF及CaSki细胞自分泌KGF对CaSki细胞的增殖、迁移均有促进作用.
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角质细胞生长因子及其受体在Hela细胞中的表达及其作用
目的 确定角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在Hela 细胞中的表达及KGF对Hela 细胞增殖的影响.方法 取对数增长期的Hela细胞,采用RT-PCR在基因水平确定KGF及KGFR在Hela细胞中的表达;Western blot及ELISA在蛋白水平确定KGF及KGFR 在Hela细胞中的表达;3H-TdR掺入试验测定KGF对Hela细胞增殖的影响.结果 ①从基因水平和蛋白水平证实KGF及KGFR在Hela细胞中有表达.②人重组KGF因子对Hela细胞有明显的增殖作用.③用KGF抗体中和Hela细胞自分泌的KGF后,Hela细胞的增殖与对照组相比减弱(P＜0.05).结论 Hela 细胞中有KGF和KGFR的表达;KGF对Hela细胞有明显的增殖作用.
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角质细胞生长因子及其受体在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中表达的研究
目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在口腔扁平苔藓(OLP)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及意义.方法:运用免疫组化SP法研究KGF及KGFR在糜烂型、非糜烂型OLP,高、中、低分化OSCC中的表达.结果:KGF在糜烂型和非糜烂型OLP中的表达差异无统计学意义,在高、中、低分化OSCC中表达差异也无统计学意义,但KGFR在非糜烂型OLP、正常口腔黏膜(NOM)、糜烂型OLP表达逐渐增强,差异具有统计学意义,KGFR在高、中、低分化OSCC中表达逐渐减弱,差异有统计学意义.结论:KGF对OLP,OSCC发生可能并不起关键作用.KGFR可能是影响口腔黏膜上皮细胞增殖的重要因素,可能与OLP的发病有关,且可作为监测OLP癌变的早期指标,KGFR还可能与OSCC的分化程度有关.
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阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及分泌功能的影响研究
目的:探讨在复合培养的条件下,将阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,对成纤维细胞增殖及表达角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)、TGF-β1的影响.方法:运用角质形成细胞-成纤维细胞复合培养的模型,于复合培养前3d进行血清刺激或者γ-分泌酶抑制剂(DAPT)阻断角质形成细胞中的Notch信号,即在角质形成细胞分化前进行干预.然后提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养,观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及分泌功能的影响.结果:分化前,给予角质形成细胞血清刺激,复合培养0h,Notch-1、Jagged-1表达明显升高(P<0.05);复合培养第1天,P21表达上调、P63表达下降(P<0.05).血清刺激前给予DAPT预处理,复合培养0h,角质形成细胞中Notch信号下游分子P21和P63的表达恢复至无血清刺激水平(P<0.05).DAPT组的成纤维细胞增殖能力、KGF及TGF-β1的表达相对于血清刺激组明显被抑制(P<0.05),而与无血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞的增殖及KGF、TGF-β1的合成.
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修复产品联合应用在点阵铒激光术后创面修复中的评价
目的:评价修复产品联合应用在点阵铒激光治疗后创面修复中的作用.方法:纳入面部行点阵铒激光治疗的受试者15例,采用自身对照策略,试验侧治疗后给予含有PDGF、KGF、积雪草苷成分的修复产品,包含水剂、面贴膜和霜剂,持续一周,对照侧治疗后空白对照,观察治疗后创面修复情况及不良反应.结果:与对照侧比,修复产品联合应用后,患者创面红肿及脱痂时间明显缩短,肿痛、紧绷感减少,没有不良反应发生.结论:修复产品联合应用对点阵铒激光治疗后创面修复有安全、有效的促进作用.
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祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠COX-2及KGF表达的影响
目的 观察祛异康对子宫内膜异位症大鼠异位内膜COX-2及KGF表达的影响,探讨祛异康治疗子宫内膜异位症的机制.方法 采用手术移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机分为空白对照组、模型组、祛异康高、中、低剂量组、丹那唑组.造模成功各组给药4W,免疫组化方法检测大鼠在位、异位子宫内膜组织COX-2及KGF的表达.结果 各组大鼠异位子宫内膜组织COX-2及KGF与空白对照组比较,表达明显上升(P<0.05);祛异康低、中、高剂量组、丹那唑组与模型组相比COX-2及KGF表达明显下降(P<0.05).结论 祛异康能明显抑制异位症模型大鼠异位内膜的生长, 其治疗机理可能是通过降低COX-2及KGF在异位内膜组织中的表达而实现的.
