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体细胞核移植的研究进展--核移植供体细胞与受体细胞的选择
根据近年来国外的研究进展,对核移植研究中的有关内容,如供体核的获得、受体卵母细胞与去核、核卵重组进行了综述,望能对核移植研究有所帮助.
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基因克隆技术及其进展
基因克隆技术,又称重组 DNA技术,是将目的基因与具有自主复制能力的载体 DNA进行体外重组,获得新的重组 DNA后导入受体细胞中表达相应蛋白,以研究蛋白结构与功能及其与其他分子的相互作用。近,随着非编码 RNA的发现,这项技术也用于 RNA的研究。基因克隆技术从发明到现在经历了三个发展阶段。第一个阶段是20世纪70年代初经典的基因克隆技术的创建[1-2]。经典的基因克隆技术是需要限制性内切酶和连接酶的克隆方法,至今仍被广泛应用。第二个阶段是20世纪90年代初不依赖连接酶的克隆方法的出现[3]。这种方法不需要连接酶的参与,不受限制性内切酶的限制,使得基因克隆更加灵活。第三个阶段是21世纪初将重组酶运用到基因克隆中[4],使基因克隆更加强大,靶向性更强,操作更简便。本综述从基因克隆技术发展的这三个阶段入手,概述各项方法的原理和特点,方便人们根据自己的需求选择合适的基因克隆方法。
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胞外囊泡在肿瘤发生发展中的研究进展
胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是释放到细胞外的膜性小囊泡,是传递细胞间信号的一种新方式,在生理或病理情况下发挥重要调节作用。几乎所有类型的细胞均可以产生并释放 EVs,尤其是肿瘤细胞[1-2]。越来越多的证据表明,在肿瘤的发生和发展过程中,肿瘤来源的胞外囊泡能够通过传递囊泡中的内容物来改变受体细胞的生物学功能,比如导致免疫抑制,诱导血管生成,甚至促进肿瘤转移[3-4]。近年来,关于胞外囊泡与肿瘤关系的研究越来越受到人们的关注。
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含不同启动子的重组9型腺相关病毒载体转染大鼠心肌细胞表达效率的差异
9型腺相关病毒( AAV9)作为基因治疗心脏疾病的佳载体之一而成为近年来研究的热点[1],但影响AAV9转导效率的因素很多,其中载体上的启动子和受体细胞是否合适是直接影响到目的基因的转录效率和表达水平的重要因素[2],本研究分别选用含CMV启动子和CBA启动子的rAAV9携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染心肌细胞,比较两个启动子在心肌细胞的转录活性以及对细胞生长的影响,从而为AAV9携带靶基因高效转染心肌细胞以及应用于心脏疾病的基因治疗提供实验资料.
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纳米基因载体在生物医学领域中的研究进展
近年来,随着人类基因组计划的进展及对功能基因的不断探索,基因治疗的研究受到越来越多人的关注,由于其展现出良好的应用前景,纳米生物医学技术在多数发达国家已经被列入优先科研计划[1]。在基因治疗的过程中,如何将所需的功能基因更为有效、安全的导入受体细胞尤为重要。目前常用的基因转染载体有病毒型和非病毒型两种。病毒型载体的转运能力较强,但其携带基因的大小及数量有限、靶向特异性差,且可诱发机体产生免疫反应[2],甚至存在较为严重的生物安全隐患[3],因此应用受到了较多的限制;非病毒型载体虽然无免疫原性,较为安全,但是其在体内存在不稳定性、转染效率低的缺点尤为突出。由此可见,目前安全、低毒、靶向及转染效率等问题迫切需要解决。
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肝细胞移植技术新进展
与传统的原位肝移植相比,肝细胞移植具有简单易行、应用灵活等优点,因而引起了临床上的广泛关注.现已证明,肝细胞移植对生物(病毒)、化学(肝毒性药物)、物理(外伤)等各种原因引起的急性肝功能衰竭起着代偿和支持作用;又可以纠正由于肝代谢酶缺陷引起的遗传性代谢疾病.微载体技术的应用和肝细胞体外转化的成功,使肝细胞作为基因治疗的受体细胞成为可能.随着介入放射学的发展,可运用经导管技术进行肝细胞移植术,对介入放射学而言,这是一极富吸引力和挑战性的新领域.
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基因疗法能治愈糖尿病吗?
糖尿病是世界上严重的慢性非传染性疾病之一.长期的血糖异常可导致眼睛、心脏、肾脏、神经、血管等多器官组织的进行性损害,导致很高的伤残率和死亡率.什么是基因治疗?基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗目的.也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中,使外源基因制造的产物能治疗某种疾病.从广义说,基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术.
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脊髓损伤的基因治疗
许多年来,人们一直在苦苦探索脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后继发性损害所造成的神经功能永久性缺失的机理及使其功能恢复的良方,但收效甚微.自1990年美国国立卫生研究院(NIH)首次成功地进行腺苷脱胺酶缺乏的基因治疗以来,基因治疗已成为当前生物医学中进展快的领域之一,其基本原理是:把外源基因通过基因转移技术插入病人适当的受体细胞中,使其得以表达,发挥生物学活性,从而纠正或补偿因基因缺陷和异常所引起的疾患.
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子宫颈癌和盆腔淋巴结组织中趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12基因DNA的表达及其意义
宫颈癌转移是一个复杂的、连续的、多阶段的过程,表现出高度的组织特异性.能转移到特定器官的肿瘤细胞,均具有多种机制促进其侵袭组织、刺激血管或淋巴管形成、产生各种细胞因子等作用,为肿瘤转移创造条件[1].趋化因子在肿瘤转移中发挥着多种作用,包括控制白细胞浸润至肿瘤、调节肿瘤相关的血管生成、激活宿主对肿瘤的特异性免疫应答、以旁分泌方式刺激肿瘤细胞增殖、控制肿瘤细胞运动等[2].趋化因子的基本功能就是对表达有相应趋化因子受体细胞的定向趋化作用,趋化因子和趋化因子受体的相互作用能诱导靶细胞趋化性迁移及细胞骨架的重排,增强靶细胞与内皮细胞的黏附能力等,在肿瘤的生长和转移过程中发挥着重要的作用[1].本研究通过对宫颈癌和盆腔淋巴结组织中的趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12基因DNA表达的研究,探寻其临床意义.
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关于移植后微嵌合体的研究进展
嵌合是指受体在接受异体或异种移植物后,其体内存在着供体细胞,同时在移植物内存在受体细胞,这种供、受体细胞间相互移行、相互存在的现象称为嵌合现象.
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一种新的细胞间的通讯方式:Exosomes
在多细胞生物中,细胞问的信息传递是由一系列信息分子参与完成的有序的级联反应,为维持机体的稳定状态,以适应各种生命活动是必不可少的.相对于已知的细胞通讯方式,目前一种起源于细胞内吞途径中的多泡体(Multivesicular body,MVB)的膜性小囊泡Exosomes在细胞信息传递中的作用日渐受到重视.Exosomes存在于血清、唾液、尿液等细胞外液中,并能将其携带的蛋白质、mRNAs及microRNAs递送至受体细胞而发挥生物学作用,揭示了Exosomes在细胞间的信息传递作用[1].
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肝癌自杀基因治疗新进展
自杀基因治疗是指利用基因工程技术将某些细菌或病毒基因<目的基因)与载体相结合,并导入肿瘤细胞中,在一定条件下目的基因持续高效表达,从而杀伤肿瘤细胞,所以又称为"病毒导向酶解药物前体疗法.这些病毒或细菌的基因表达产物(酶)能导致受体细胞的死亡,因此将这些基因称为自杀基因.本文就肝癌自杀基因治疗的新进展作一综述.
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用于临床的基因工程药物
基因工程药物的生产是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质,然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来,经过系列操作后将基因放入可以大量生产的受体细胞,如细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞中去,在受体细胞不断繁殖过程中,大规模地生产具有预防和治疗这种疾病的蛋白质,即基因疫苗和药物.国外现有的基因药物,国内大部分也能生产,我国目前生产的常用于临床的基因工程药物主要有:
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外泌体调控受体细胞DNA甲基化的研究进展
DNA甲基化是重要的表观遗传学途径之一,可引起DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式等改变,从而影响基因的表达.外泌体是一类由多种细胞分泌,具有双层膜结构的细胞外囊泡,可通过转运相关生物活性因子至受体细胞,参与调控受体细胞DNA甲基化过程,影响受体细胞的生物学功能.本文对外泌体调控受体细胞DNA甲基化的研究进展作一综述.
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生物信息学(2):基因工程技术简介
基因工程的特点与基本步骤基因工程通常称为重组DNA技术(recombinant DNA technique),又称为基因克隆(gene cloning)或分子克隆(molecular cloning),是用人工方法将外源基因与DNA载体结合形成重组DNA,然后引入某一受体细胞中,使外源基因复制并产生相应的基因产物,从而获得生物新品种的一种崭新育种技术.
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IL-2基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响研究
白细胞介素-2(IL-2)是T细胞活化分泌,能与T细胞上IL-2R结合后,增强T细胞增殖的一种重要的细胞因子.CD3AK细胞是利用抗CD3单克隆抗体与TCR/CD3复合体的结合,同时提供少量外源IL-2,激活产生的具有细胞毒效应的杀伤细胞,常用于过继免疫治疗.临床资料表明体内使用外源性IL-2常导致毒副作用.能否利用基因转移技术将IL-2基因导入CD3AK细胞,使其表达并维持CD3AK的活化状态呢?抗CD3McAb活化的T细胞作为逆转录病毒载体的受体细胞,已有应用于IL-1β基因转移研究的报道.本实验利用逆转录病毒载体将IL-2基因导入CD3AK细胞中,探讨基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响.
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基因工程在医学上应用
基因工程是指不同生物体的脱氧核糖核酸在体外经过酶切和连接,构成重组脱氧核糖核酸分子,然后转入受体细胞,使外源基因在受体细胞中表达.
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免疫抑制剂和移植物抗宿主病的防治
移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是移植物的免疫细胞攻击受体细胞而发生的免疫炎症反应,是同种异体造血干细胞移植的主要并发症,目前主要通过免疫抑制药物进行防治.
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大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术
本实验应用PNAg和Con Ag细胞化学技术,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应.材料与方法:雄性SD大鼠4只,体重250~300g.动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,进行心脏灌注固定(固定液为4%多聚甲醛+0.1M PB(pH7.3).动物静置于4℃,3hr后取出大脑,用上述固定液后固定3hr.取具有海马的脑组织,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片.PNAg和Con Ag的制备:1)枸橼酸还原法配制 7nm胶体金;2)胶体金分别与PNA和Con A稀释液按一定比例结合;3)超速离心, 4℃,36000/rpm 45分钟;4)收集PNAg和Con Ag结合物,保存备用. PNAg和Con Ag细胞化学反应:切片脱蜡至水后,分别用PNAg液或Con Ag 液混合孵育,37℃,2hr.对照组用D-半乳糖和α-甲基甘露糖作抑制对照试验.细胞化学反应后,切片进行银加强处理.本实验结果显示,大鼠海马CA区神经细胞PNAg和Con Ag细胞化学明显呈阳性显示,用D-半乳糖和α-甲基甘露糖作抑制对照试验的对照组结果呈阴性显示.存在于细胞膜上复合多糖末端的糖基常是唾液酸,当细胞表面唾液酸含量出现下降时,其下方的半乳糖胺或甘露糖糖基相对暴露增加.从而可引起细胞在诸如信号转导、分化、凋亡等生物学功能和行为方面产生重要的变化.由于凝集素Con A和PNA是半乳糖基和甘露醇糖基的重要配体,因此,本实验Con Ag和PNAg细胞化学在神经细胞的成功显示不仅在细胞生物学方面,而且在神经生物学研究方面均具有很好的应用前景.
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心血管疾病标志物的新秀:循环microRNA
心血管疾病是西方国家患病率和病死率第一位的疾病。现在已有证据证实microRNAs(miRNA)是调节包括心血管疾病在内的许多疾病的关键调节因子。近发现,通过不同的载体,miRNA可以传输至细胞外,这一发现再次激起了国内外学者的研究热情,通过检测循环中的miRNA可以提供疾病诊断及治疗的信息。与传统的生物标志物相比,循环miRNA有显著的优越性,这种存在于细胞外的miRNA已被证明能在循环血液中稳定存在,因此检测循环血液中的miRNA成为可能。尽管部分miRNA精确的细胞来源还不十分确定,但前期的研究已经证明了miRNA能作用于受体细胞,并调节靶基因的转录并影响蛋白的合成。许多miRNA的表达是细胞或组织特异性的,而它们的表达水平也与相应组织或细胞的病理或生理过程有关,异常的表达反应了机体的病理状态。因此循环miRNA作为一种新的疾病标志物得到了越来越多的重视。在正常人和肿瘤等疾病患者体内循环miRNA的表达谱存在明显的差异,因次,循环miRNA很可能成为诊断疾病的非侵入的、准确的新型生物标志物,有广阔的前景。本综述将首先讨论循环miRNA,作为存在于细胞外的核酸,在循环血液中是如何稳定存在并发挥调节作用的。其次总结循环miRNA作为新型标志物在心血管及相关领域的新进展,包括:心肌梗死[1],心力衰竭[2],动脉粥样硬化[3]和高血压[4]等。