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miR-30d反义核苷酸对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究miR-30d在结直肠癌组织中的表达情况,并分析miR-30d反义寡核酸(antisense oligonucleotide,ASO)对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:运用荧光定量PCR定量检测102例结直肠癌组织及对应癌旁组织中miR-30d的表达；通过miR-30d ASO降低结肠癌细胞中miR-30d的表达,利用MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞技术观察miR-30d ASO对结肠癌细胞产生的生物学效应.结果:在102例结直肠癌病例中,52.94％(54/102)的结直肠癌组织mi R-30d表达明显高于对癌旁组织(P＜0.05); miR-30d ASO可以显著降低miR-30d的表达(P＜0.05); MTT实验结果显示结肠癌细胞转染miR-30d ASO后,24、48和96 h的细胞存活数量均明显低于空白对照组和转染无义干扰组(P＜0.05)；克隆形成实验结果显示miR-30d ASO组克隆形成率比空白对照组和转染无义干扰组显著降低(P＜0.05)；流式细胞仪检测结果显示转染miR-30d ASO组较两个对照组细胞凋亡指数明显增加(P＜0.05)；另外,降低miR-30d的表达后发现Bcl-2 mRNA和蛋白均明显下降(P＜0.05).结论:miR-30d在结肠癌组织中表达上调,降低miR-30d的表达可有效抑制结肠癌细胞生长、促进细胞凋亡.miR-30d有可能成为结肠癌基因表达调控的新靶点.
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miR-96对胃癌细胞侵袭迁移的影响
目的:分析MicroRNA-96(miR-96)在胃癌组织中的表达情况;体外研究miR-96反义寡核酸技术(antisense oligonucleotide,ASO)对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法:运用荧光定量PCR检测122例胃癌组织及对应正常组织中miR-96的表达;通过miR-96 ASO降低胃癌细胞中miR-96的表达,采用Transwell实验和划痕实验观察miR-96ASO对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响,同时运用Western blot的方法检测侵袭相关蛋白的表达变化.结果:在122例胃癌病例中,62.30％(76/122)的胃癌组织miR-96表达明显高于对应正常组织(P＜0.05);与空白对照组和转染无义ASO组相比,miR-96 ASO可以显著降低miR-96的表达(P＜0.05); Transwell实验和划痕实验结果显示转染miR-96 ASO后,胃癌细胞的侵袭迁移能力明显下降,同时相关侵袭蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9表达下降(P＜0.05).结论:miR-96在胃癌组织中表达上调,降低miR-96的表达可有效抑制胃癌细胞的侵袭和迁移.miR-96有可能成为胃癌侵袭转移调控的新靶点.
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胰腺癌MiR-224的表达与细胞增殖和凋亡
目的:分析miR-224 在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡中的意义.方法:采用TagMan MGB探针法定量分析40例原发性胰腺癌及对应的癌旁组织MiR-224 的表达; 利用反义技术降低胰腺癌细胞(Aspc-1和Bxpc-3)中miR-224 的表达; 采用MTT比色法检测细胞增殖的改变,利用流式细胞技术检测胰腺癌细胞周期和凋亡情况.结果:在40例胰腺癌病例中,43%(17/40)的胰腺癌组织miR-224 表达明显高于癌旁组织(P <0.05); 反义miR-224 转染胰腺癌细胞Aspc-1和Bxpc-3后,miR-224 的表达明显降低,Aspc-1和Bxpc-3胰腺癌细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降; 另外降低miR-224 的表达,Aspc-1和Bxpc-3胰腺癌细胞早期凋亡明显增加.结论:miR-224 在胰腺癌组织中表达上调,降低其表达能明显抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞的生长和诱导细胞早期凋亡增加,miR-224 有可能成为胰腺癌基因表达调控的新靶点.
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反义miR-224对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 体内外观察miR-224反义核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测120例胃癌组织及其癌旁组织中miR-224 mRNA的表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、流式细胞技术及裸鼠体内实验观察miR-224 ASO对SGC7901细胞产生的生物学效应.结果 120例胃癌组织和癌旁组织中miR-224 mRNA的相对表达水平分别为0.28 ±0.07和0.12±0.03,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-224 ASO组细胞中miR-224 mRNA 的相对表达水平为0.09 ±0.01,明显低于对照ASO组(0.50 ±0.07,P＜0.05).MTT法检测结果显示,miR-224 ASO组细胞转染后24、48、72 h的细胞生长抑制率分别为53.6％、59.1％和70.1％,对照ASO组分别为12.3％、17.4％和24.7％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).克隆形成实验结果显示,miR-224 ASO组的细胞克隆形成率为(5.33±0.74)％,对照ASO组为(33.33±8.38)％,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,miR-224 ASO组和对照ASO组的细胞凋亡指数分别为(15.68±1.46)％和(3.36±0.88)％,差异有统计学意义(P=0.02).miR-224 ASO组细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为1.05 ±0.04和0.21 ±0.03,对照ASO组分别为4.87±0.96和0.88 ±0.09,差异均有统计学意义(均P＜0.01).体内研究显示,接种后30 d,miR-224ASO组裸鼠的肿瘤体积明显低于对照ASO组,差异有统计学意义(P=0.01).结论 miR-224在胃癌组织中表达上调,降低miR-224的表达可有效抑制胃癌细胞的生长,并促进细胞凋亡.miR-224有可能成为胃癌基因表达调控的新靶点.
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miR-224对hep3B细胞增殖和凋亡的影响
背景与目的：miR-224在肝细胞癌中呈过表达，并参与癌症的侵袭与转移过程，该研究通过观察miR-224体内、外对Hep3B细胞增殖和凋亡的影响，探讨miRNA-224与肝细胞癌发生、发展之间的关系。方法：运用实时荧光定量PCR定量分析miR-224反义寡核酸技术(antisense oligonucleotide，ASO)对Hep3B细胞mRNA表达的影响；通过miR-224 ASO降低Hep3B细胞中miR-224的表达，采用MTT、克隆形成实验、流式细胞术及体内实验观察miR-224 ASO对Hep3B细胞产生的生物学效应。结果：Hep3B细胞miR-224 ASO转染组与对照组相比，miR-224水平明显下降(P<0.05)；MTT实验结果显示转染miR-224 ASO后，Hep3B细胞的存活数量明显低于对照组(P<0.05)；克隆形成实验结果显示miR-224 ASO组克隆形成率较对照组显著降低(P<0.05)；体内研究进一步证实miR-224 ASO可以抑制肿瘤细胞的增殖，从而导致肿瘤生长较对照组慢(P<0.05)，肿瘤的体积较对照组明显减小(P<0.05)；流式细胞术检测结果显示，转染miR-224 ASO组较对照组细胞凋亡明显增加(P<0.05)；另外，降低miR-224的表达后发现Bcl-2的mRNA和蛋白都明显下降。结论：miR-224在Hep3B细胞中表达上调，降低miR-224的表达可有效抑制Hep3B细胞生长、促进细胞凋亡。miR-224有可能成为肝细胞癌表达调控的新靶点。
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miR-10 b对胃癌细胞侵袭迁移的影响
目的：分析miR-10b在胃癌组织中的表达情况；探讨miR-10b ASO对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法运用RT-PCR检测120例胃癌组织及对应正常组织中miR-10b的表达；通过miR-10b ASO降低胃癌细胞中miR-10b的表达，采用transwell实验和划痕实验观察miR-10b ASO对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响，同时运用western blot的方法检测侵袭相关蛋白的表达变化。结果在120例胃癌病例中，48．33％（58／120）的胃癌组织 miR-10b 表达明显高于19．17％（23／120）对应正常癌旁组织（P＜0．05）。与空白对照组和转染随机ASO组相比，miR-10b ASO可以显著降低miR-10b的表达（ P＜0．05）；Transwell实验和划痕实验结果显示转染miR-10b ASO后，胃癌细胞的侵袭迁移能力下降明显，同时相关侵袭蛋白RHOC表达下降（P＜0．05）。结论 miR-10b在胃癌组织中表达上调，降低miR-10b表达可有效抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。 miR-10b有可能成为胃癌侵袭转移调控的新靶点。
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反义 miR-224对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的：检测微小RNA miR-224在乳腺癌组织中的表达，并在体内外研究miR-224 ASO对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用荧光定量PCR定量分析120例乳腺癌组织及对癌旁组织中miR-224的表达；通过miR-224ASO降低乳腺癌MCF-7细胞中 miR-224的表达，采用 MTT、克隆形成实验、流式细胞技术及体内实验观察 miR-224ASO对MCF-7细胞产生的生物学效应。结果在120例乳腺癌病例中，63．33％（76／120）的乳腺癌组织miR-224表达明显高于对癌旁组织（P＝0．00）；与对照组miR-224的表达量（0．50±0．07）相比，miR-224ASO可以显著降低miR-224的表达（0．09±0．01）（P＝0．00）；MTT实验结果显示转染miR-224 ASO后，24 h、48 h和96 h MCF-7细胞的存活数量均明显低于对照组（P＜0．05）；克隆形成实验结果显示miR-224ASO组克隆形成率[（5．33±0．74）％]较对照组[（33．33±8．38）％]显著降低（P＝0．00）；体内研究进一步证实miR-224ASO可以抑制肿瘤细胞的增殖，从而导致肿瘤生长较对照慢（P＝0．01），肿瘤的体积较对照组明显减小（P＝0．01）；流式细胞仪检测显示转染miR-224ASO组（15．68±1．46）较对照组（3．36±0．88）细胞凋亡指数明显增加（P＝0．02）；另外，降低miR-224的表达水平发现Bcl2的mRNA和蛋白水平均明显下降（P＝0．00，P＝0．00）。结论 miR-224在乳腺癌组织中表达上调，降低miR-224的表达可有效抑制乳腺癌细胞生长、促进细胞凋亡。 miR-224有可能成为乳腺癌基因表达调控的新靶点。
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miR-93在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究分析miR-93在结肠癌组织中的表达,探讨其在结肠癌细胞增殖、细胞周期及凋亡中的意义.方法 采用TagMan MGB探针法定量分析101例结肠癌组织及癌旁组织miR-93的表达;利用反义技术降低结肠癌细胞SW480和LoVo的miR-93的表达;采用MTT比色法检测细胞增殖的改变;利用流式细胞技术检测结肠癌细胞周期和凋亡情况.结果 在101例结肠癌组织中,53.47%(54/101)的结肠癌组织miR-93表达明显高于癌旁组织(P<0.05);反义miR-93转染结肠癌细胞SW480和LoVo后,miR-93的表达明显降低,细胞生长受到明显抑制,主要停滞在 G0/G1 期,早期凋亡明显增加.结论 miR-93在结肠癌组织中表达上调.降低其表达能明显抑制SW480和LoVo细胞的生长和诱导细胞早期凋亡.
