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p27~(Kip1)调控永生化人神经前体细胞分化的机制
目的 研究p27~(Kip1)在永生化人神经前体细胞分化中的作用,探讨神经前体细胞的分化机制.方法 取本课题组已建立的永生化人神经前体细胞系hSN12W-TERT细胞(第12代)进行培养,在细胞进入对数生长期时给予1μmol/L全反式视黄酸(RA)诱导,重复诱导3次,每次均在诱导的第3、5、7天收集细胞,用流式细胞仪分析RA诱导第3天细胞周期的变化,用免疫印迹法检测RA诱导第3、5、7天p27~(Kip1)、p21~(cip1)细胞周期蛋白依赖激酶2(cdk2)及S期激酶相关蛋白2(skp2)的变化.结果 流式细胞术结果显示,hSN12W-TERT细胞经1μmol/L RA诱导3d后,G0/G1期细胞的比例由77.25%上升至85.68%,而S期的比例由9.38%下降到8.57%.免疫印迹法结果显示,RA诱导第3天,hSN12W-TERT细胞p27~(Kip1)蛋白表达比未经RA诱导的细胞增加,并在RA诱导第5天达到高峰(P<0.05).未经RA诱导的正常hSN12W-TERT细胞p21~(cip1)蛋白表达弱,RA诱导后p21~(cip1)蛋白的表达略呈下降趋势.RA诱导前后hSN12W-TERT细胞cdk2蛋白的表达变化不明显,但反映cdk2活性的磷酸化cdk2(p-cdk2)的表达在RA诱导后明显下降,同时,参与p27~(Kip1)泛素降解途径的重要因子skp2的表达在RA诱导后明显下降.结论 在RA诱导hSN12W-TERT细胞分化的过程中,p27~(Kip1)通过抑制cdk2的活性而发挥促细胞分化的作用,且RA诱导后p27~(Kip1)蛋白含量增加与其泛素降解途径被抑制密切相关.
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用及其机制
目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因pAkt、Skp2 及P2 7kip1表达的变化.方法:将不同浓度的渥曼青霉素(O、10、50、100、200 nmol/L)分别作用于对数生长期的人肝癌HepG2细胞3、10、24 h,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测pAkt、Skp2及P27kip1蛋白表达变化,RT-PCR检测Skp2及P27kip1mRNA表达变化.结果:渥曼青霉素可明显抑制HepG2细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.渥曼青霉素可导致G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P＜0.05).随着渥曼青霉素浓度的增加及作用时间的延长,HepG2细胞凋亡率逐渐升高(8.46％±1.17％至28.03％±2.67％)(P＜0.05).Western blot结果显示渥曼青霉素可下调pAkt和Skp2蛋白的表达,上调P27kip1蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR结果显示渥曼青霉素可明显下调Skp2 mRNA的表达,而P27kip1mRNA表达无明显变化.结论:PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,引发G0/G1期阻滞并诱导其凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路参与Skp2及P27kip1调控有关.
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SKP2在大肠癌组织中的表达及预后意义
目的:探讨SKP2在大肠癌中的表达和预后作用.方法:采用SP免疫组化法检测68例大肠癌手术切除组织标本中SKP2和P27的表达,用Kaplan-Meier和Cox回归分析法进行生存分析.结果:在68例大肠癌组织中,SKP2和P27的阳性表达率分别为41.2%(n=28)和52.9%(n=36).SKP2的表达与组织分级显著相关(x2=14.073,P=0.001).SKP2表达与年龄、性别和AJCC分期无关(P＞0.05).SKP2和P27负相关(r=-0.528,P=0.0001).SKP2高表达组的总生存期较SKP2低表达组短(31.5±4.0 mo vs 54.5±2.1 mo,P＜0.01).多因素Cox回归分析表明,SKP2表达是大肠癌的独立预后因素(RR=6.227,P=0.033).结论:SKP2表达可以作为大肠癌患者预后的指标.
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鼻咽癌组织Skp2与ABCG2蛋白表达及其临床意义
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase interacting protein 2,Skp2)与三磷酸腺苷结合蛋白G亚族成员2(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)在鼻咽癌组织中的表达水平,及其与临床病理因素的关系.方法 收集2013-01-12-2014-03-30,韶关市粤北人民医院耳鼻喉科行病理活检的63例鼻咽癌组织及20例正常鼻黏膜组织,采用免疫组织化学染色检测Skp2和ABCG2蛋白的表达,统计分析Skp2和ABCG2蛋白表达间及与肿瘤临床病理因素间的相关性.结果 在鼻咽癌组织中,Skp2蛋白阳性表达率为74.6％ (47/63),ABCG2为61.9％(39/63),均较正常鼻黏膜组织的20.0％ (4/20)和15.0％(3/20)显著升高,P值均＜0.001.在鼻咽癌组织中,Skp2和ABCG2蛋白表达呈显著正相关关系,r=0.751,P＜0.001.高表达Skp2和ABCG2蛋白与肿瘤淋巴结转移(P值分别为0.003和＜0.001)及高TNM分期(P值分别为0.003和0.013)呈显著正相关.结论 Skp2和ABCG2蛋白在鼻咽癌组织中表达上调,并与肿瘤恶性临床病理特征有关.Skp2和ABCG2蛋白可能成为鼻咽癌早期诊断的重要标志物及生物靶向治疗的有效靶点之一.
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叉头框转录因子M1及S期激酶相关蛋白2在基底细胞样乳腺癌中的表达及其意义
目的 探讨叉头框转录因子M1(FOXM1)及S期激酶相关蛋白2(Skp2)在基底细胞样乳腺癌(BLBC)中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学法对95例BLBC、100例非BLBC及95例癌旁组织中FOXM1及Skp2的表达进行检测.结果 BLBC组织中FOXM1及Skp2的阳性表达率分别为76.84％(73/95)和58.95％(56/95),高于癌旁正常乳腺组织[25.26％(24/95)、3.16％(3/95)]及非BLBC组织[57.00％(57/100)、40.00％(40/100)](均P＜0.016 7).二者的表达与BLBC的淋巴结转移及临床分期相关(P＜0.05).相关性分析显示FOXM1与Skp2的表达呈正相关(r=0.353,P＜ 0.01).结论 FOXM1及Skp2在BLBC中呈高表达,二者在BLBC的发生、发展过程中可能具有协同及相互调节作用.FOXM1及Skp2可能作为BLBC预后判断的指标.
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S期激酶相关蛋白2在胶质瘤中的表达及临床意义
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胶质瘤中的表达情况及其功能意义.方法 收集海军总医院神经外科2001年6月-2006年6月手术切除的原发胶质瘤标本60例,根据WHO胶质瘤分类法(2000年),其中星形细胞瘤(WHOⅡ级)、间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)、胶质母细胞瘤(WHO Ⅳ级)各20例,另取4例正常脑组织作为对照.采用Western blotting及免疫组化法检测正常脑组织及不同恶性程度胶质瘤组织中Skp2的表达情况.结果 western blotting结果显示,正常脑组织中Skp2表达明显低于胶质瘤组织,且随着胶质瘤恶性程度的增高,Skp2蛋白表达逐渐增强.免疫组化染色显示,正常脑组织及胶质瘤组织中均有Skp2阳性表达,其中正常脑组织和WHOⅡ级胶质瘤中Skp2呈弱阳性,多位于胞质,WHOⅢ级和Ⅳ级胶质瘤中Skp2表达呈强阳性,阳性染色颗粒集中于细胞核.胶质瘤组织中的血管内皮细胞也有Skp2阳性染色,且在血管周围有Skp2阳性染色的肿瘤细胞聚集.统计学分析显示,Skp2在高度恶性胶质瘤组织(WHOⅢ级、Ⅳ级)中的表达明显高于正常脑组织和低度恶性的胶质瘤组织(WHOⅡ级),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 随着胶质瘤的恶性进展,Skp2表达逐渐增强,且由细胞质转移至细胞核；在胶质瘤组织新生血管内皮细胞及血管周围肿瘤细胞中均有Skp2阳性表达.Skp2的表达变化可能与胶质瘤的恶性进展、新生血管的形成及肿瘤细胞的转移密切相关.
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RNAi沉默Skp2抑制胃癌细胞SGC7901侵袭作用的实验研究
目的 研究RNA干扰(RNAi)沉默S期激酶相关蛋白2(Skp2)对胃癌细胞侵袭的影响.方法 以胃癌细胞株SGC7901为实验对象,构建、并筛选出以Skp2基因为靶向的稳定表达载体,导入胃癌细胞,筛选获得稳定转染细胞株.采用侵袭实验检测侵袭能力的变化;明胶酶谱法观察基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9蛋白的活性;Western Blotting检测p27、p21、Sp1和Kazal基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白(RECK)的表达.结果 侵袭实验显示:与对照组相比,实验组侵袭能力显著下降,侵袭细胞数显著减少(P＜0.05);明胶酶实验显示:实验组中MMP-2、MMP-9活性降低;Western Blotting显示:实验组细胞p21、p27和RECK蛋白表达显著增强,Sp1蛋白表达下调(P＜0.05).结论 通过Skp2-shRNA特异性沉默Skp2基因可下调Sp1,增强RECK表达,降低胃癌细胞在体外的侵袭能力.
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S期激酶相关蛋白2与p27和第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达与其发生发展的关系
目的 探讨卵巢上皮性肿瘤中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)基因表达与其发生发展的关系.方法 用免疫组织化学法检测卵巢良性肿瘤(30例)、卵巢交界性肿瘤(30例)及卵巢癌(50例)中Skp2、p27和PTEN蛋白的表达.结果 Skp2在卵巢癌中的表达(48.00％)明显高于良性肿瘤(0.00％)和交界性肿瘤(0.00％),差异有统计学意义(P＜0.01);p27蛋白与PTEN蛋白在卵巢良性肿瘤(分别为90.00％、93.33％)和交界性肿瘤中(70.00％、70.00％)的表达明显高于卵巢癌(22.00％、40.00％),差异有统计学意义(P＜0.01).Skp2、p27和PTEN蛋白表达与卵巢癌的病理类型无关(P＞0.05);卵巢癌中Skp2和p27的表达呈负相关(r=-0.637,P＜0.01);Skp2和PTEN蛋白表达呈负相关(r=-0.726,P＜0.01);p27和PTEN蛋白表达呈正相关(r=0.719,P＜0.01).结论 Skp2高表达、p27和PTEN蛋白低表达可能在卵巢上皮性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,联合检测上述3种基因有助于判断卵巢癌的恶性程度和预后.
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5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响
目的：探讨体外不同浓度5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2表达的影响。方法不同浓度5-氟尿嘧啶0、10、20、40和80μg／ml作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h，通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组卵巢癌细胞增殖情况，采用免疫细胞化学染色法和Realtime PCR技术检测各组Skp2蛋白和mR-NA水平的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72h后，随着浓度的增加，细胞增殖受限明显，Skp2蛋白和mRNA表达水平明显降低，并与5-氟尿嘧啶的浓度呈负相关（ r＝－0．816，P＜0．05；免疫组化Skp2：r＝－0．926，P＜0．05；RealtimePCRmRNA：r＝－0．899，P＜0．05）。结论5-氟尿嘧啶能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖，并能抑制Skp2蛋白和mRNA的表达。
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应
目的 研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响.方法 将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况.结果 LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50 μmol/L的LY294002作用12 h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.
关键词： 胃肿瘤 PI3K/AKT 细胞凋亡 S期激酶相关蛋白2 非甾体抗炎药诱导基因-1 -
SCF-Skp2与肿瘤关系的研究
肿瘤的发生与细胞周期的失控密切相关,泛素蛋白酶体(SCF)途径降解细胞周期调控因子.而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对细胞周期G1期关卡起调控作用,在多数恶性肿瘤中表达增高.研究发现SCF-Skp2与肿瘤的进程、治疗、预后均有密切关系.
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大鼠系膜细胞增殖时S期激酶相关蛋白2表达的变化及机制
目的:探讨系膜细胞增殖时细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27kiP1的降解限速蛋白--S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的变化及其机制.方法:原代培养的大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20%胎牛血清(FCS)刺激组.MTT法检测细胞增殖;实时定量PCR和Western Blot检测p27kiP1和Skp2的mRNA、蛋白表达.结果:p27kiP1在静止期系膜细胞高丰度表达,20%FCS刺激诱导细胞增殖后p27kiP1蛋白表达显著下调;实时定量PCR研究结果显示p27kiP1的mRNA表达水平差异无统计学差异,p27kiP1蛋白和mRNA表达不一致.蛋白酶体抑制剂MG-132可显著改善系膜细胞增殖时p27kiP1蛋白水平的下降.Skp2表达在静止期系膜细胞几乎检测不出,20%FCS刺激诱导细胞增殖后Skp2表达量显著上调.结论:系膜细胞Skp2表达显著上调导致p27kiP1降解增加,可能是p27kiP1蛋白水平下降、系膜细胞增殖的重要原因,为进一步阐明疾病状态下系膜细胞增殖的机制提供了新的研究靶点.
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不同程度系膜细胞增殖性肾炎S期激酶相关蛋白2表达变化的研究
目的:探讨不同程度系膜细胞增殖性肾炎S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的变化.方法:选取经肾穿刺活检证实为系膜细胞增殖性肾炎的病理切片,根据系膜细胞增殖的程度分为轻度、中度、重度3组,每组6例,进行PAS染色、BrdU免疫荧光染色和Skp2的免疫组化染色.结果:(1)BrdU间接免疫荧光结果显示在轻度系膜增殖性肾炎,偶见BrdU染色阳性细胞(0～1个/肾小球);在中度系膜增殖性肾炎,BrdU染色阳性细胞为(9.8±1.1)个/肾小球;重度增殖性肾炎为(16.3±2.8)个/肾小球,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).(2)Skp2免疫组化结果显示在肾小球,Skp2主要在系膜细胞的细胞核表达,呈棕黄色颗粒;随着系膜增殖程度的加重,肾小球内Skp2阳性细胞百分数显著增加[轻度(2.22±0.75)% vs 中度(7.16±2.38)% vs 重度(15.89±4.56)%],各组间差异有统计学意义(P＜0.05).(3)Pearson相关分析结果显示BrdU染色阳性率和肾小球内Skp2阳性细胞百分数高度相关(R=0.81).结论:在人类系膜增殖性肾炎,随着系膜细胞增殖程度的加重,肾小球内Skp2阳性细胞数的比例显著增加,处于S期的系膜细胞也显著增加,为进一步阐明疾病状态下系膜细胞增殖的机制提供了新的研究靶点.
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Skp2在妇科肿瘤中的表达和临床意义
S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对正常细胞周期起调控作用,在多数恶性肿瘤中表达增高.研究发现Skp2与肿瘤的预后、恶性进程、治疗均有密切关系.现就Skp2与恶性肿瘤的关系作一综述.
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子宫内膜癌组织S期激酶相关蛋白2及磷酸酶和张力蛋白基因表达相关性分析
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)及磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN)在不同子宫内膜组织中的表达及其与子宫内膜癌发生、发展的关系.方法 选取中国医科大学附属盛京医院2008-2010年手术切除的59例子宫内膜腺癌标本.患者年龄36～ 70岁,平均54岁.另选取30例不典型增生子宫内膜和30例增生期子宫内膜标本,应用免疫组织化学SP法和免疫印迹法(western blotting)检测Skp2和PTEN蛋白的表达水平,分析其表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系.结果 Skp2在子宫内膜癌中表达高于不典型增生和正常增生期内膜,差异有统计学意义(P＜0.05),在晚期子宫内膜癌、低分化组和有淋巴结转移组较早期、高中分化组和无淋巴结转移组表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05).PTEN在子宫内膜癌中的表达低于不典型增生和正常增生期内膜,差异有统计学意义(P＜0.05),在晚期子宫内膜癌和低分化组表达低于早期和高中分化组,差异有统计学意义(P＜0.05).在子宫内膜癌中Skp2表达增高,PTEN表达下降,二者呈负相关.结论 Skp2和PTEN可能参与子宫内膜癌的发生发展过程.
关键词： 子宫内膜癌 S期激酶相关蛋白2 磷酸酶和张力蛋白基因 免疫组织化学 免疫印迹 -
IGF-1在人非小细胞肺癌细胞增殖中的作用
目的探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）对人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法 MTT比色法检测0.1,1,10,100 ng/ml IGF-1对非小细胞肺癌系腺癌A549、鳞癌LK2、大细胞肺癌H460细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）、Western blot分析IGF-1处理前后各肺癌细胞的细胞周期变化,S期激酶相关蛋白2（SKP2）和CDC20同源蛋白1（CDH1）的表达变化。结果在非小细胞肺癌系A549、LK2、H460中,不同浓度的IGF-1均显示有促进细胞增殖的作用（P〈0.05）,其中1 ng/ml IGF-1作用后细胞增殖率达到峰值;与DMSO组相比,处理组S期细胞增加（P〈0.01）,SKP2蛋白表达增加（P〈0.05）,但CDH1蛋白表达却无明显变化（P〉0.05）。结论非小细胞肺癌细胞中IGF-1可能是通过SKP2蛋白表达的增强,负性调控p27作用,加速细胞周期的进程。
关键词： 胰岛素样生长因子1 肺癌 S期激酶相关蛋白2 CDC20同源蛋白1 细胞增殖 -
罗格列酮对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的影响及机制
目的：探讨罗格列酮对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的影响和可能机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为罗格列酮组及对照组。观察移植瘤生长情况，HE染色观察移植瘤细胞形态，流式细胞术（ FCM）分析细胞周期及凋亡情况，Western印迹法检测移植瘤细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、S期激酶相关蛋白2（Skp2）及细胞周期蛋白激酶抑制剂P27 kip1蛋白的表达情况。结果研究结束时，罗格列酮组移植瘤体积与重量均明显小于对照组，体积抑制率为52.13％，重量抑制率为65.63％。罗格列酮组移植瘤细胞G0／G1期比例及凋亡率均显著高于对照组（P＜0.05）。罗格列酮组移植瘤细胞PTEN及P27kip1蛋白的表达量明显高于对照组，pAkt及Skp2蛋白表达量明显低于对照组（ P＜0.05）。结论罗格列酮对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的生长有抑制作用，可引发移植瘤细胞G0／G1期阻滞并诱导其凋亡，其机制可能与罗格列酮上调PTEN蛋白的表达，抑制 PI3K／Akt信号通路，下调Skp2蛋白，导致 P27kip1蛋白水平升高有关。
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Skp2-siRNA对Eca-109食管癌细胞系p27kip1蛋白表达的影响
目的 观察通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)使Skp2基因沉默转染后对食管癌Eca-109细胞株中p27kip1表达的影响.方法 以Eca-109食管癌细胞系作为实验对象,设计合成针对Skp2的siRNA并进行转染.实验分为转染组、空白对照组、转染对照组、阴性对照组.采用免疫组化方法(SP法)检测各组Eca-109食管癌细胞系p27kip1蛋白表达的情况,采用Imageproplus(IPP)测定累积光密度值(IOD).每张切片选5个视野,求IOD 均值.采用方差分析进行组间均数比较,以p<0.05表示差异有统计学意义.结果 ①RNAi-Mate转染Eca-109细胞6 h后用荧光显微镜检测,计数转染Eca-109细胞的效率＞80%,本实验选此比例作为实验浓度.②经过转染后24 h的细胞开始变圆,生长比同时间正常培养的对照组细胞缓慢,48 h后细胞出现凋亡,有部分细胞脱落,72 h后细胞脱落变多.③免疫组化检测结果显示:转染 24 h后p27kip1蛋白表达开始上升IOD值为7.295±0.277、48 h后上升明显IOD值为9.075±0.880、72 h 后p27kip1蛋白表达开始下降IOD值为3.506±0.160,与空白对照组相比较,差异有显著统计学意义(P<0.01,psiRNA=0.000),转染组24 h、48 h、72 h之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 将人Skp2-siRNA转染入Eca-109食管癌细胞系后,能有效通过下调Skp2的表达,而上调p27kip1蛋白的表达.说明Skp2在Eca-109食管癌细胞增殖调控中起到重要作用,RNAi技术有可能作为抑制肿瘤细胞生长的一种手段.
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舌鳞状细胞癌组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达及其临床意义
目的:检测舌鳞状细胞癌(舌癌)组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,探讨其在舌癌的发生发展及预后中的作用.方法:采用免疫组织化学法检测45例舌癌组织、30例癌旁组织和10例正常舌黏膜组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达情况;比较不同类型舌组织中各蛋白表达阳性率的差异;分析Cks1、Skp2和p27kip1蛋白表达与舌癌临床病理学参数的关系.结果:在舌癌组织中,Cks1和Skp2蛋白呈强表达,阳性表达率为73.3％和62.2％,在癌旁组织和正常舌黏膜组织中其阳性表达率依次降低,阳性表达率分别为23.3％、10.0％和36.7％、10.0％;在舌癌组织中,p27kip1蛋白表达明显减少或缺失,阳性表达率为24.4％,在癌旁组织中和正常舌黏膜组织中其阳性表达水平依次升高,阳性表达率分别为30.0％和70.0％;在舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率高于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P＜0.05),而p27kip1蛋白阳性表达率低于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P＜0.05).舌癌组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率与舌癌患者的年龄和性别无关联(P＞0.05);与癌组织淋巴结转移、TNM分期、分化程度和临床分期有关联(P＜0.05).结论:舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率升高、p27kip1蛋白阳性表达率降低,Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率的检测有助于判断舌癌的恶性程度和预后.
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下调Skp2表达诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡
目的 探讨在乳腺癌细胞系MCF-7中下调S期激酶相关蛋白(Skp2)表达诱导细胞凋亡及其机制.方法 应用RNAi方法在体外下调乳腺癌细胞系MCF-7中Skp2的表达水平,48小时后表阿霉素处理细胞,TUNEL和Hoechst 33258染色检测凋亡,Western Blot检测细胞周期调控相关因子及凋亡相关蛋白表达情况,研究其机制.结果 下调MCF-7中Skp2表达水平后,乳腺癌细胞凋亡增加.下调Skp2使p27、p21和CyclinE蛋白表达水平升高.表阿霉素处理MCF-7细胞后,Skp2蛋白水平下调.Skp2 siRNA与表阿霉素有协同诱导凋亡的作用,p53蛋白水平升高.结论 p27、p21和CyclinE在通过下调Skp2诱导的凋亡中发挥作用.Skp2 siRNA和表阿霉素协同诱导细胞凋亡,与p53依赖的凋亡途径有关.Skp2可能是乳腺癌治疗的靶点.
