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p27~(Kip1)调控永生化人神经前体细胞分化的机制
目的 研究p27~(Kip1)在永生化人神经前体细胞分化中的作用,探讨神经前体细胞的分化机制.方法 取本课题组已建立的永生化人神经前体细胞系hSN12W-TERT细胞(第12代)进行培养,在细胞进入对数生长期时给予1μmol/L全反式视黄酸(RA)诱导,重复诱导3次,每次均在诱导的第3、5、7天收集细胞,用流式细胞仪分析RA诱导第3天细胞周期的变化,用免疫印迹法检测RA诱导第3、5、7天p27~(Kip1)、p21~(cip1)细胞周期蛋白依赖激酶2(cdk2)及S期激酶相关蛋白2(skp2)的变化.结果 流式细胞术结果显示,hSN12W-TERT细胞经1μmol/L RA诱导3d后,G0/G1期细胞的比例由77.25%上升至85.68%,而S期的比例由9.38%下降到8.57%.免疫印迹法结果显示,RA诱导第3天,hSN12W-TERT细胞p27~(Kip1)蛋白表达比未经RA诱导的细胞增加,并在RA诱导第5天达到高峰(P<0.05).未经RA诱导的正常hSN12W-TERT细胞p21~(cip1)蛋白表达弱,RA诱导后p21~(cip1)蛋白的表达略呈下降趋势.RA诱导前后hSN12W-TERT细胞cdk2蛋白的表达变化不明显,但反映cdk2活性的磷酸化cdk2(p-cdk2)的表达在RA诱导后明显下降,同时,参与p27~(Kip1)泛素降解途径的重要因子skp2的表达在RA诱导后明显下降.结论 在RA诱导hSN12W-TERT细胞分化的过程中,p27~(Kip1)通过抑制cdk2的活性而发挥促细胞分化的作用,且RA诱导后p27~(Kip1)蛋白含量增加与其泛素降解途径被抑制密切相关.
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12(S)-HETE对大鼠系膜细胞和肾小球内p27~(kip1)表达的影响
目的:探讨12-脂氧化酶的活性代谢产物12(S)-HETE对系膜细胞和肾小球内p27~(kip1)表达的影响.方法:12(S)-HETE刺激的系膜细胞和皮下包埋的微型渗透泵长期持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球来观察p27~(kip1)的表达.采用总蛋白量/细胞数的比值作为细胞肥大的评价指标,利用RT-PCR和Western blot方法检测p27~(kip1) mRNA和蛋白的表达.结果:12(S)-HETE刺激能够直接诱导系膜细胞发生肥大.12(S)-HETE刺激的系膜细胞内p27~(kip1)mRNA水平没有变化,而p27~(kip1)蛋白的表达明显增加.然而,在微型渗透泵持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球内p27kip1mRNA水平和蛋白的表达均增加.结论:12(S)-HETE能够通过促进p27~(kip1)的高表达而参与细胞周期的调控,是引起肾小球系膜细胞和肾小球肥大、衰老的重要原因之一.
关键词： 12(S)-HETE p27~(Kip1) 系膜细胞 肾小球 -
p27~(kip1)表达在食管癌放射抗拒中的意义
目的 探讨p27~(kip1)表达与食管癌放射敏感性变化的关系.方法 通过γ射线反复照射人食管鳞癌细胞EC9706(累计放射剂量6 000 cGy),逐步筛选得到具有放射抗拒性的细胞EC9706R.采用克隆形成实验检测两种细胞的放射敏感性,流式细胞仪分析细胞周期特征,免疫细胞化学检测p27~(kip1)的表达.结果 筛选得到的人食管鳞癌细胞EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,EC9706R细胞SF_2=65.71%,D_0=2.20 Gy,D_q=1.61 Gy,N=2.07;EC9706细胞SF_2=46.72%,D_0=1.61 Gy,D_q=0.99 Gy,N=1.85,EC9706R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于亲本细胞;细胞周期检测显示EC9706R细胞G_1期比例较亲本细胞明显下降,而S期比例明显增加;免疫细胞化学结果 显示具有放射抗性的EC9706R细胞p27~(kip1)表达明显低于亲本细胞.结论 p27~(kip1)表达下调导致细胞周期变化,可能是食管癌细胞产生放射抗拒的机制之一.
关键词： 食管癌 p27~(Kip1) 放射抗拒 细胞周期
