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长期低剂量NaAsO2诱导人骨髓间充质干细胞的分化
目的 研究在建立抗砷细胞模型CAsE-人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)过程中,低剂量砷长期暴露对hBMSCs分化的作用. 方法 常规条件培养hBMSCs,实验组用1μmol/L的亚砷酸钠连续诱导hBMSCs≥12周,采用48h急性砷中毒实验检测细胞抗砷性的产生;细胞集落形成实验分析CAsE-hBMSCs的增殖能力;应用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测砷对Oct-4表达的影响;RT-PCR检测砷对ABCG2表达的影响. 结果 用1μmol/L的亚砷酸钠连续诱导12周后,hBMSCs获得抗砷性,砷诱导hBMSCs的LC 50为35.59μmol/L,平行培养的hBMSCs的LC 50为18.04μmol/L;与对照组比较,CAsE-hBMSCs不具有恶性增殖能力;Oct-4基因在第4代、第18代及砷诱导4周的hBMSCs中均有表达,但在亚砷酸钠诱导12周、15周后未检测到Oct-4的表达;Oct-4蛋白在第4代hBMSCs表达阳性,砷诱导15周的CAsE-hBMSCs中呈弱阳性表达,阳性颗粒分布在胞质内;实时定量结果 显示ABCG2在砷诱导15周的hBMSCs中的表达明显低于对照组(P<0.001). 结论 长期低剂量NaAsO2可诱导人骨髓间充质干细胞分化.
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大鼠气管损伤修复过程中ABCG2转运蛋白的表达
目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶(5-FU)造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.2.Western blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.
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ABCG2与恶性血液病耐药相关性的研究进展
ABCG2作为一种跨膜半转运蛋白,参与了内源及外源有害物质的外排,对机体正常组织起到了保护作用,但同时也介导了对多种化疗药物的外排,引起多药耐药,使许多恶性肿瘤患者对化学药物治疗不敏感,直接影响到临床预后.本文将对ABCG2基因的单核苷酸多态性(SNP)、ABCG2与干细胞和酪氨酸激酶抑制剂(TKI)之间的关系的一些研究进展做简要介绍,同时还对ABCG2与恶性血液病耐药相关性的临床研究结果做回顾性分析,从中可以看出目前研究中存在的问题及未来的研究方向.
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沉默ABCG2基因对人肺腺癌细胞GLC-82体内增殖影响的定量研究
目的 探讨ABCG2基因沉默对人肺腺癌细胞GLC-82体内增殖的影响.方法 将人肺腺癌细胞GLC-82、绿色增强荧光蛋白(EGFP)标记的细胞GLC-82/EGFP+与ABCG2基因沉默的细胞GLC-82/EGFP+/ABCG2-分别接种于裸鼠皮下,用免疫组化SP法及银染法,检测成瘤后瘤组织中细胞增殖指数Ki-67的变化与核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)在瘤细胞中的变化,测试肿瘤细胞Ag-NOR颗粒截面数、单个AgNOR颗粒面积、单个核AgNOR总面积,并用图像分析系统对ABCG2蛋白在瘤细胞中的表达进行定量分析.结果 裸鼠体内GLC-82/EGFP+/ABCG2-细胞成瘤组织与GLC-82、GLC-82/EGFP+细胞成瘤组织相比,前者ABCG2蛋白的表达明显减弱(P<0.05),Ki-67增殖指数显著降低(P<0.05)且瘤细胞AgNORs颗粒截面数、单个核内AgNOR总面积明显减少,而单个AgNORs颗粒面积增大,差异有显著性(P<0.05).结论 沉默ABCG2基因能抑制人肺腺癌细胞GLC-82在体内的增殖.
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端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对乳腺癌细胞生物学特性及干细胞富集的影响
目的：探讨人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸（hTERT ASODN）对乳腺癌MCF-7细胞系干细胞微球体富集及其生物学特性的影响。方法以人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸，脂质体介导转染，以正义序列转染作为对照。实验分设转染组（ASODN组），正义序列转染的对照组（SODN组）及空白对照组。采用无血清悬浮培养法观察转染对MCF-7干细胞微球体富集的影响。Western blot检测各组干性标记物CD44及ALDH1的表达。RT-PCR检测各组ABCG2、MDR1 mRNA的表达。采用单因素方差分析对各组数据进行统计学处理。结果 ASODN组干细胞微球体生长速率及球体体积明显差于两对照组。与空白对照及SODN组比较，Western blot 检测发现CD44与ALDH1在ASODN组细胞表达降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。RT-PCR 检测发现，在ASODN组细胞ABCG2及MDR1 mRNA的表达量均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。而空白对照组及SODN组两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 hTERT ASODN在抑制乳腺癌干细胞微球体的富集、降低乳腺癌细胞干性表达及其耐药性方面具有重要作用。
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常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌对人胃癌SGC7901细胞系HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:观察常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对人胃癌SGC7901细胞系低氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)、ABCG2表达的影响,初步探讨H.pylori在胃癌发生发展中的干细胞机制,及其与肿瘤微环境低氧的协同作用.方法:内镜下采集胃黏膜标本,行H.pylori培养并鉴定,PCR方法检测H.pylori CagA+基因.CagA+ H.pylori与胃癌SGC7901细胞于常氧和低氧环境下共培养48 h(分常氧对照组、低氧对照组、常氧CagA+H.pylori组、低氧CagA+ H.pylori组).免疫细胞化学法检测HIF-2α和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:免疫细胞化学结果显示:常氧下胃癌SGC7901细胞HIF-2α、ABCG2蛋白呈低水平表达,低氧和CagA+H.pylori均能显著诱导HIF-2α、ABCG2蛋白表达(与常氧对照组相比,均P＜0.01),与低氧对照组和常氧CagA+H.pylori组相比,低氧CagA+H.pylori组表达进一步升高(均P＜0.01).相关分析显示HIF-2α与ABCG2表达呈正相关(r=0.976,P＜0.05).RT-PCR检测ABCG2 mRNA表达结果与免疫细胞化学一致.结论:CagA+ H.pylori可刺激胃癌细胞HIF-2α、ABCG2表达,低氧环境下其表达进一步增加,表明CagA+ H.pylori和低氧对HIF-2α、ABCG2的表达有协同作用.提示CagA+H.pylori和低氧可能是诱导胃癌细胞干细胞化及化疗抵抗的重要原因.
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5-Fu对低氧下胃癌SGC7901细胞系中SP细胞比例及HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:探讨低氧下5-Fu化疗抵抗的机制.方法:MTT检测常氧和低氧下的细胞活力,并计算5-Fu的半数抑制浓度(IC50).以IC50的5-Fu分别作用细胞常氧和低氧组细胞24、48和72h后,收集标本,Hoechst33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫细胞化学法检测低氧诱导因子(hypoxiainducible factor-2α,HIF-2α),荧光免疫细胞化学法检测ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)的表达.结果:常氧和低氧下,5-Fu均呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞增殖,其IC50分别为100、200 mg/L.常氧下SP细胞的比例为1.87％,低氧诱导后其比例逐渐增加.常氧下5-Fu-IC50作用于细胞不用时间后,SP细胞的比例无明显变化,低氧下其比例却逐渐增加.常氧下,HIF-2α和ABCG2蛋白呈低水平表达,且5-Fu-IC50作用于不同时间后也无明显变化,低氧下5-Fu-IC50作用于不同时间后二者的表达逐渐增加.结论:低氧下5-Fu对胃癌SGC7901细胞存在化疗抵抗可能与低氧通过诱导HIF-2α-ABCG2通路的表达、促进肿瘤细胞的干细胞化有关,这可能是肿瘤化疗抵抗和复发的根源.
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胃癌MKN-28肿瘤细胞系SP细胞亚群初步分析
目的:分析胃癌细胞株MKN-28中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side population)细胞亚群.方法:采用免疫荧光方法检测干细胞标记ABCG2在胃癌细胞株MKN-28的表达;制备MKN-28细胞悬液,经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析SP亚群.结果:ABCG2在胃癌细胞系MKN-28中有少量表达,ABCG2阳性细胞约占1.7%.SP亚群占MKN-28细胞的0.25%,维拉帕米阻断后减少为0.05%.结论:人胃癌细胞株MKN-28中存在SP细胞亚群,提示胃癌干细胞的存在.
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鼻咽癌组织Skp2与ABCG2蛋白表达及其临床意义
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase interacting protein 2,Skp2)与三磷酸腺苷结合蛋白G亚族成员2(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)在鼻咽癌组织中的表达水平,及其与临床病理因素的关系.方法 收集2013-01-12-2014-03-30,韶关市粤北人民医院耳鼻喉科行病理活检的63例鼻咽癌组织及20例正常鼻黏膜组织,采用免疫组织化学染色检测Skp2和ABCG2蛋白的表达,统计分析Skp2和ABCG2蛋白表达间及与肿瘤临床病理因素间的相关性.结果 在鼻咽癌组织中,Skp2蛋白阳性表达率为74.6％ (47/63),ABCG2为61.9％(39/63),均较正常鼻黏膜组织的20.0％ (4/20)和15.0％(3/20)显著升高,P值均＜0.001.在鼻咽癌组织中,Skp2和ABCG2蛋白表达呈显著正相关关系,r=0.751,P＜0.001.高表达Skp2和ABCG2蛋白与肿瘤淋巴结转移(P值分别为0.003和＜0.001)及高TNM分期(P值分别为0.003和0.013)呈显著正相关.结论 Skp2和ABCG2蛋白在鼻咽癌组织中表达上调,并与肿瘤恶性临床病理特征有关.Skp2和ABCG2蛋白可能成为鼻咽癌早期诊断的重要标志物及生物靶向治疗的有效靶点之一.
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胃癌组织ABCG2和P-gp蛋白表达及其临床意义分析
目的:探讨中晚期胃癌组织中ABCG2和P-gp蛋白的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化法检测60例中晚期胃癌组织和对应的癌旁正常组织中ABCG2和P-gp蛋白的表达情况,分析其与临床病理特征的关系.结果:ABCG2主要定位于细胞膜,胞质中亦有表达,P-gp定位于细胞膜和细胞质,以细胞质为主.ABCG2和P-gp在胃癌组织中的阳性表达率分别为95.0％(57/60)和85.0％(51/60),显著高于癌旁正常组织的81.7％(49/60)和25.0％(15/60),x2值分别为12.264和52.286,P值分别为0.007和0.000;二者在癌中的共表达率为81.7％(49/60),在表达强度上差异有统计学意义(x2 =28.381,P=0.000),且呈正相关(r=0.156),但差异无统计学意义,P=0.233;在表达程度上一致性差(Kappa=0.084),且差异无统计学意义,P=0.282;其表达均与肿瘤TNM分期、分化状态、浸润深度密切相关(P值均=0.000),与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结和远处转移无关,P值均＞0.05.结论:ABCG2与P-gp作为胃癌检测中的敏感指标,可能成为胃癌诊断、恶性程度、肿瘤进展、耐药、疗效及预后的新指标.
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肝癌组织ABCG2和Jagged1表达临床意义的探讨
目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中ABCG2和Jagged1的表达状况,分析两者与肝癌临床病理学参数的相关性及临床意义.方法:分别应用免疫组化SP法和原位杂交的方法检测150例HCC、50例肝硬化和10例正常肝组织中ABCG2和Jagged1蛋白及mRNA的表达情况.结果:ABCG2蛋白在HCC、肝硬化和正常肝组织的阳性表达率分别为78.67％(118/150)、40.00％(20/50)和30.00％(3/10),差异有统计学意义,x2=31.98,P＜0.05.ABCG2 mRNA在三种组织中的阳性表达率分别为69.33％(104/150)、36.00(18/50)和20.00％(2/10),差异有统计学意义,x2=23.85,P＜0.05.ABCG2蛋白在HCC组织中的表达与有无转移有关,x2=10.93,P＜0.05.Jagged1蛋白在HCC、肝硬化、正常肝组织中的阳性表达率分别为71.33％(107/150)、52.00％(26/50)和20.00％(2/10),差异有统计学意义,x2=15.07,P＜0.05.Jagged1 mRNA在三种组织中的阳性表达率分别为60.67％(91/150)、36.00％(18/50)和20.00％(2/10)差异有统计学意义,x2=13.71,P＜O.05.Jagged1蛋白表达与年龄(x2 =7.94,P＜0.05)、组织学分级(x2=14.79,P＜0.05)及HBsAg(x2 =4.83,P＜0.05)有关.ABCG2蛋白的表达与Jagged1蛋白表达呈正相关,r=0.458,P＜0.05.结论:ABCG2和Jagged1可能成为判断HCC预后和分子生物学行为的重要指标.
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人鼻咽癌CD133+干细胞对肿瘤多药耐药作用的研究
目的:探讨鼻咽癌CD133+干细胞中ABCG2表达情况及CD133+干细胞对肿瘤多药耐药的作用.方法:免疫磁珠分选、纯化鼻咽癌CD133+肿瘤干细胞,采用无血清培养、CCK-8法、平板克隆及裸鼠体内成瘤实验鉴定此肿瘤干细胞生物学特性;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化检测分选前后的ABCG2/BCRP变化;采用CCK-8法比较分选前后鼻咽癌细胞的耐药情况.结果:成功分选并鉴定CD133+鼻咽癌干细胞;RT-PCR结果显示,耐药基因AB-CG2在CD133+干细胞中表达灰度值为2.27±0.09,明显高于CD133-(0.69±0.01)和未分选细胞(1.00±0.00),F=886.99,P<0.0l;CCK8结果显示,顺铂、紫杉醇和依托泊苷对CD133+鼻咽癌细胞的耐药明显增加,耐药指数分别为23.874、5.520和5.670,P均＜0.01,而氯丙嗪的耐药指数为1.082,差异无统计学意义,P=0.488.结论:CD133+干细胞参与鼻咽癌多药耐药,靶向ABCG2联合氯丙嗪有可能成为克服肿瘤多药耐药新途径.
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低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例影响及其与HIF-2α和ABCG2表达相关性的分析
目的:通过观察低氧对SGC7901细胞株SP细胞的影响及其与HIF-2α和ABCG2表达变化的关系,初步探讨低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:用氯化钴(CoCl2)创建低氧模型.Hoechst 33342染色法检测SP细胞比例,免疫荧光细胞化学法检测ABCG2在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2a和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:SP细胞比例为2.36％,低氧诱导后其比例逐渐增加,P＜0.05.ABCG2在SP细胞中的表达明显高于非SP细胞(P＜0.01),低氧诱导后在SP细胞和非SP细胞中的表达均增强(P值均＜0.01),且在SP细胞中的表达高于非SP细胞,P＜0.01.低氧诱导后HIF-2a、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA的表达较常氧组明显增强(P值均＜0.01),且HIF-2α与ABCG2蛋白表达呈高度正相关(n=4,r=0.893,P＜0.05).结论:低氧能促进SGC7901细胞株SP细胞比例的增加,其机制可能与低氧激活HIF-2α-ABCG2通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.
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ABCG2与空泡型ATP酶在非小细胞肺癌中的表达及其相关性
目的 分析ABCG2和空泡型ATP酶(V-ATPase)在非小细胞肺癌(NSCIC)病理分类、TNM分期、病理分级中表达的差异性以及相关性.方法 对92例NSCLC组织样本采用免疫组织化学EnVision法检测ABCG2和V-ATPase的表达.结果 ABCG2、V-ATPase在腺癌和鳞癌中有表达,差异有统计学意义(P=0.003、P=0.000).ABCG2在腺癌TNM分期中的表达差异有统计学意义(P=0.004),在鳞癌TNM分期中差异无统计学意义;在腺癌和鳞癌病理分级的表达差异有统计学意义(P=0.028、P:0.000).V-ATPase在腺癌TNM分期、鳞癌病理分级间的表达差异有统计学意义(P=0.026、P=0.002),在鳞癌的TNM分期、腺癌病理分级组间的表达差异无统计学意义.在总体样本及腺癌、鳞癌中ABCG2和V-ATPase的表达有相关性.结论 V-ATPase可能与ABCG2共同参与NSCLC的多药耐药机制.
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5-氨基酮戊酸光动力学诊断腹膜转移癌的研究进展
腹膜转移(peritoneal metastasis, PM)一直被视作癌症的终末阶段.20世纪90年代早期,外科肿瘤学界发展了细胞减灭术(cytoreductive surgery, CRS)加腹腔热灌注化学药物治疗(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy, HIPEC)的综合治疗策略,可延长部分经谨慎选择的PM患者生存期.细胞减灭程度(completeness of cytoreduction, CCR)是该综合治疗后重要的独立生存预测因子.然而,现行的手术技术容易遗漏肉眼难以发现的隐匿部位PM或微小癌灶,PM仍是常规CRS术后主要的复发形式.因此,近年来,光动力学诊断(photodynamic diagnosis,PDD)方法逐渐发展,并用于检测PM.本综述旨在总结5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid, 5-ALA)PDD技术在 PM中的应用进展.
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ABCG2、Hif-2α在乳头状甲状腺癌患者外周血中表达与预后相关性研究
目的 研究ABCG2与Hif-2α在乳头状甲状腺癌患者外周血中的表达与预后相关性.方法 选取26例乳头状甲状腺癌患者作为观察组并给予手术治疗,同期健康志愿者26例作为对照组.比较观察组与对照组外周血中ABCG2与Hif-2αmRNA表达情况.结果 观察组外周血中ABCG2与Hif-2αmRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);Ⅲ期和Ⅳ期患者ABCG2与Hif-2αmRNA相对水平显著高于其他分期(P<0.05).术后1~3年,死亡患者术前外周血中ABCG2 mRNA相对水平均显著高于生存患者(P<0.05);术后1~2年,死亡患者术前外周血中Hif-2αmRNA相对水平均显著高于生存患者(P<0.05).结论 PTC患者外周血中ABCG2与Hif-2αmRNA表达水平与PTC分期存在相关性,并在预后中具有一定临床价值.
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痛风的遗传基础
痛风是一种常见的由尿酸盐沉积引起的慢性炎症性关节炎。该文总结了新的痛风遗传学基础，发现痛风的高风险基因多数与肾脏和肠道尿酸盐转运系统相关。糖酵解基因是一种异于肾和肠道尿酸排泄的血清尿酸调控路径，也为痛风和其他相关的代谢性疾病提供了新的病因学线索。基因之间的相互作用、基因与环境危险因素之间的相互作用均与痛风的发病风险相关。
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子宫内膜异位症患者腹腔冲洗液及血清CD133、ABCG2的表达
目的 探讨子宫内膜异位症(EMs)腹腔冲洗液、血清CD133、ABCG2水平与EMs发生发展的关系.方法 选择2010年1月～2011年6月江苏省镇江市妇幼保健院收治的EMs患者38例为EMs组,选择同期其他妇科良性病患者22例为对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组腹腔冲洗液及血清中CD133、ABCG2水平并分析其相关性.结果 ①Ems组腹腔冲洗液CD133 、ABCG2水平分别为(13.47±2.37)、(9.81±2.45)ng/L,高于对照组的(11.75±2.82)、(8.14±2.92)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.008、0.013).血清CD133、ABCG2水平分别为(1.39±0.32)、(5.22±1.49)ng/L,高于对照组的(1.13±0.29)、(4.06±1.89)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.001、0.006).②EMs组Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔冲洗液CD133、ABCG2水平分别为(14.28±1.99)、(10.55±2.29)ng/L,高于Ⅰ～Ⅱ期患者的(12.35±2.44)、(8.79±2.36) ng/L,差异均有统计学意义(P=0.011、0.027);血清CD133、ABCG2水平分别为(1.53±0.31)、(5.83±1.39)ng/L,高于Ⅰ～Ⅱ期患者的(1.19±0.22)、(4.39±1.21)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.001、0.002).③Ems组腹腔冲洗液CD133、ABCG2水平与血清CD133、ABCG2水平呈明显正相关(r=0.579,P=0.000;r=0.703,P=0.000).结论 腹腔冲洗液、血清CD133、ABCG2升高可能与EMs发生发展有关,有望单独或联合成为EMs诊断的新指标.
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阿霉素干预与肾上腺皮质癌干细胞标志物的表达
目的 探讨阿霉素(ADM)干预下人肾上腺皮质癌裸鼠模型干细胞标志CD133、ABCG2的表达及意义.方法 SW-13细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型,ADM体内干预后原代培养获得ADM组细胞株,未予干预直接原代培养获得对照组细胞株.用单细胞成克隆技术检测细胞的增殖能力,免疫组化法和流式细胞法检测肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2的表达.结果 ADM组细胞株的克隆形成率高于对照组(P＜0.05)；流式细胞法和免疫组化法提示ABCG2在两组细胞中均有阳性表达,ADM组细胞株的流式细胞表达率高于对照组细胞株(P＜0.05)；以上两种方法均表明CD133在两组中阴性表达.结论 ADM组细胞具有一定的肿瘤干细胞特征,ABCG2参与肾上腺皮质癌细胞耐药机制,可能为分子靶向治疗的潜在靶点.
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ABCG2在人多发性骨髓瘤细胞株中的表达及甲基化调控
ABCG2是三磷酸腺苷结合盒(ATP-binding cassette,简称ABC)转运蛋白超家族中G亚家族第2个成员,又被称作乳腺癌耐药蛋白,作为一种跨膜半转运蛋白,介导了对多种化疗药物的外排,引起多药耐药.Bailey-Dell等[1]发现该基因转录起始点上游312 bp区域,具有启动子活性,该区域存在大量的CpG岛,ABCG2表达很可能受启动子甲基化调节.
