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ABCG2/Bcrp1转运蛋白:侧群干细胞的表型标记与功能调控蛋白
在骨髓、骨骼肌及神经组织均发现侧群干细胞(SPSCs).ABC转运蛋白ABCG2/Bcrp1基因在不同来源侧群(SP)干细胞均呈高表达,且该基因表达与SP细胞表型密切相关.SP细胞能向不同类型或不同胚层的组织细胞分化,很可能代表了一群更原始的干细胞,且与干细胞可塑性相关.而ABCG2/Bcrp1在造血及神经等组织来源的SP干细胞中的特异表达,使得该转运蛋白成为从不同组织中分选多潜能干细胞的一种新的表型标记.
关键词： ABCG2/Bcrp1转运蛋白 侧群细胞 表型标记 -
人卵巢癌细胞株侧群细胞的生物学特征
目的 研究人卵巢癌细胞株细胞中乳腺癌耐药蛋白与侧群细胞表型的关系,并探讨侧群细胞在卵巢癌病理牛理中的作用以及卵巢癌细胞株在卵巢癌肿瘤干细胞研究中的应用. 方法 利用流式细胞术从人卵巢浆液腺癌细胞株OVCAR3中分离排斥双苯酰亚胺(Hoechst 33342)染色的侧群细胞以及能被其染色的非侧群细胞,比较两个亚群的细胞集落形成率,并检验其在软琼脂平板生长的能力.同时以免疫印迹和免疫荧光染色检测两种细胞的乳腺癌耐药蛋白表达情况. 结果 OVCAR3细胞株中排斥Hoechst 33342的细胞占2.0%,此活动对维拉帕米(verapamil)敏感.侧群细胞和非侧群细胞克隆形成率分别为46.17%±23.27%和6.17%±3.06%,侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05),并能在软琼脂平板中生长、形成球形的细胞集落.侧群细胞表达乳腺癌耐药蛋白. 结论 人卵巢浆液腺癌细胞株中存在排斥Hoechst 33342染色、对维拉帕米敏感的侧群细胞,是维持细胞株的主要因素,其表型与乳腺癌耐药蛋白相关.OVCAR3可用于卵巢癌肿瘤干细胞的研究.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤干细胞 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 侧群细胞 双苯酰亚胺 -
多发性骨髓瘤侧群细胞的研究进展
侧群细胞具有高致瘤性、自我更新、多向分化和耐药的潜能.这些特性与肿瘤干细胞相似,因此侧群细胞渐渐成为研究肿瘤干细胞的切入点,为进一步研究肿瘤干细胞的生物学功能和分子机制奠定了基础.多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)病人及其细胞系中均可以检测到侧群细胞,通过流式细胞仪加以分选,对其致瘤性,细胞周期,分化潜能,表面标记和耐药性进行了研究,更深入地了解多发性骨髓瘤的发病机制,并应用于临床早期诊断,为深入研究多发性骨髓瘤的治疗手段提供新的思路.本文将就多发性骨髓瘤侧群细胞的研究进展进行总结.
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多发性骨髓瘤侧群细胞分选及其生物学特征分析
本研究旨在从人多发性骨髓瘤细胞株中分选出侧群(SP)细胞并对其生物学特性进行分析.细胞经Hoechst33342染色后,应用荧光显微镜观察细胞内Hoechst荧光染色情况,采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术,将细胞分选为SP细胞与主群(main population,MP)细胞,用细胞生长曲线法比较两群细胞的体外增殖能力、集落形成试验比较细胞集落形成能力、流式细胞术分析两群细胞CD138的表达情况,应用RT-PCR法检测ABCG2mRNA在两群细胞中的表达不平、硼替佐米对CCK-8法和集落形成试验检测对两群细胞增殖、活力和细胞集落形成能力的影响.结果表明,骨髓瘤细胞株中存在小部分比例的SP细胞,RPMI 8226细胞株中SP细胞高达(7.10±2.69)％,在荧光显微镜下也检测到SP细胞;SP细胞增殖活力、细胞集落形成能力明显高于MP细胞(P＜0.05);该基因SP和MP细胞的CD138表达率无明显差异(P＞0.05);SP细胞表达耐药基因ABCG2,而MP细胞几乎不表达该基因;SP细胞的硼替佐米抑制率明显低于MP细胞(P＜0.05),但在40 nmol/L作用下,两者抑制率未显示差异有显著统计学意义(P＞0.05);硼替佐米均能降低两群细胞的集落形成能力,但MP细胞降低更为明显.结论:骨髓瘤细胞系中存在少量SP细胞,具有肿瘤干细胞的相关生物学特性.
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大蒜素抑制多发性骨髓瘤侧群细胞增殖机制研究
目的:探讨大蒜素对多发性骨髓瘤侧群细胞(side population,SP)增殖的影响及其作用机制.方法:培养RPMI-8226和NCI-H929细胞,应用Hoechst33342染色分析其侧群细胞的含量;对培养的侧群细胞,应用10 μg/ml大蒜素处理,采用CCK8法分析大蒜素对侧群细胞增殖的影响,应用平板集落形成法分析大蒜素对侧群细胞集落形成能力的影响,流式细胞术分析大蒜素对侧群细胞周期的影响,Western blot法分析大蒜素对周期相关蛋白cyc-lin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达.结果:在RPMI 8226和NCI-H929中均存在有侧群细胞,其所占比例分别为(3.17±0.98)％和(2.65±0.61)％.大蒜素能够呈时间依赖性抑制侧群细胞的增殖并显著抑制集落形成;大蒜素能够抑制周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达并诱导细胞发生G1/S周期阻滞.结论:大蒜素可以抑制多发性骨髓瘤侧群细胞增殖和集落的形成,并可能通过下调细胞周期相关蛋白的表达诱导细胞发生G1/S阻滞.
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TGF-β1诱导的上皮间质转化对人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群细胞表达的影响
目的:研究转化生长因子(TGF-β1)诱导的上皮问质转换(EMT)对人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群(SP)细胞表达的影响.方法:在体外培养的GBC-SD中加入TGF-β1后,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,Western blot检测E-cadherin、Vimentin的表达改变,采用流式细胞术检测TGF-β1处理GBC-SD前、后SP细胞亚群的表达比例；撤去TGF-β1后,检测细胞形态学变化、E-cadherin和Vimentin的表达改变以及SP细胞亚群的表达比例.结果:人胆囊癌细胞系GBC-SD中存在SP细胞,其比例约为0.87％；TGF-β1可诱导GBC-SD细胞向间质型细胞形态转化,并上调间质标记蛋白Vimentin和下调上皮标记蛋白E-cadherin的表达,TGF-β1处理后GBC-SD细胞中SP细胞亚群的表达比例增加至2.3％；撤去TGF-β1后,发生间质型转化的GBC-SD向上皮细胞形态转化,间质标记蛋白Vimentin表达下调和上皮标记蛋白E-cadherin表达上调,SP细胞逐渐恢复至TGF-β1诱导前的水平.结论:TGF-β1诱导的可逆性EMT上调人胆囊癌细胞系GBC-SD中SP细胞亚群的表达,促进了肿瘤的衍进.
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5-Fu对低氧下胃癌SGC7901细胞系中SP细胞比例及HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:探讨低氧下5-Fu化疗抵抗的机制.方法:MTT检测常氧和低氧下的细胞活力,并计算5-Fu的半数抑制浓度(IC50).以IC50的5-Fu分别作用细胞常氧和低氧组细胞24、48和72h后,收集标本,Hoechst33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫细胞化学法检测低氧诱导因子(hypoxiainducible factor-2α,HIF-2α),荧光免疫细胞化学法检测ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)的表达.结果:常氧和低氧下,5-Fu均呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞增殖,其IC50分别为100、200 mg/L.常氧下SP细胞的比例为1.87％,低氧诱导后其比例逐渐增加.常氧下5-Fu-IC50作用于细胞不用时间后,SP细胞的比例无明显变化,低氧下其比例却逐渐增加.常氧下,HIF-2α和ABCG2蛋白呈低水平表达,且5-Fu-IC50作用于不同时间后也无明显变化,低氧下5-Fu-IC50作用于不同时间后二者的表达逐渐增加.结论:低氧下5-Fu对胃癌SGC7901细胞存在化疗抵抗可能与低氧通过诱导HIF-2α-ABCG2通路的表达、促进肿瘤细胞的干细胞化有关,这可能是肿瘤化疗抵抗和复发的根源.
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肝癌干细胞的调控机制及靶向治疗的研究进展
随着肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在人类许多实体肿瘤中得到证实,肝癌被认为很可能也是一种干细胞疾病.肝癌中是否存在肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)一直是近来研究热点.CSCs学说认为,肿瘤的发生、发展、转移、复发与耐药均与CSCs有密切关系.因此,确认并分离鉴定LCSCs对于早期预防及早期诊断、有效治疗及改善预后有着极为重要的作用.本文就LCSCs的来源、表面标志、信号转导与调控、治疗策略等方面的相关研究作一综述.
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侧群细胞与肝癌干细胞
肝癌是严重威胁人类生命和健康的一种疾病.其病因和发病机制尚不完全清楚,治疗缺少有效靶点.对肝癌恶性生长、转移及复发机制的研究正在逐渐深入.近年来的研究认为,肿瘤中存在一小群具有自我更新和分化潜能的细胞,即肿瘤干细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源.肝癌中应同样存在这样的一群细胞.侧群(side population,SP)细胞是肿瘤细胞中一小部分,具备干细胞的多种特性且易于分离.肝癌组织中SP细胞的鉴定和分离有可能找到肝癌干细胞,有助于肝癌的转移和复发机制的研究,并为肝癌治疗提供有效治疗靶点.
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大肠癌干细胞分选与鉴定的研究进展
肿瘤干细胞理论认为结肠癌的发病、转移与复发与大肠癌干细胞(colorectal cancer stem cells,CCSCs)有关,因此分离纯化大肠癌干细胞对于结肠癌的预防,诊断及治疗具有重要意义.本文就大肠癌干细胞的分选与鉴定方法作一综述.
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人胰腺癌细胞系SW1990中肿瘤干细胞样侧群细胞的分离及生物学特性研究
目的 从人胰腺癌细胞系SW1990中分离肿瘤干细胞样侧群(side population,SP)细胞,并进一步研究其生物学特性.方法 细胞常规培养后应用Hoechst 33342和PI染色、荧光激发流式细胞仪检测并分选SP细胞,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析干细胞标志物CD133的表达,克隆平板测定细胞克隆形成能力,Western blot检测细胞ABC超家族成员G2(ABCG2)蛋白表达.结果 人胰腺癌细胞系SW1990中SP细胞比例为2.70%,可完全被维拉帕米阻断.培养9 d后,SP细胞的A492值为2.1,克隆形成率为(38.7±6.8)%,CD133阳性率为69.63%,均显著高于非SP细胞的0.5,(15.5±2.8)%,16.71%;SP细胞ABCG2表达也较非SP细胞强.结论 胰腺癌细胞系SW1990存在SP细胞.
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人肝癌细胞系MHCC97H中侧群细胞初探
目的 从人肝癌细胞系MHCC97H中分选侧群细胞,探索其形态、表型和功能特征.方法 利用流式细胞仪从MHCC97H中分选得到侧群细胞,用相差显微镜和透射电镜观察其形态学特点;Western blotting观察其ABCG2表达;用流式细胞仪评估侧群细胞与干细胞基因CD133、CD117的关系;用克隆形成实验和NOD/SCID接种实验分别观察侧群细胞体外增殖和体内成瘤情况.结果 侧群细胞体积较小,呈圆形或短梭形;侧群细胞的细胞器如线粒体、内质网等明显少于非侧群细胞;流式检测显示侧群细胞中含有CD133、CD117阳性细胞;Western blotting显示侧群细胞和非侧群细胞中均有ABCG2表达,两者无明显差异;平板克隆形成实验显示SP具有较强的克隆形成能力;体内移植实验显示2000个SP细胞即能在体内形成肿瘤.结论 肝癌细胞系MHCC97H中侧群细胞具有肿瘤干细胞样细胞的表型和特性;ABCG2可能不是决定肝癌侧群细胞表型的主要因素.
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腹水来源卵巢上皮性癌细胞系中侧群细胞的分离、鉴定及耐药性分析
目的：由已建立的腹水来源卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系中分离侧群（SP）细胞，鉴定SP细胞作为肿瘤干细胞样细胞的生物学特征，并对其进行耐药性分析。方法采用流式细胞仪分选该卵巢癌细胞系中的SP细胞；分别在体外分化条件下培养SP及非侧群（NSP）细胞，并分别测定其SP细胞比例用于比较其体外分化及自我更新能力；将SP及NSP细胞接种于非肥胖性糖尿病-严重免疫缺陷（NOD-SCID）小鼠的皮下及腹腔，比较SP及NSP细胞的成瘤率；采用活细胞计数法（CCK-8法）检测SP、NSP及未分选卵巢癌细胞（未分选细胞）对顺铂的耐药性，以50%抑制浓度（IC50）表示。结果分选前的腹水来源卵巢癌细胞中，SP细胞比例为（4.81±0.43）%，从该卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞。SP细胞经体外分化培养，3周后其中SP细胞比例为（4.89±0.33）%，与分选前SP细胞比例相近，两者比较，差异无统计学意义（P>0.05）；而NSP细胞经体外分化培养，3周后其中SP细胞比例仅为（0.10±0.03）%，明显低于分选前SP细胞比例（P<0.01）。皮下接种1.0×103个SP细胞6周后3只小鼠全部成瘤，皮下成瘤率为3/3，而接种1.0×104个NSP细胞12周后3只小鼠均未成瘤，皮下成瘤率为0，两者皮下成瘤率比较，差异有统计学意义（P<0.01）；同时，腹腔接种相同数量的SP、NSP细胞后其成瘤能力与皮下接种后相似；原发肿瘤与移植瘤经HE染色和免疫组化染色显示，原发肿瘤与移植瘤均为卵巢低分化浆液性乳头状囊腺癌，均表达卵巢浆液性乳头状囊腺癌标志物CA125。SP、NSP、未分选细胞的顺铂IC50值分别为（2.33±0.14）、（1.60±0.04）、（1.81±0.03）μg/ml，SP细胞的顺铂IC50值明显高于NSP及未分选细胞（P<0.05）；以上述未分选细胞的顺铂IC50进一步处理后，未分选细胞中SP细胞比例为（40.10±4.22）%，明显高于顺铂处理前的SP细胞比例[为（4.81±0.43）%；P<0.01]；以上述SP细胞的顺铂IC50进一步处理后，SP细胞的存活率为（58.7±3.3）%，再予维拉帕米拮抗后其存活率下降为（7.2±1.3）%，两者比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结论腹水来源卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞，分离出的SP细胞占整个肿瘤细胞群体中的极少数，具有自我更新和分化能力，可再现原发肿瘤的表型，具有干细胞样细胞的生物学特征，并且对卵巢癌一线化疗药物顺铂耐药。
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卵巢上皮性癌细胞系OVCAR-3侧群细胞的生物学特性分析
目的 检测和分选人卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系OVCAR-3中的侧群(SP)细胞,鉴定其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性.方法 OVCAR-3细胞经DNA染料Hoechst 33342染色后,采用流式细胞仪检测和分选低染(即SP细胞)和高染[即非侧群(NSP)细胞]的两群细胞.通过裸鼠体内的有限稀释成瘤试验对比SP和NSP细胞的成瘤能力[以成瘤比率(成瘤的裸鼠数/接种的裸鼠数)和成瘤时间表示]、自我更新和分化能力.实时PCR技术检测SP和NSP细胞中干性基因(Oct4、Klf4、Nanog基因)和三磷酸腺苷结合盒(ABC)转运蛋白家族重要分子——ABCG2、ABCB1、ABCC2基因的表达.药敏试验检测SP和NSP细胞对4种化疗药物(顺铂、紫杉醇、多柔比星、米托蒽醌)的敏感性.结果 OVCAR-3细胞系中可检测到少量的SP细胞,其比例为(1.13±0.39)％.102个SP细胞即可在裸鼠体内成瘤,成瘤比率为2/5,成瘤时间为52～61 d；而至少104个NSP细胞才能成瘤,成瘤比率为2/5,成瘤时间为64 ～ 98 d.SP细胞的成瘤性至少为NSP细胞的100倍.103个SP细胞接种裸鼠后所形成的瘤组织中SP细胞的比例为(2.09±0.73)％,与分选前的比例相似.SP细胞中干性基因Oct-4和Klf4及ABCG2和ABCC2基因的表达量分别是NSP细胞的(1.95±0.41)、(4.26±0.63)、(3.22 ±0.36)和(1.76±0.26)倍,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).在0.25 μg/ml顺铂、0.01 μmol/L紫杉醇、0.25 μmol/L多柔比星和0.05 μg/ml米托蒽醌分别作用下,SP和NSP细胞的相对活性分别为0.757±0.105、0.474±0.035,0.521±0.092、0.384±0.073,0.742±0.051、0.526 ±0.088,0.690±0.096、0.466 ±0.112；相同药物浓度下,SP细胞的相对活性显著高于NSP细胞(P均＜0.05).结论 卵巢癌细胞系OVCAR-3来源的SP细胞与NSP细胞相比,具有显著增强的体内成瘤能力、自我更新和分化能力、高表达干性基因和ABC转运蛋白家族基因以及多药耐药等肿瘤干细胞样细胞的生物学特性.SP表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞样细胞的有效方法.
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侧群细胞与肾癌肿瘤干细胞研究进展
目的 总结国内外侧群细胞(side population,SP)及其在肾癌肿瘤干细胞中的研究进展.方法 应用PubMed及中国知网期刊全文数据库检索系统,以“肿瘤干细胞、侧群细胞和肾癌”等为关键词,检索1996-01-2015-01的相关文献,共检索到英文文献660条,中文文献1 041条.纳入标准:1)肿瘤干细胞生物学特性;2)SP的表面标志和分选方法;3)肾癌肿瘤干细胞与SP相关性的研究.剔除标准:重复研究.后纳入分析文献39篇.结果 肿瘤干细胞是肿瘤发生、生长、转移和复发的根源,SP存在多种肿瘤细胞及肿瘤组织中,具有自我更新、多向分化和强大致瘤能力等干细胞的生物学特性,是肿瘤干细胞富集的亚群.利用SP细胞分选技术分离鉴定肿瘤干细胞及研究其生物学功能,将为肿瘤干细胞的研究提供新的方向.在对肾癌肿瘤干细胞的研究中发现SP细胞的分布,SP细胞表达的腺苷三磷酸转运蛋白G2(ATP binding cassette,ABCG2)能将多种化疗药物和外源性化学物质排出胞外,它的这种特性被认为与肾癌的多药耐药密切相关;肾癌SP细胞中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)的表达明显高于非SP细胞,ALDH1阳性细胞在成球能力及致瘤能力上明显高于ALDH1阴性细胞.但是无论是ABCG2还是ALDH1都不是形成SP细胞表型的唯一原因.结论 SP可用于肾癌肿瘤干细胞的分选,但肾癌肿瘤干细胞的表面特征性标志仍需进一步研究.
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侧群细胞与肿瘤干细胞研究进展
目的:总结国内外采用侧群细胞分析法(side populations analysis)研究肿瘤干细胞的现状.方法:应用检索PubMed数据库检索系统,以"侧群细胞"和"肿瘤干细胞"等为关键词,检索1996-01-2008-12侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献.资料选择:选择所有侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献.纳入标准:1)侧群细胞法分离肿瘤干细胞;2)侧群细胞法鉴定肿瘤干细胞.根据纳入标准,精选80篇文献,后纳入分析36篇文献.结果:采用SP法可以有效的分离和富集大部分类型的肿瘤干细胞,但是某些肿瘤SP细胞不具有肿瘤千细胞特性,此外,SP法还存在细胞毒性的问题.结论:采用SP分析法研究肿瘤干细胞存在许多问题,但是当无法确认到某种类型的肿瘤干细胞的表面标志时,它仍然是分离和富集肿瘤干细胞的有效方法之一.
关键词： 侧群细胞 肿瘤干细胞 Hoechst33342 -
肾癌细胞株786-0侧群细胞生物学特性与XIAP mRNA表达的研究
目的 肿瘤干细胞在肿瘤复发和耐药中起着关键作用,侧群(side population,SP)细胞中富含肿瘤干细胞.本研究探讨肾癌786-0细胞株中SP细胞的生物学特性及凋亡抑制蛋白XIAP在SP中的表达.方法 制备肾癌786-0细胞株单细胞悬液,Hoechst33342染色,流式细胞荧光激活技术分选出肾癌786-0细胞系中的SP细胞和非侧群(non-SP,NSP)细胞2个亚群,MTT法绘制细胞生长曲线,比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力;无血清悬浮培养观察两组亚群细胞肿瘤球形成能力,流式细胞仪检测两组亚群细胞体外分化能力;实时荧光定量PCR法检测SP细胞、NSP细胞及未经分选的肾癌786-0细胞XIAP mRNA的表达情况.结果 流式细胞分选结果显示,肾癌786-0细胞株中SP细胞所占比例为(2.9±0.1)％.细胞生长曲线结果显示,SP细胞增殖速度快,与NSP细胞增殖能力比较,差异有统计学意义,t=4.32,P=0.033.SP细胞在无血清培养基中的肿瘤球形成能力强于NSP细胞;无血清培养2周后SP细胞亚组SP细胞所占比例下降为(18.1±0.3)％,提示SP细胞可以分化为NSP细胞.XIAP mRNA在SP细胞中的表达量为10.74±0.25,与NSP细胞亚组及未经分选的786-0细胞比较差异有统计学意义,F=61.02,P=0.012.结论 肾癌786-0细胞株中存在具有干细胞特性的SP细胞,高表达凋亡抑制蛋白XIAP,SP细胞可作为肾癌分子靶向治疗研究的切入点.
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人胃癌侧群细胞的分离鉴定和生物学特性分析
目的 检测和分选胃癌细胞系中具有干细胞特性的侧群(SP)细胞,分析其生物学特性.方法 制备胃癌细胞株BGC-823悬液,经Hoechst 33342染色后,用荧光激活细胞分选技术分选出人胃癌SP和非SP(NSP)细胞,测定SP细胞亚群所占的比例.通过平板克隆实验检测SP细胞的克隆形成能力,无血清培养检测SP细胞的增殖能力.以不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)处理BGC-823细胞后,检测SP细胞的耐药性,通过小鼠体内成瘤实验检测SP细胞的致瘤性.结果 流式细胞仪分析结果表明,BGC-823细胞中含少量SP细胞,占0.9％ ～2.1％.SP细胞组克隆形成数量为(217.67±15.50)个/孔,高于NSP细胞组[(147.00 ±17.58)个/孔,P＜0.01];SP细胞组克隆形成率为(72.56±5.17)％,高于NSP细胞组[(49.00±5.86)％,P＜0.01],表明SP细胞较NSP细胞有较强的克隆形成能力.经2.5、5、10和25 μg/ml的5-Fu作用36 h后,SP细胞所占比例分别为12.9％、9.9％、4.0％和2.1％,化疗药物对SP细胞的抑制作用随着药物浓度的递增而加强.体内成瘤实验显示,SP细胞组瘤体质量为(0.176 ±0.034)g,NSP细胞组瘤体质量仅为(0.045 ±0.046)g,两组细胞所致瘤体质量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胃癌细胞BGC-823中存在具有干细胞特性的SP细胞,进一步开展对人胃癌干细胞生物学特性的研究,将可能提示胃癌新的诊断和治疗途径.
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喉癌CD133+侧群细胞的分离及体内致瘤性分析
目的 探索能够有效富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.方法 流式细胞仪辅助下联合应用CD133标记及侧群(side population,SP)细胞分选技术检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133+ SP及CD133 - SP细胞,将分选所得两亚群细胞以相同的数量级注入非肥胖糖尿病型/重症联合免疫缺陷( NOD/SCID)小鼠右侧腋窝皮下,比较两亚群细胞致瘤性差异,并对两亚群细胞进行细胞周期检测分析.结果 CD133+ SP及CD133 - SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中各占(0.30±0.12)％及(17.52±1.59)％.CD133+SP在16只NOD/SCID小鼠中的15只腋窝皮下成瘤,CD133- SP细胞仅在16只NOD/SCID小鼠中的7只腋窝皮下成瘤,差异有统计学意义(Fisher精切概率法,P＜0.05).CD133+ SP细胞所成瘤体的重量平均((-x)±s,下同)为(0.36±0.15)g,而CD133 - SP细胞所成瘤体重量平均为(0.08 ±0.04)g,差异有统计学意义(t=4.64,P＜0.01).细胞周期检测发现,CD133+ SP及CD133 - SP细胞具有相似的细胞周期分布.结论 CD133+ SP比CD133 - SP具备更强的免疫缺陷小鼠体内致瘤能力；SP细胞分选法与CD133标记相结合是一种更有效的富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.
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喉癌CD133+侧群细胞的分离及体外生物学特性分析
目的 探索喉癌肿瘤干细胞的分选方法。方法 联合应用藻红蛋白标记的CD133单抗、侧群细胞（side population，SP）分选及流式细胞仪荧光活化细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting，FACS)检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133+ SP及CD133 - SP细胞，在体外对2个亚群细胞进行肿瘤干细胞特性相关的增殖、分化、球体形成及药物敏感性试验并进行比较。结果 CD133+ SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中占(0.30±0.12)％，远低于CD133+亚群(3.15±0.83)％及SP亚群(17.1±2.0)％。在体外增殖实验中CD133+SP较CD133- SP细胞表现出更强的增殖能力；纯化的CD133+ SP细胞体外培养后可以分化出CD133-SP细胞及非SP细胞，而CD133 - SP却不能分化成CD133+SP;CD133+SP在含生长因子的无血清培养基中可以形成悬浮生长的球体；CD133+ SP较CD133-SP有更强的化疗抵抗力。结论 CD133+SP较CD133-SP具备更明显的肿瘤干细胞特性，较CD133+亚群及SP亚群更有效地富集了喉癌肿瘤干细胞，可作为喉癌肿瘤干细胞研究的理想候选亚群。
