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乳腺癌细胞中过表达S期激酶相关蛋白2对曲格列酮敏感性的影响
目的：本文主要研究过表达S期激酶相关蛋白2（Skp2）能否影响曲格列酮（TRG）对乳腺癌细胞的敏感性，致力于发展一种新的药物来提高患者的生存率，终达到治愈的目的。方法荧光报告基因方法观察过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ型转录活性的变化；流式细胞和CCK‐8法研究Skp2过表达影响 TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的改变。结果 Skp2过表达能抑制PPARγ的活性，耐受TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响。结论 Skp2过表达的乳腺癌细胞能耐受TRG的敏感性，因此通过下调Skp2可能会增强TRG对乳腺癌细胞的生长抑制。
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胃癌及癌旁组织中SKP2和p27蛋白表达及相互关系研究
目的 研究胃癌及其癌旁组织中SKP2和p27蛋白表达水平,探讨两者的相互关系及其临床意义.方法 49例胃癌及20例癌旁组织常规制作石蜡包埋切片,SKP2和p27染色方法为SP免疫组化法.结果 胃癌组织中SKP2表达阳性率及其评分值明显高于癌旁组织(P＜0.01),而p27则相反(P＜0.05,P＜0.01);SKP2表达阳性和(或)p27表达阴性的癌旁组织呈中至重度不典型增生.SKP2和p27蛋白表达与癌细胞浸润深度、有无淋巴结转移、淋巴结转移分站及有无远处转移有关(P＜0.05,P＜0.01).在胃癌组织中SKP2与p27评分值之间呈负相关(r=-0.65,P＜0.01).结论 SKPz和p27可能是反映胃癌发生、进展、生物学行为及预后的标记物.
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HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达
目的:检测S期激酶相关蛋白2( Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义.方法:通过细胞免疫组化、Western blot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异.结果:免疫组化显示:HeLa细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035).Western blot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍；而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是He-La细胞中表达的2.7倍.RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P =0.002).结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平.
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人睾丸生殖细胞肿瘤中Skp2的表达研究
目的 通过检测人睾丸生殖细胞肿瘤中的Skp2蛋白质异常表达,探讨相关意义.方法 应用S-P免疫组织化学法检测睾丸生殖细胞肿瘤,正常睾丸组织和慢性睾丸炎组织中Skp2的表达.结果 睾丸生殖细胞肿瘤中Skp2阳性表达率为74.5％,正常睾丸组织中Skp2阳性表达率为20.0％,在慢性睾丸炎组织中Skp2阳性表达率为40.0％,在3种不同睾丸组织中表达差异有统计学意义(P＜0.05)；Skp2表达与不同组织学类型的睾丸生殖细胞肿瘤无相关性(P＞0.05)；随着临床分期的增高,睾丸生殖细胞肿瘤中的Skp2表达增多,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在人睾丸生殖细胞肿瘤中的Skp2高表达,提示细胞周期的异常调控在睾丸生殖细胞肿瘤的发生、分化中起着重要的作用.
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Skp2和Cx43在宫颈癌中的表达及其意义
目的 探讨Skp2和Cx43蛋白在正常宫颈上皮(NEC)、上皮内瘤样病变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)及宫颈鳞癌(SCC)中的表达及其意义.方法 采用免疫组化(S-P)法检测20例NCE、28例CIN Ⅰ、24例CINⅡ、27例CINⅢ、58例SCC中Skp2和Cx43蛋白的表达情况,统计分析其表达的差异性及与宫颈癌临床病理因素的关系,探讨两者间的相关性.结果 Skp2在NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC中阳性表达率逐渐增高(分别为10.00％、46.43％、45.83％、70.37％和75.86％),NCE组与其他各组比较,差异均有显著性(P＜0.05);Cx43阳性表达率逐渐降低(分别为100％、100％、100％、74.07％和58.62％),NEC与SCC比较,差异亦有显著性(均P＜0.05).宫颈癌中Skp2表达与宫颈间质浸润深度、盆腔淋巴结转移有关;在不同宫颈组织中Skp2和Cx43表达呈负相关性(r=-0.894,P=0.041).结论 Skp2表达随宫颈病变加重而逐步升高,Cx43表达逐渐降低.Skp2表达与宫颈癌预后有一定关系.
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Skp2和PTEN在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义
目的 研究S期激酶相关蛋白2(Skp2)和PTEN蛋白在上皮性卵巢肿瘤组织中表达,探讨其临床病理学意义及在肿瘤发生发展中作用.方法 收集129例上皮性卵巢肿瘤石蜡标本(良性35例、交界性32例、恶性62例),免疫组化法检测Skp2及PTEN蛋白的表达水平,分析两者表达、临床病理参数关系及其相互关系.结果 ①Skp2在良性及交界性肿瘤中表达阴性,分别为(0/35,0/32),在卵巢癌中阳性率40.32%(25/62),其在卵巢癌表达水平明显高于良性和交界性肿瘤(χ2值分别为8.25、6.72,均P<0.05);②PTEN蛋白在良性及交界性肿瘤阳性率分别为82.86%(29/35)、59.38%(19/32),在卵巢癌阳性率40.32%(25/62),明显低于良性和交界性肿瘤(χ2值分别为11.15、9.23,均P<0.05);③Skp2、PTEN蛋白在卵巢癌的表达在不同年龄、是否绝经及不同组织学类型中无显著性差异(χ2值分别为1.01、0.04、0.21,P>0.05).Skp2在卵巢癌Ⅲ~Ⅳ期、中低分化组及有淋巴结转移组表达明显高于Ⅰ~Ⅱ期、高分化组及无淋巴结转移组(χ2值分别为10.05、11.21、8.54,均P<0.05),PTEN在卵巢癌Ⅲ~Ⅳ期、中低分化组及有淋巴结转移组表达低于Ⅰ~Ⅱ期、高分化组及无淋巴结转移组(χ2值分别为8.23、12.15、7.65,均P<0.05);④Skp2和PTEN蛋白在卵巢癌中的表达呈负相关(r=-0.321,P<0.05).结论 Skp2表达上调与PTEN下调可能在上皮性卵巢肿瘤的发生、发展中起重要作用.检测Skp2和PTEN表达水平可能对卵巢癌预后分析有一定指导意义.
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罗格列酮通过PI3K/PTEN/Akt通路抑制人肝癌HepG2细胞增殖
目的 研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞增殖与细胞周期的影响,通过检测相关蛋白的表达变化,探讨其可能机制.方法 不同浓度罗格列酮作用于HepG2细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot 法检测PTEN、pAkt、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kipl蛋白表达变化,RT-PCR检测PTEN、Skp2及P27kipl mRNA表达变化.结果 罗格列酮可明显抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和浓度依赖性(P＜0.05);G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P＜0.05).Western blot结果显示罗格列酮可下调HepG2细胞中pAkt和Skp2蛋白的表达,上调PTEN和P27kipl蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR结果显示罗格列酮可明显上调PTEN mRNA的表达,下调Skp2mRNA的表达,而P27kipl mRNA表达无明显变化.结论 罗格列酮可抑制HepG2细胞的增殖,造成G0/G1期阻滞,其机制可能与罗格列酮经PI3K/PTEN/Akt信号通路参与Skp2及P27 kipl蛋白的调控有关.
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miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用
目的 构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用.方法 基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3 '非翻译区(3'UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中.通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3'UTR的靶向调控关系.结果 经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3'UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P＜0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P＜0.05).结论 成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3' UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达.
关键词： microRNA miR-508-5P S期激酶相关蛋白2 -
宫颈鳞癌及CIN中视网膜母细胞瘤基因与SKp2表达的意义
目的:探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)基因和S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,SKp2)在宫颈鳞癌及子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial,CIN)中的表达情况及其意义.方法:应用免疫组化技术(S-P法),检测Rb基因产物和SKp2在各级别CIN和宫颈鳞癌中的表达状况,并以正常子宫颈鳞状上皮(简称正常组)做对照.结果:正常宫颈鳞状上皮20例、CIN Ⅰ 20例、CINⅡ20例、CINⅢ37例及宫颈鳞癌40例,Rb基因蛋白和SKp2表达总阳性率分别为:100.0%,55.0%,20.0%,24.3%、23.5%和45.0%,80.0%,70.0%,94.6%,92.5%.Rb和SKp2的表达组间统计均存在显著性差异(P＜0.005).另外Rb在正常组与CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌组表达存在显著性差异(P＜0.005);在CIN Ⅰ组与CINⅢ、宫颈鳞癌组间表达存在显著性差异(P＜0.005).SKp2在正常组与CINⅢ、宫颈鳞癌组间表达存在显著性差异(P＜0.005);在CIN Ⅰ组与CINⅢ、宫颈鳞癌组间表达存在显著性差异(P＜0.005);在CINⅡ组与CINⅢ、宫颈鳞癌组间表达存在显著性差异(P＜0.005).结论:Rb基因蛋白在正常组100%表达强阳性,而随着发生CIN从轻到重至宫颈鳞癌,表达逐渐减弱,甚至消失.证明Rb基因可能主要通过功能性失活或缺失参与宫颈癌的发生,在癌变过程中起重要作用.相反,SKp2在正常组表达阳性率较低,而随着发生CIN从轻到重至宫颈鳞癌,表达呈逐渐增强趋势,表明SKp2在子宫颈癌癌变过程中起促进作用.尤其临床病理实践中检测到Rb表达减弱或消失,而SKp2表达增强,有助于早期子宫颈癌的判断,在妇产科临床病理上,2个指标对于辅助诊断子宫颈癌和CIN非常有价值.
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非霍奇金淋巴瘤中MCM2、Cx43、Skp2蛋白的表达
目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma,NHL)中微小染色体维持蛋白2(Minichromosome maintenance protein 2,MCM2)与细胞间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)以及S期激酶相关蛋白2(Sphase kinase-associated protein 2,Skp2)在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义,以期为临床诊治非霍奇金淋巴瘤提供一定的参考.方法:选取2013年1月至2015年1月间入院诊治的非霍奇金淋巴瘤36例作为实验组,并选取同期入院诊治的淋巴结反应性增生18例作为对照组,应用免疫组化法检测MCM2、Cx43、Skp2的表达情况,同时分析MCM2、Cx43、Skp2的表达与非霍奇金淋巴瘤恶性程度、临床分期等的相关性.结果:实验组NHL患者MCM2阳性表达率为83.33％、Skp2阳性表达率为86.11％,显著高于对照组22.22％与27.78％的阳性表达率(P＜0.01);NHL患者Cx43阳性表达率为22.22％,显著低于对照组61.11％阳性表达率(P＜0.01).NHL患者MCM2阳性表达与肿瘤恶性程度、临床分期及Ki67水平密切相关(P＜0.05);NHL患者Cx43阳性表达与肿瘤恶性程度呈负相关(P＜0.01);NHL患者Skp2阳性表达与肿瘤恶性程度及临床分期密切相关(P＜0.05).结论:MCM2、Cx43、Skp2的异常表达与非霍奇金淋巴瘤的恶性程度密切相关,联合检测MCM2、Cx43、Skp2可为非霍奇金淋巴瘤的诊治提供一定的参考.
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脑星型细胞瘤中CD105、SKP2表达及临床意义
目的 探讨细胞膜糖蛋白(CD105)和S期激酶相关蛋白2(SKP2)在脑星型细胞肿瘤组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化方法检测不同级别120例脑中枢神经系统星型细胞瘤组织与25例正常人脑组织中CD105,SKP2蛋白的表达情况及相关性.结果 CD105蛋白标记的MVD在正常脑组织不表达,在各级别肿瘤细胞中表达阳性,并有逐级升高的趋势,各组之间的差异与病理分级密切相关(P＜0.01).Skp2在正常脑组织基本不表达,在肿瘤细胞中表达阳性,随病理分级逐渐升高,各组比较差异有统计学意义(P＜0.01).二者表达水平呈正相关.SKP2在肿瘤组织中的血管内皮细胞及血管周围也有阳性表达.结论 CD105,SKP2表达阳性率都随肿瘤恶性进展增强,SKP2在血管内皮细胞及周围也有阳性表达;提示在脑中枢神经系统星型细胞瘤中,二者的表达变化与肿瘤的恶性发展、血管生成方面有密切相关,有可能有协同作用.
关键词： 中枢神经系统星型细胞瘤 细胞膜糖蛋白 S期激酶相关蛋白2 -
S期激酶相关蛋白2在幽门螺杆菌L型致胃癌中的作用
目的:研究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在幽门螺杆菌L型(Helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染致胃癌中所起的作用.方法:将胃癌BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例共培养,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,并应用原位杂交和免疫组化分别检测Skp2 mRNA和蛋白在胃癌BGC-823细胞中的表达情况.同时收集慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃肠腺化生(GIM)、胃不典型增生(GED)、胃癌(GCa)标本各40例,以40例轻度慢性浅表性胃炎(CSG)作为对照.应用革兰染色和免疫组化检测Hp-L型在上述组织中的感染情况；并进一步检测Hp-L型阳性组织中Skp2mRNA和蛋白的表达情况.结果:Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞分裂增多,出现明显的生长加速现象；原位杂交和免疫组化检测发现BGC-823细胞中Skp2 mRNA和蛋白表达阳性率随细菌浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增加(P＜0.05).Hp-L型阳性组织中的Skp2mRNA和蛋白的表达阳性率按CAG、GIM、GED、GCa的顺序逐渐增加,但仅GCa组与CSG组间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:Skp2在Hp-L型感染的胃癌前病变及胃癌中均明显升高,提示其在胃癌的发生及发展中起着重要作用.
