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电针“百会”“太冲”对自发性高血压大鼠心肌肥大和自噬的影响
目的:通过观察电针对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞超微结构和自噬相关蛋白表达的影响,探究电针调节SHR心肌肥大的内在机制.方法:选用12只12周龄雄性WKY大鼠作为正常组,24只同周龄雄性SHR随机分为模型组和电针组各12只.电针组电针“百会”和右侧“太冲”,留针20 min,每日1次,共30 d.以无创血压仪检测大鼠尾动脉收缩压,超声心动检测大鼠左心室肥厚程度和功能,Masson染色和透射电子显微镜观察心肌组织结构和细胞超微结构的变化,Western blot法检测各组大鼠心肌组织中Beclin-1和LC3表达的变化.结果:模型组大鼠收缩压与正常组比较显著升高(P＜0.01),电针组大鼠收缩压与模型组相比显著降低(P＜0.01).与正常组比较,模型组左心室质量指数(LVMI)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)显著升高(P＜0.01),舒张末期左室内径(LVIDd)显著降低(P＜0.01);与模型组比较,电针组LVMI、LVAWd和LVPWd明显降低(P＜0.01,P＜0.05),LVIDd显著升高(P＜0.01).Masson染色和透射电子显微镜结果显示,电针组较模型组心肌组织损伤明显改善,自噬现象明显减少.Western blot结果显示,与正常组比较,模型组心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P＜0.01);与模型组比较,电针组心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:电针“百会”“太冲”可有效改善SHR心肌肥大,其机制可能与电针调节Beclin-1和LC3的表达,从而抑制心肌细胞的过度自噬有关.
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"通督调神针法"治疗急性脑梗死临床疗效观察及其对自噬的影响
目的:观察"通督调神针法"与常规针刺治疗急性脑梗死患者的临床疗效差异及其与自噬的关系.方法:将60例急性脑梗死患者分为观察组(30例,2例脱落)与对照组(30例,3例脱落).两组均采用常规药物治疗.观察组穴取大椎、风池、强间、百会、神庭、印堂、水沟、曲池(患侧)、合谷(患侧)、足三里(患侧),将百会和印堂连接电针仪,30 min后去除电针及非督脉穴位针,继续留督脉穴位针20 min,每隔5 min捻转1次,每次1 min.对照组穴取百会、印堂、曲池(患侧)、外关(患侧)、手三里(患侧)、合谷、足三里、三阴交(患侧)、太溪(患侧)、太冲(患侧),足三里、合谷加电针仪,每次留针30 min.每天治疗1次,连续治疗10 d.观察两组患者治疗前后美国国立卫生院神经功能缺损评分量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)、简易智能精神状态检查量表(mini-mental state examimation,MMSE)、改良Barthel指数(modified Barthel index,MBI)评分,并评定外周血清中微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)和自噬相关蛋白Beclin1表达量的变化及临床疗效.结果:治疗后两组NIHSS评分均低于治疗前,MBI评分、MMSE评分均高于治疗前(均P<0.01),且观察组均优于对照组(均P<0.05).治疗后两组患者LC3-Ⅱ、Beclin1表达量均高于治疗前(均P<0.01),且观察组均高于对照组(均P<0.05).治疗后观察组总有效率为92.9％(26/28),优于对照组的70.4％(19/27,P<0.05).结论:"通督调神针法"减轻急性脑梗死患者临床症状优于常规针刺,可能与自噬体数量增加、自噬活性增强有关.
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从自噬机制探讨加味黄芪赤风汤含药血清对阿霉素诱导的肾小球足细胞损伤的保护作用
目的 研究加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞自噬及足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及desmin表达的影响.方法 采用体外培养小鼠肾小球足细胞、以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的方法制作足细胞损伤模型.随机分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组).采用Western blot法检测各组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、desmin和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平,透射电镜下观察各组足细胞自噬超微结构变化.结果 (1)与空白组比较,模型组nephrin、podocin表达明显下降(P＜0.01),desmin表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin表达明显升高(P均＜0.01),desmin表达明显下降(P均＜0.01),中药低剂量组无明显改善(P＞0.05).(2)模型组较空白组自噬小体数量明显增多,体积增大,细胞器减少;中药高、中剂量组及替米沙坦组较模型组自噬超微结构均有不同程度改善,而中药低剂量组无明显改变.(3)与空白组比较,模型组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上升(P＜0.01);与模型组比较,中药高、中剂量及替米沙坦组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显下降(P＜0.01),中药低剂量组无明显下降(P＞0.05).结论 加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,调节足细胞自噬活性可能是其足细胞保护作用的内在机制之一.
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甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用
目的 探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体(TSAb)单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5)增殖作用和自噬的影响.方法 体外培养FRTL-5细胞,采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系,并确定作用佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清.将FRTL-5细胞分为模型组(M22刺激24 h+15％空白大鼠血清),中药低、中、高剂量组(M22刺激24 h后5％、10％、15％甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),正常组(15％空白大鼠血清).采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中cAMP水平.确定高剂量(15％)甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用强后再将FRTL-5细胞分为正常组(15％空白大鼠血清)、模型组(M22刺激24 h+15％空白大鼠血清)和中药组(M22刺激24 h后15％甲亢宁胶囊合药血清干预24 h),透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化,Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平.结果 M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系,确定1 μg/mL M22于24 h增殖作用佳.与正常组比较,模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强(P＜0.01),细胞上清液中cAMP释放量增加(P＜0.01),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少(P＜0.01);与模型组比较,中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制(P＜0.01),上清液中cAMP释放量减少(P ＜0.05,P＜0.01),中药低剂量组作用差异无统计学意义(P＞0.05),中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高(P＜0.01).透射电镜提示,模型组较正常组自噬小体的数量减少,而中药组较模型组增多.结论 M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常,而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常,进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用.
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Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响
目的 观察Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响并探讨其可能机制.方法 用Apelin-13(10-8、10-7和106 mol/L)预处理HK-2细胞30 min后,用含D-葡萄糖(30 mmol/L)的培养基培养HK-2细胞48 h.免疫荧光检测HK-2细胞中间充质细胞的标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,透射电镜观察HK-2细胞的超微结构,Western-Blot检测上皮细胞的标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-SMA及自噬相关蛋白表达.结果 与对照组比较,高糖组的细胞呈现长梭形,细胞间隙明显增宽,E-cadherin蛋白表达显著性下调(t=4.751,P=0.011),而α-SMA蛋白表达显著上调(t=3.846,P=0.016),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t1=5.271,t2=4.695,t3=6.753,P1=0.009,P2=0.012,P3=0.002),p62表达显著降低(t=4.552,P=0.012).与高糖组比较,Apelin-13(10-7和10-6mol/L)+高糖与高糖组比较,明显抑制了细胞形态的变化,细胞形态大多数呈椭圆型,E-cadherin蛋白表达显著上调(t1=3.495,t2=4.124,P1=0.019,P2=0.013),而α-SMA蛋白表达显著下调(t1=4.014,t2=4.283,P1=0.014,P2=0.012),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t1=3.487,t2=4.059,t3=5.342,t4=4.271,t5=5.360,t6=5.851,P1=0.018,P2=0.014,P3=0.009,P4=0.011,P5=0.005,P6=0.004),p62表达显著降低(t1=4.342,t2=3.557,P1=0.012,P2=0.019).结论 Apelin-13抑制了高糖诱导的肾小管EMT,其机制可能与Apelin-13诱导肾小管上皮细胞自噬有关.
关键词： Apelin-13 高糖 上皮细胞-间充质细胞转分化 自噬 自噬相关蛋白 -
硫化氢通过抑制自噬保护高糖诱导人腹膜间皮细胞的损伤
目的 探讨硫化氢(H2S)对高糖诱导人腹膜间皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用4.25％ D-葡萄糖(高糖)和10-3 mol/L的外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)处理人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞24 h,MTT比色法检测细胞活力,分光光度法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平.Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达. 结果 与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞活力显著降低(t=4.85,P＜0.05),细胞培养液中LDH水平的显著增加(t=3.49,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3 mol/L)组细胞活力显著增加(t=3.42,P＜0.05)和培养液中LDH水平显著降低(t=4.02,P＜0.05).与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞中Beclin-1 (t=4.95,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=5.21,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=5.72,P＜0.05)均显著增加,而p62的表达显著降低(t=4.67,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3mol/L)组Beclin-1(t=4.36,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=4.19,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=4.83,P＜0.05)显著性降低,而p62的表达显著增加(t=4.78,P＜0.05).结论 H2S保护了高糖诱导的人腹膜间皮细胞损伤,其机制可能与H2S抑制细胞自噬有关.
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自噬在糖尿病肾病发病机制中的作用
自噬是真核细胞内维持细胞内环境稳定的重要内降解机制，作用在通过溶酶体蛋白的降解，清除受损的结构或过度表达的蛋白，参与维持细胞更新和细胞内稳态。经研究发现，自噬主要通过参与炎症反应、内质网应激及线粒体功能障碍等过程，影响糖尿病肾病的发生发展。该文现就自噬的分子机制，糖尿病肾病与自噬相关研究的新进展进行综述。从而为糖尿病肾病的机制研究及治疗提供新思路。
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糖尿病足感染者创面肉芽组织细胞自噬相关蛋白表达
目的 分析糖尿病足感染对患者创面肉芽组织细胞自噬相关蛋白表达的影响,为治疗糖尿病足感染提供理论依据.方法 选取自2013年1月至2017年7月恩施土家族苗族自治州中心医院接诊的88例糖尿病足感染者为研究对象,将正处于感染期44例患者作为观察组,将感染控制后44例患者作为对照组.根据踝肱指数(ABI)分组:观察组患者中20例缺血患者作为缺血组,24例非缺血患者作为非缺血组.提取患者创面组织,进一步处理后采用免疫组织化学染色和蛋白质印迹法进行检测,观察记录患者的姓名、年龄、身高、体重、病程等基本信息,密切观察患者病情变化,详细记录患者创面组织细胞自噬蛋白微管结合轻链蛋白-3(LC3)、自噬特异性基因(Beclin-1)和泛素结合蛋白(p62)等指标.结果 免疫组织化学染色法显示:观察组患者LC3和Beclin-1水平均显著低于对照组患者(t=3.638、P=0.011,t=2.682、P=0.022),p62水平高于对照组患者(t=4.998、P=0.009),差异均有统计学意义.非缺血组患者LC3和Beclin-1水平均显著高于缺血组患者(t=2.837、P=0.018,t=3.028、P=0.012),p62水平低于缺血组患者(t=3.562,P=0.010),差异均有统计学意义.观察组患者Beclin-1灰度值低于对照组,差异有统计学意义(t=3.522,P=0.013),而p62灰度值高于对照组,差异有统计学意义(t=6.927、P=0.004);两组患者LC3灰度值差异无统计学意义(t=1.037、P=0.056).结论 糖尿病足感染会导致患者细胞自噬水平降低,合并缺血患者细胞自噬水平进一步降低,糖尿病足感染控制后,细胞自噬水平升高.
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清热解毒方连花汤提取物诱导子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞自噬的作用及其机制研究
目的 探讨清热解毒方连花汤(黄连15 g、白花蛇舌草15g、半枝莲15 g、生黄芪20 g等)正丁醇和水提取物对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A及Ishikawa作用12h、24 h后自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)表达及其相关通路的影响.方法 采用Real-time PCR检测LC3mRNA;采用Westernbolt检测LC3蛋白;采用PhosflowTM检测雷帕霉素靶蛋白(MTOR)、蛋白激酶B(AKT)表达.结果 与阴性对照组比较,正丁醇组12 h HEC-1A中LC3 mRNA升高但24 h下降,而LC3蛋白在12h和24 h均下降,水提组则正好相反,雷帕霉素组LC3表达均下降,同时中药复方醇提和水提组AKT/mTOR通路均不同程度表达增加(P＜0.05);而在Ishikawa中,与阴性对照组比较,三组处理后LC3 mRNA表达在12h增加,除雷帕霉素组其余两组24 h均下降.醇提组12 h、水提组24 h、雷帕霉素组AKT/mTOR双表达与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在HEC-1A中,连花汤正丁醇提取物与雷帕霉素作用类似,可能激活AKT/mTOR通路抑制细胞自噬;而在Ishikawa细胞中连花汤正丁醇组与水提组均通过激活AKT/mTOR通路自噬先增加后抑制,与雷帕霉素作用后自噬均增加不同.
关键词： 子宫内膜癌 连花汤 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 -
关键词：
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线粒体自噬在脑缺血再灌注损伤中的研究进展
线粒体自噬是一种控制线粒体数量的选择性自噬过程,其对维持细胞正常表型和功能至关重要,且与心脑血管疾病(神经退行性疾病、缺血性脑卒中、心力衰竭等)密切相关.脑缺血再灌注损伤是指缺血脑组织在梗死相关血管开通后,可能导致比血管闭塞时更严重的急性损伤.而线粒体自噬与脑缺血再灌注损伤密切相关,其与氧化应激、线粒体动力学等有关.而这些过程受线粒体自噬相关蛋白(第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物诱导的假定激酶1、Parkin、Bcl-2/腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3等)的调控.适度的线粒体自噬对细胞具有保护作用,从而减轻脑缺血再灌注损伤;但线粒体自噬功能受损清除不足或过度激活的线粒体自噬,可以加重脑缺血再灌注损伤.未来,脑缺血再灌注中的线粒体自噬将成为缺血性脑卒中的新研究方向.
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自噬相关蛋白在肾透明细胞癌与癌旁组织中表达状况对比
目的:对比自噬相关蛋白在肾透明细胞癌与癌旁组织中表达状况.方法:选取2016年3月20日-2017年3月20日本院收治的50例实施根治性肾切除术患者为研究对象,手术过程中切取患者两部分组织,一部分为癌变组织,一部分为癌旁组织(即正常组织),且将其制作为标本,对其进行免疫组化染色测定、组织芯片制作、IMAGE PRO PLUS6.0软件测量,并对自噬相关蛋白表达水平变化进行相关性分析.结果:从免疫组化染色评分角度分析,肿瘤组织的ATG7(1.36±0.58)、LC3(2.05±0.36)、Beclin 1(0.55±0.32)水平均低于正常组织[(2.63±0.78)、(3.48±0.45)、(2.47±0.69)],而ULK1(3.69±0.45)、P62(3.54±0.37)、P-mTOR(2.99±0.85)均高于正常组织[(2.69±0.35)、(2.31±0.45)、(2.05±0.36)],差异均有统计学意义(P<0.05),肿瘤组织和正常组织的ATG5值分别为(2.67±0.54)、(2.45±0.66),差异无统计学意义(P>0.05);从IMAGE PRO PLUS6.0软件测量结果角度分析,肿瘤组织的ATG7(0.029±0.010)、LC3(0.021±0.010)、Beclin 1(0.003±0.006)、P-mTOR(0.038±0.019)均低于正常组织[(0.034±0.020)、(0.043±0.015)、(0.023±0.016)、(0.031±0.013)],而P62(0.029±0.018)、ULK1(0.032±0.014)均高于正常组织(0.020±0.009、0.025±0.010),差异均有统计学意义(P<0.05),肿瘤组织和正常组织的ATG5值分别为(0.034±0.020)、(0.043±0.010),差异无统计学意义(P>0.05);根据自噬相关蛋白表达水平变化的相关性分析结果,P-mTOR、LC3、P62的表达与ATG7的表达水平变化有关,Beclin 1的表达与其他蛋白不相关,ULK1的表达变化与ATG7和P62相关.结论:自噬的表达水平在肾透明细胞癌中表现为下调状态,而其下调可受到ATG7、LC3、Beclin 1、ULK1、P62、P-mTOR等多种自噬相关蛋白协同影响.
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三邻甲苯磷酸酯诱导母鸡神经组织中自噬相关蛋白含量的变化
目的 研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)诱导的迟发性神经病(OPIDN)中自噬相关蛋白Atg1、Atg5和Beclin1的变化,探讨OPIDN发生的分子机制.方法 取成年罗曼母鸡30只,随机分为对照组、1d、5d、10d和21d组(每组6只),对照组给予同体积的玉米油,各染毒组动物均按750 mg/kg经一次性灌胃染毒TOCP,分别在相应时间点处死动物取胫神经和脊髓,免疫印迹法检测胫神经和脊髓中Atg1、Atg5和Beclin1的相对含量.结果 与对照组相比,TOCP染毒后胫神经中Atg1含量1、5、10、21d分别下降了 29.8％、64.4％、43.5％和19.8％(P＜0.05)；TOCP染毒后Atg 5含量1、5、10、21d分别下降了36.8％、49.6％ 、51.2％和31.5％(P＜0.05);TOCP染毒后beclin1含量1、5、10天分别下降了 68.5％、66.3％和32.2％(P＜0.05).与对照组相比,TOCP染毒后脊髓组织中Atg1含量1、5、10d分别下降了23.5％、48.7％和20％(P＜0.05)；Atg5含量在TOCP染毒后1、5、10、21d分别下降了32.7％ 、51.5％、47.3％和39.6％(P＜0.05)；beclin1含量在TOCP染毒后1、5、10、21d分别下降了28.9％、50.2％、43.2％和28.3％(P＜0.05).结论 TOCP染毒干扰了母鸡神经组织中自噬相关蛋白的表达,可能与OPIDN的发病机制有关.
关键词： 三邻甲苯磷酸酯 有机磷化合物诱发的迟发性神经病 自噬相关蛋白 -
化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后神经细胞自噬途径中 Beclin1与 LC3蛋白表达的影响
[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂( rt-PA )溶栓后神经细胞自噬途径中自噬相关蛋白（Beclin1）及微管相关蛋白轻链3（LC3）蛋白表达的影响。[方法]选择160只健康SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方联合rt-PA组（简称中药组），每组采用6 h、1 d、3 d和7 d 4个时相。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO），rt-PA组与中药组分别给予尾静脉注入rt-PA（浓度为5.67 mg/kg）及联合化痰通络中药（浓度为7.2 g/kg）干预，每日2次。于相应时间点采用Western blot检测各组大鼠大脑皮质梗死区组织中Beclin1及LC3蛋白的表达。[结果] Western blot结果显示：与假手术组相比，模型组在4个时相中Beclin1和LC3蛋白的相对丰度值均明显增高（P﹤0.05）；采用rt-PA和rt-PA联合化痰通络法干预后，4个时相内Beclin1与LC3蛋白的相对丰度值均明显下降（P﹤0.05）；且rt-PA联合化痰通络组下降更加显著，与rt-PA组比较差异有统计学意义（P﹤0.05）。[结论]化痰通络方可通过降低神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白的表达，部分抑制神经细胞的过度自噬，进而保护神经细胞损伤，从而更好的防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。
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自噬在尿毒症小鼠心肌细胞损伤中的作用研究
目的：探讨自噬与尿毒症小鼠心肌细胞损伤的关系及其发生的可能机制。方法2015年8—12月选取SPF级C57BL／6-PAX6雄性小鼠50只，采用随机数字表法将小鼠分成对照组(6只）、假手术组(8只）、实验组〔5／6NC组(6只）、5／6NC＋生理盐水组(10只）、5／6NC＋渥曼青霉素组(10只）以及5／6NC＋Beclin -1组(10只）〕。对照组研究过程中不做任何干预。假手术组仅与实验组同期进行两次手术，但不切除肾脏。实验组制备5／6肾切除尿毒症小鼠模型。造模6周时，5／6NC 组不进行干预，5／6NC＋生理盐水组、5／6NC ＋渥曼青霉素组、5／6NC＋Beclin-1组分别给以0.9％氯化钠溶液1 ml腹腔内注射，隔日1次；渥曼青霉素1 mg? kg-1?次-1，腹腔内注射，1次／d；腺病毒携带的Beclin-11×109 pfu腿部肌肉注射，1次／只。造模12周时采用超声心动图检测各组小鼠心功能， ELISA法检测肌酐、尿素氮，采用免疫组化及Western blotting 法检测处死后小鼠的心肌细胞自噬相关蛋白表达情况。结果造模12周时，与对照组及假手术组比较，5／6NC组、5／6NC＋生理盐水组左心室舒张末期内径(LVEDD）增厚、左心室短轴缩短率(LVFS）降低，肌酐及尿素氮上升(P＜0.05）；与5／6NC＋生理盐水组比较，与5／6NC＋渥曼青霉素组LVEDD降低， LVFS升高，肌酐、尿素氮降低(P＜0.05）；与对照组、5／6NC＋生理盐水组比较，5／6NC＋Beclin-1组LVEDD增加， LVFS降低，肌酐及尿素氮升高(P＜0.05）。免疫组化染色显示5／6NC组心肌细胞Atg5、Cathepsin-D、 Rab 7表达较对照组增强；对照组与5／6NC组Atg5、 Cathepsin-D、 Rab 7阳性细胞率比较，差异均有统计学意义( P＜0.05）。5／6NC＋生理盐水组、5／6NC＋Beclin-1组心肌组织细胞中自噬相关蛋白LC3、 Beclin -1及AKT表达均较对照组升高(P＜0.05），5／6NC＋渥曼青霉素组LC3、 Beclin-1及AKT表达虽较对照组升高，但低于5／6NC＋生理盐水组、5／6NC＋Beclin -1组(P＜0.05），5／6NC＋Beclin -1组LC3、 Beclin-1、 AKT表达较5／6NC＋生理盐水和5／6 NC＋渥曼青霉素组升高( P＜0.05）。结论尿毒症小鼠心肌细胞的损伤与自噬密切相关，增强或抑制自噬可以加重或缓解尿毒症小鼠心肾功能， Beclin-1基因及磷脂酰肌醇3-激酶( PI3K）／丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶( AKT）信号蛋白在调节尿毒症心肌细胞自噬中发挥重要作用。
关键词： 心肌疾病 尿毒症 自噬 自噬相关蛋白 PI3K/AKT信号蛋白 -
搜风祛痰中药对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白beclin1和LC3的影响
目的：观察搜风祛痰法中药复方稳斑汤对 ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块自噬相关蛋白 beclin1和LC3的影响。方法建立 ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型，并设立空白组、模型组、西药组及稳斑汤低、中、高剂量组。实验周期1个月，麻醉处死小鼠取主动脉组织 HE染色后在光学显微镜下进行病理学观察，然后采用 Western blot法检测beclin1及 LC3的蛋白表达水平。结果 beclin 1蛋白表达结果显示：与空白对照组比较，模型对照组小鼠腹主动脉组织中 beclin1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)；与模型对照组比较，中药中剂量组、中药高剂量组、西药组小鼠腹主动脉组织中 beclin1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)；中药高剂量组与西药组无统计学意义(P>0.05)。LC3蛋白表达结果显示：与空白对照组比较，模型对照组小鼠腹主动脉组织中 LC3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)；与模型对照组比较，中药各剂量组及西药组小鼠腹主动脉组织中 LC3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)；中药高剂量组与西药组无统计学意义。结论搜风祛痰法中药复方稳斑汤对于 bec-lin1与 LC3的蛋白表达密切相关，即搜风祛痰法中药复方稳斑汤可能通过影响 beclin1与 LC3的蛋白表达，从而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性。
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自噬相关蛋白Atg5和LC3在婴幼儿血管瘤中的表达
目的研究自噬相关蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达,初探自噬在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用.方法根据患儿临床表现判断其瘤体处于增殖期还是消退期;将石蜡包埋的婴幼儿血管瘤(IH)标本经HE染色后,于光学显微镜下观察不同时期IH内血管内皮细胞的增生程度、形态;切片经TUNEL法染色后,根据标记凋亡细胞计数比较不同时期IH凋亡率差异;免疫组化染色观察不同时期IH中Atg5的表达水平差异;免疫荧光标记法分析不同时期IH中LC3-Ⅱ的表达水平变化.结果Tunel凋亡检测显示,消退期IH细胞凋亡率明显高于增殖期IH(P＜0.01);免疫组化结果显示,增殖期IH中Atg5的表达水平高于消退期IH(P＜0.01);免疫荧光显示增殖期IH中的LC3-Ⅱ阳性细胞多于消退期IH.结论消退期IH凋亡细胞比增殖期明显增多;增殖期自噬活性较强,消退期自噬下调;自噬的下调有可能促进增殖期IH向消退期转化.
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ERK1/2和PI3-K通路抑制剂对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的协同作用
目的 通过观察联合抑制细胞外信号调节激酶(ERK 1/2)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)蛋白对神经细胞自噬的影响,探讨蛛网膜下腔出血(SAH)救治靶点.方法 将200只雄性SD大鼠按照数字表法随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组、PI3-K抑制剂LY294002组、U0126+LY294002组.二次注血法制作SAH大鼠模型;HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;实时荧光定量PCR法检测ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)mRNA的表达,免疫组化法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平.结果 SAH组海马区神经细胞死亡率、ERK1/2、PI3-K、beclin-1 和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平均高于Sham组(均P＜0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞死亡率高于SAH组,而ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平均低于SAH组(均P＜0.05);U0126+ LY294002组海马区神经细胞死亡率高于U0126或LY294002组,而ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平分别低于U0126和LY294002组(均P＜0.05).结论 联合抑制ERK1/2和PI3-K通路激活可显著降低SAH后神经细胞自噬,加重神经细胞丢失.
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NF-κB/P65信号通路促进子宫内膜癌自噬或凋亡
目的 探讨NF-κB/P65信号通路在子宫内膜癌中与自噬、凋亡以及ER、PR之间的关系.方法 采用免疫组化和Western blot法检测53例子宫内膜癌与癌旁组织中的NF-κB/P65、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-8、Survivin的表达,并与临床资料以及ER、PR的表达进行了统计学分析.结果 与癌旁组织相比,Beclin-1、LC3、Caspase-8在子宫内膜癌组织中表达明显减少,差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);而癌组织中,NF-κB/P65和Survivin虽与癌旁差异无统计学意义,但已见明显的升高趋势.且结合临床资料分析发现,Beclin-1、LC3的表达均与ER相关(P＜0.05),Survivin、Caspase-8的表达与ER、PR相关(均为P＜0.05).结论 NF-κB/P65通过抑制自噬与凋亡,促进子宫内膜癌的发生与发展;ER、PR表达结合NF-κB/P65及自噬与凋亡指标的表达,对雌激素依赖性子宫内膜癌的临床治疗及预后判定具有重要意义.
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自噬分子机制在炎性疾病中的作用
自噬是真核生物体内高度保守的细胞内物质降解途径.20世纪90年代自噬相关蛋白的发现使学者们进一步了解了自噬发生机制,并明确了自噬在多种生物现象中发挥重要作用.该文对自噬在炎性疾病(主要是感染性疾病)中的作用作一综述,包括自噬相关蛋白的结构、自噬调节机制、自噬在固有免疫及炎性小体活化中的作用等.
