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精氨酸脱亚胺酶阻断PI3K-AKT通路抑制胰腺癌细胞侵袭
目的 研究精氨酸脱亚胺酶(arginine deiminase,ADI)对胰腺癌细胞株迁移、侵袭能力的影响及可能的分子机制.方法 选取精氨琥珀酸合成酶表达缺陷和表达阳性的胰腺癌细胞株PANC-1和BxPC-3接受含ADI培养基或普通培养基培养干预.细胞划痕及Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力;实时定量PCR技术及Western blot检测侵袭相关基因mRNA和蛋白的改变.Western blot和Transwell试验检测ADI联合PI3K信号抑制剂LY29400对PAN C-l细胞侵袭行为及分子的影响.结果 ADI可抑制PANC-1细胞的迁移、侵袭(P＜0.05),下调PANC-I细胞尿激酶型纤溶酶原激活因子、基质蛋白金属酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9,和上调金属蛋白酶类组织抑制剂-2和E-Cadherin的mRNA和/或蛋白表达水平(P＜0.05);而对BxPC-3细胞侵袭能力影响不明显.ADI可下调PANC-1细胞PI3K/AKT/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路蛋白p-AKT、p-p65的表达水平,而LY294002则协同ADI的这种作用,并协同下调MMP-2水平;Transwell侵袭试验也显示LY294002可协同ADI抑制胰腺癌细胞的侵袭能力(P＜0.05).结论 ADI通过阻断PI3K-AKT信号通路调控侵袭相关基因表达抑制胰腺癌细胞侵袭.
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磷脂酰肌醇3-激酶途径对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响及罗红霉素的干预作用
气道蘑塑是支气管哮喘(简称哮喘)的重要病理特征,气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增生和肥大在哮喘气道重塑中发挥了重要作用[1].磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3 K)途径是介导ASMCs增殖重要信号转导途径[2].罗红霉素是新一代大环内酯类抗生素,初步研究结果表明,罗红霉素能影响哮喘气道重塑,但具体机制尚不明确.本研究通过复制大鼠慢性哮喘模型,研究PI3K的重要下游信号分子Akt、p70S6K及cyclinD1活性变化,并给予PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)及罗红霉素干预,探讨PI3K信号途径在哮喘ASMCs增殖中的作用及罗红霉素对哮喘气道重塑的影响,进一步揭示哮喘的发病机制及有效的干预措施.
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PI3K信号通路对T细胞发育、活化、增殖、分化及支气管哮喘的作用
T细胞是参与支气管哮喘发病的重要效应细胞,而磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)是T细胞的重要信号转导分子.PI3K信号通过影响双阴性细胞的β-选择而影响T细胞的成熟,还通过激活PKB、Rac等信号途径而参与T细胞的活化、分化.同时,PI3K通过参与Th1/Th2失衡的调节,嗜酸粒细胞、肥大细胞的黏附、脱颗粒等而参与支气管哮喘气道炎症反应.
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PI3K信号通路通过SKP2、p27调控肺癌细胞H446,A549增殖
目的 探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制.方法 培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化.结果 与对照组相比,处理组细胞生长速率受到抑制;Western blot结果显示H446、A549细胞中的SKP2蛋白表达水平降低,而p27蛋白表达水平升高;FCM结果表明抑制剂处理后肿瘤细胞阻滞于G1期.结论 结果提示肺癌细胞中PI3K信号通路参与SKP2蛋白的表达调控,从而影响p27蛋白的降解,促进细胞周期,加速细胞增殖.
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抑制PI3K信号通道促进小鼠胚胎干细胞向肠上皮细胞分化
目的 观察抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路是否有助于小鼠胚胎干细胞向肠上皮细胞分化.方法 用PI3K信号通道抑制剂LY 294002作用小鼠胚胎于细胞,以Western blot法检测干细胞PI3K下游分子GSK3β及其活性磷酸化分子GSK3βs9的表达；以定量PCR检测小鼠胚胎干细胞分化第5日细胞各胚层标志基因的表达和分化第11日细胞移植瘤肠上皮细胞标志基因的表达,并与不加LY 294002对照组比较.结果 Western blot法检测LY 294002组和对照组GSK3βS9/GSK3β灰度比值为0.018±0.005和0.8188±0.190,差异有统计学意义(P＜0.05)；LY294002组分化第5日细胞Cxcr4、Sox17、Sox9、TBX6 mRNA相对表达量分别为12.318±2.216、22.154±4.166、9.466±1.238、2.351±0.314,高于对照组(6.142±1.012、6.232±1.307、3.988±0.978、0.823±0.143),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；LY294002组移植瘤Villin、FABP2、Lyz、ChA、Lgr5的mRNA相对表达量为4.422±1.233、4.362±0.897、4.405±1.004、4.877±0.727、7.318±1.565,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抑制PI3K信号通路能促进小鼠胚胎干细胞向肠上皮细胞分化.
