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MDM2和 PTEN 基因多态性与安阳地区食管鳞癌易感性的相关分析
目的：探讨鼠双微基因（ MDM2）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（ PTEN）基因多态性及单倍型与安阳地区食管鳞癌易感性的关系。方法提取安阳地区226例食管癌患者及226例健康献血者外周血基因组DNA，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测MDM2 T309G、PTEN rs701848、PTEN rs2735343位点基因型，采用条件Logistic回归模型分别进行基因多态性、单倍型与食管鳞癌易感性的相关性分析。结果 PTEN rs710848 TC、CC 基因型和PTEN rs2735343 CG、GG基因型均可增加食管癌发病风险（P＝0.001，OR＝2.29，95％ CI 1.42～3.70；P＝0.046，OR＝1.86，95％ CI 1.01～3.41；P＝0.001，OR＝2.76，95％ CI 2.58～4.82；P＜0.001，OR＝4.30，95％CI 2.27～8.13），而MDM2 T309G基因多态性在两组间的分布无统计学意义（P＞0.05）。在PTEN单倍型分析中，--／GC单倍型增加食管癌发病风险（ P＜0.001），而CT／CT单倍型则降低其风险（ P＜0.001）。结论 PTEN rs701848与PTEN rs2735343基因多态性与安阳地区食管鳞癌易感性相关，PTEN--／GC单倍型可能增加食管癌发病风险，而CT／CT单倍型则可能降低其发病风险。
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雷公藤甲素对人口腔鳞状癌细胞增殖及PTEN基因表达的影响
目的：通过研究雷公藤甲素（triptolide，TP）对人口腔鳞状细胞癌细胞株（human oral cancer cell，HB）增殖和PTEN基因（人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因）表达的影响，探讨TP抗HB的机制，以期为口腔鳞状细胞癌的药物治疗提供依据。方法用含0（空白对照组）、1.25、2.50、5.00和10.00μg/L的TP溶液培养HB 24、48和72 h，甲基噻唑基四唑法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期变化，反转录PCR（reverse transcription-PCR，RT-PCR）检测PTEN mRNA表达，蛋白质印迹法检测PTEN蛋白表达。结果1.25、2.50、5.00和10.00μg/L的TP处理72 h后，HB生长抑制率分别为（26.92±0.14）%、（38.67±0.11）%、（72.62±0.89）%和（90.42±0.28）%；PTEN mRNA表达量分别为（3.59±0.21）%、（5.27±0.40）%、（7.18±0.44）%和（9.16±0.50）%。PTEN蛋白A值分别为0.135±0.007、0.410±0.020、0.447±0.017和0.884±0.066。与空白对照组相比，10.00μg/L的TP处理48 h后G1期细胞由（58.78±0.98）%增加到（84.13±0.47）%，S期细胞则由（25.40±0.43）%降低到（9.41±0.73）%。结论 TP对HB增殖有抑制作用，TP可影响细胞周期，可能通过下调PTEN表达发挥抗癌作用。
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PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌肥厚中的表达
目的:观察PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌组织中的表达,探讨该通路在心肌肥厚发生、发展中的作用.方法:皮下注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠心肌肥厚模型,测定大鼠体质量、心质量、心肌细胞横径和横截面积;采用免疫组织化学方法检测大鼠心肌组织中肥大标志因子β-肌球蛋白(β-MHC)及PTEN/PI3K信号通路上PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、死亡相关因子(BAD)蛋白表达;利用计算机图像处理系统对各种蛋白进行定量分析.结果:模型组大鼠全心质量/体质量、左室质量/体质量、心肌细胞横径、心肌细胞截面积较对照组明显增加.模型组大鼠的心肌组织与对照组相比,β-MHC、PI3K与PKB表达水平均升高,PTEN和BAD表达水平明显降低.结论:PTEN在心肌肥厚中表达明显降低,起负性调节作用;PI3K/PKB信号通路激活,可能是导致心肌肥厚的机制之一,BAD可望成为生物学治疗靶点.
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骨肉瘤PTEN启动子特定区域甲基化的研究
目的:检测骨肉瘤组织中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)启动子特定区域的甲基化状态,初步探索PTEN在骨肉瘤发生、发展中的作用.方法:应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测并分析32例骨肉瘤患者的病理组织中及17名正常对照者的外周血中抑癌基因PTEN启动子003区域CpG岛的甲基化状态.结果:骨肉瘤好发于股骨远端(20.9％)、胫骨近端(20.9％)和肱骨远端(16.3％).骨肉瘤组织中抑癌基因PTEN启动子003区域CpG_1、CpG_3.4、CpG_9、CpG_11.12,CpG_13和CPG_18.19.20的甲基化率高于其在正常人外周血样中的甲基化率(P＜0.05).结论:PTEN基因启动子高甲基化导致的PTEN基因失活可能参与了骨肉瘤的发生、发展.
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阿霉素诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡及其机制
目的 研究阿霉素诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法 不同时间和不同剂量的阿霉素处理SMMC-7721细胞.以RT-PCR和Western blot法分别分析阿霉素处理后各分子的mRNA和蛋白表达的变化.结果 阿霉素处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;诱导多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]水解;诱导caspase-3和caspase-9的转录水平上调.阿霉素处理可诱导人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)的转录和蛋白水平升高,可能使细胞进入凋亡过程.一旦细胞发生凋亡,PTEN转录和蛋白水平下降;随之诱导FAK转录和蛋白表达水平降低.结论 阿霉素可以通过涉及caspase-3的途径诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡.阿霉素诱导的凋亡对PTEN、局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达及FAK磷酸化均有明显影响.
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PTEN介导的自噬对慢性酒精刺激引起的心肌损害的保护作用
目的 自噬对慢性酒精刺激引起心脏损害的影响及其发生机制.方法 40只雄性C57BL/6小鼠,随机分为四组,分别为对照组、慢性酒精心肌病组、同时利用自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)和PTEN抑制剂SF1670,每组各10只.第2个月末进行超声心动图检查;处死小鼠,取下心肌组织标本.检查比较各组小鼠的心脏功能,心肌细胞凋亡水平,心肌组织中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达量变化.结果 与对照组比较,酒精组小鼠心肌LC3-Ⅱ和PTEN蛋白表达量显著增加,同时也发生心肌细胞凋亡数量的增加.当同时作用自噬抑制剂后,细胞凋亡进一步加剧.共同作用PTEN抑制剂后,LC3-II的蛋白表达水平有明显的下降,但伴随着凋亡水平的增加.结论 慢性酒精刺激下,心脏通过上调PTEN介导的心肌自噬表达水平,减轻酒精造成的心肌损伤,减少细胞凋亡.
关键词： 酒精 自噬 凋亡 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因 -
PTEN与胃癌
胃癌的发生发展是一个多因素、多基因、多阶段、多途径有序的过程.人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)是迄今为止发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因,调控着细胞周期和多种信号途径,在胃癌的发生发展中起重要作用.关于PTEN的进一步研究将为胃癌诊断、治疗及判断预后提供新的思路.
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腋窝淋巴结阴性乳腺癌组织中PTEN、p-Akt、P-gp表达及意义
目的 进一步探讨磷酸化Akt(p-Akt)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)及多药耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)在乳腺癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化法检测81份腋窝淋巴结阴性(LNN)乳腺浸润性癌组织标本中p-Akt、PTEN及P-gp表达,采用四格表的x2检验、确切概率法和Cox比例风险模型分析三者与乳腺癌临床病理因素的关系.结果 LNN乳腺癌组织中p-Akt阳性表达率明显高于癌旁组织(P=0.034)；PTEN阳性表达率显著低于癌旁组织(P =0.001)；p-Akt过表达与PTEN低表达均与肿瘤分化、雌激素受体(ER)阴性、复发转移和5年生存率有关.P-gp在LNN乳腺癌组织中阳性表达率为39.5％,与肿瘤复发转移显著有关.多因素分析发现,p-Akt和PTEN是影响预后的独立因素,且p-Akt与P-gp表达呈正相关(r=0.548,P=0.045).结论 p-Akt、PTEN及P-gp均参与了乳腺癌的发生、发展,检测三者水平有助于患者预后判新.
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甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达及诊断价值
目的 探讨甲状腺乳头状癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)的表达及其在临床诊断中的价值.方法 采用免疫组化S-P法检测100例甲状腺乳头状癌和50例癌旁正常甲状腺组织中HIF-1α和PTEN的表达,并对两者在甲状腺乳头状癌诊断及预后评估中的价值进行分析.结果 甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α的阳性率为69.0%,高于癌旁正常甲状腺组织的12.0%,差异有统计学意义(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中PTEN的阳性率为46.0%,低于癌旁正常甲状腺组织的94.0%,差异有统计学意义(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达与其临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达呈负相关(r=-0.596,P<0.05).结论 甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达出现异常,两者联合检测有助于甲状腺乳头状癌的临床确诊和预后评估.
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顺铂植入剂对人胃癌裸鼠移植瘤中SYK、HER2、CD44V6和PTEN表达的影响
目的 观察新型顺铂植入剂与常规顺铂注射液在人胃癌裸鼠移植瘤模型中促肿瘤细胞凋亡以及对脾酪氨酸激酶(SYK)、人表皮生长因子受体2(HER2)、黏附分子CD44的变异体6(CD44V6)、与张力蛋白同源的人第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)在胃癌组织中表达水平的影响差异,探讨新型顺铂植入剂在胃癌发生、发展过程中的治疗优势.方法 用人胃癌SGC7901细胞株建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,随机分3组:PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组和顺铂植入剂植入组,每组6只.经药物干预后,记录瘤重,计算抑瘤率,并对瘤体进行HE染色,通过免疫组织化学法检测SYK、HER2、PTEN、CD44V6表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果 顺铂植入剂能显著抑制移植瘤的生长,促进其凋亡并能较显著提高SYK和PTEN的表达[顺铂植入剂植入组结果均比PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组高,差异有统计学意义(P＜0.05)],降低HER2和CD44V6表达[顺铂植入剂植入组结果均比PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组低,差异有统计学意义(P＜0.05)].结论 顺铂植入剂可能通过下调HER2、CD44V6或上调SYK、PTEN的表达来促进癌细胞的凋亡以发挥抗肿瘤的作用,从而为临床胃癌的治疗提供新思路.
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MSC介导的PTEN基因体外作用于人DBTRG胶质瘤细胞的实验研究
目的 将人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)转染间充质干细胞(MSC),检测MSCPJEN细胞基因产物的表达及其培养上清对人DBTRG胶质瘤细胞的作用.方法 原代培养人脐带MSC,将PTEN基因表达质粒pDsRed-PTEN转染MSC,培养48 h后荧光显微镜观察转染效果.将转染后MSCPTEN作为实验组,单纯MSC作为对照组.RT-PCR、Western blotting、ELISA分别检测2组细胞PTEN基因、蛋白及上清液中分泌性PTEN蛋白的表达;将体外培养的DBTRG细胞分为4组,分别加入MSC上清液和比例为25％、50％、100％的MSCPTEN上清液,继续培养24h,细胞活性/细胞毒性试剂盒(CalceinAM/EthD-1染色)观察4组细胞的活性;将体外培养的DBTRG细胞分为3组,分别加入MSC上清液和比例为25％、100％的MSCPTEN上清液,实时细胞记录仪(RTCA)检测DBTRG细胞的生长曲线. 结果 荧光显微镜下显示大量红色荧光位于MSCPTEN细胞胞内;RT-PCR、Western blotting检测发现,实验组细胞PTEN基因、蛋白的表达高于对照组.ELISA检测显示实验组细胞上清液中PTEN含量[(1.514±0.389) ng/mL]高于对照组[(0.508±0.197)ng/mL],差异有统计学意义(P＜0.05);CalceinAM/EthD-1染色显示,25％、50％、100％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞死亡数量较MSC上清液组明显增多,且随着MSCPTEN上清液比例的增加,死亡细胞的数量增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);RTCA检测显示,在加入不同上清液20 h左右,与MSC上清液组比较,25％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞指数明显下降,100％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞指数显著下降. 结论 PTEN质粒转染MSC后MSCPTEN细胞能够稳定表达目的基因,其培养上清液明显促进人DBTRG胶质瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞生长,MSC介导的PTEN基因可能成为胶质瘤基因治疗的一种有效方法.
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骨形态发生蛋白2联合热化疗对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用及机制
目的:探讨骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、热化疗单独和联合应用对人结肠癌细胞SW480株增殖凋亡的影响并探讨其可能机制.方法:BMP-2(25、50、100、200、400μg/L)作用于SW480细胞株,MTT法检测其细胞活力.BMP-2、五氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)单独与联合作用于SW480细胞株,流式细胞(Flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率,Western blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTEN mRNA表达.结果:BMP-2可以抑制SW480细胞的增殖.与单独作用比较,BMP-2联合热化疗作用于SW480细胞株时,其凋亡率明显增高(P＜0.05).BMP-2能够提高PTEN蛋白的表达水平,但是不能提高PTEN mRNA的表达水平.结论:BMP-2可以提高热化疗的敏感性.BMP-2与热化疗联合作用有协同诱导SW480细胞株凋亡的作用,其机制可能与上调PTEN蛋白表达及阻止PTEN蛋白降解有关.
