具有抗肿瘤活性的海洋生物研究进展

海洋环境与陆地环境有着显著的差异，其具有高盐、高压、低温、寡氧的特点，自身含有生物活性物质的海洋生物在极端的环境下经过长年的生长和代谢，积累了大量的抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性物质等，其抗肿瘤作用已经成为目前研究的热点之一。海洋抗肿瘤药物主要来源于海洋动物、植物和微生物，通过现代科学方法和技术，从海洋生物中寻找具有抗肿瘤活性的化合物开发出具有抗肿瘤作用的海洋药物具有广阔前景。从而积极研究并深入探讨海洋生物的抗肿瘤活性，对治疗人类重大疾病具有现实意义。

海洋毒素的高效液相色谱分析(综述)

由海洋浮游生物、海洋微生物分泌的海洋毒素(Marine Toxins,MT)所引起的海洋动物、人类中毒事件是与海洋环境直接相关的问题之一,这个问题涉及到海洋环保、卫生学、水产养殖等诸多领域,已引起了各方面专家的关注,探明并解决这个问题的基础是确定海洋毒素的化学结构并建立测试分析方法.

两种海洋微生物的抗炎、止痛及清除自由基活性

天然海水高盐条件对海绵相关细菌抗菌活性及次级代谢产物的影响

海洋微生物生活在高盐、高压、低温、低光照、寡营养、弱碱性的海洋环境中，因而形成了独特的生理特征和代谢机制，可产生与陆生微生物结构与活性迥然不同的次级代谢产物，如生物碱、萜类、环肽类和聚酮类等[1-2]，成为海洋药物的重要来源之一。从海洋放线菌中分离得到的salinisporamide A 已经完成了 I 期临床研究，用于治疗多发性骨髓瘤[3]。以从海洋真菌 Aspergillus sp. CNC-139中获得的化合物为模板合成的 plinabulin（NPI-2358）已经进入II 期临床研究，用于治疗非小细胞肺癌[4]。来自于卡纳里水域深海沉积物中的链霉菌 NTK937产生的 caboxamycin是一种新型的苯并噁唑抗生素，显示出较强的抗菌活性，对革兰阳性菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）IC50仅为8μmol/L[5]。海洋是一个特殊的生态系统，据文献报道，通过模拟海洋环境的拟生态培养，可以诱导海洋真菌产生新的活性代谢产物[6-9]。同时有研究表明，高盐条件造成的极端环境（如高渗透压和营养剥夺等）可以激活生物体内的沉默基因或次级代谢产物合成酶，进而使海洋等来源的耐盐真菌产生新的活性化合物[10-11]。另据文献报道，培养基盐度对海洋真菌的活性物质具有显著影响，其生物活性和活性物质的种类和产量可能有较大的差别[12-13]。但是，应用天然海水培养基探讨海洋来源细菌的抗菌活性、次级代谢产物的 HPLC化学指纹的报道较少，本实验室曾研究报道天然海水对海绵相关细菌的抗菌活性有影响[14]。另有文献对细菌 HPLC 化学指纹研究进行了报道[15-17]，此外，有文献报道天然海水可影响细菌的生长[18-19]。本文以海绵相关细菌为主要研究对象，初步开展了相关探索，以期获得具有良好抗菌活性且次级代谢产物丰富的菌株。

影响海洋细菌检测的因素探讨

目的了解海洋微生物的适生长条件,为海洋微生物监测提供有力保障.方法用无菌海水采样器采集海水,每份225 ml分别加入含有25ml的10×碱性蛋白胨水、5×碱性蛋白胨水、原液碱性蛋白胨水、嗜盐菌增菌液、RVS增菌肉汤、营养肉汤6种增菌液,经18℃、25℃、35℃增菌培养,每6 h为一个时间段,观察细菌生长情况,并挑取表面培养物接种于相应平板,TCBS平板、血平板、SS平板(SS平板配制采用海水和蒸馏水2种溶剂做对比),并置相应温度下培养6、12、18、24、36 h,在相应时间内长出细菌的分别挑取纯菌落进行鉴定.结果适合海洋菌生长的温度为35℃,增菌时间为6～12 h,培养时间为12～24 h;在各种稀释度碱性蛋白胨水中以10×碱性蛋白胨水增菌效果较为理想,且用海水配制的培养基较蒸馏水生长条件好.结论海水中微生物具有嗜盐性,在35℃下适宜的含盐培养基有利于海洋菌的生长.

无活性放线菌野生株抗肿瘤活性突变株的自发突变抗性筛选和化学诱变抗性筛选

目的 由无活性放线菌野生株转化获取活性突变株,为药源活性产物研究拓展新菌株资源.方法 以海洋来源无活性放线菌野生株L35-1为出发菌株,通过自发突变抗性筛选以及化学诱变结合抗性筛选,筛选获得抗性突变株.采用MTT法检测突变株发酵样品对K562细胞的抑制活性.结果 通过自发突变抗性筛选,得到新霉素抗性突变株114株、链霉素抗性突变株68株,其中7株新霉素抗性突变株和3株链霉素抗性突变株样品对K562细胞有抑制作用,在100 μg/ml浓度下抑制率大于20%.通过化学诱变结合抗性筛选,得到硫酸二乙酯诱变链霉素抗性突变株41株、硫酸二乙酯诱变新霉素抗性突变株32株、亚硝基胍诱变新霉素抗性突变株46株,其中1株硫酸二乙酯诱变链霉素抗性突变株和1株亚硝基胍诱变新霉素抗性突变株有抗肿瘤活性,100 μg/ml样品对K562细胞的抑制率大于20%.结论 上述结果初步表明,无活性放线菌野生株可通过抗性筛选转化为活性突变株,因此有可能成为筛选获取药源活性新菌株的重要原始资源.

海洋放线菌和真菌野生株及其突变株的分离培养与抗肿瘤活性筛选

目的:从海泥样品中分离培养并筛选获取野生型与突变型药源微生物抗肿瘤活性菌株.方法:通过单菌落挑选与划线培养,分离纯化野生菌株;利用核糖体工程抗性筛选技术.筛选获得抗生素抗性突变株;用K562细胞,采用MTT法测试发酵样品的抗肿瘤活性.结果:从天津塘沽驴驹河渤海湾潮间带海泥样品中分离得到放线菌126株、真菌29株,其中,在100μg/ml样品浓度下抑制率大于20%的放线菌17株、真菌3株,在1000μg/ml样品浓度下抑制率小于5.5%的无活性放线菌19株.以1000μg/ml样品浓度下抑制率为4.8%的无活性放线菌野生株L8-5x为原始茼,经抗性筛选获得链霉素抗性突变株78株,其中在100μg/ml样品浓度下抑制率大于25%的活性突变株2株.结论:所获野生型与突变型抗肿瘤活性菌株为后续新药筛选提供了药源微生物活性菌株.由无活性菌株转化获取活性突变株的研究结果表明,已分离得到的大量无活性菌株也是可转化获取药源活性突变株的很好资源.

海洋微生物次级代谢产物抗菌作用研究进展

海洋微生物次级代谢产物种类繁多，具有丰富的结构多样性和不同的抗菌功能。其中以抗菌活性物质为突出，已经成为近年来新药筛选的重要资源，在药品开发应用中具有良好的发展前景。本文结合近年关于海洋微生物次级代谢产物的报道，分析海洋微生物次级代谢产物的结构和功能；并对海洋微生物次级代谢产物在抗菌方面的作用及其抗菌作用机制的研究进展进行总结。

近年国内海洋微生物代谢产物研究概况

海洋微生物代谢产物是新药及其先导结构的一个重要来源,相关研究近来倍受关注.本文简要综述近年国内海洋微生物代谢产物的研究概况.

放线菌野生株代谢功能的核糖体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究

目的利用核糖体工程技术,改造放线菌次级代谢功能,筛选获得抗肿瘤活性突变株,并对突变株新产活性产物进行研究.方法 以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-39和HLF-43为出发菌,通过单菌落挑选与平板划线培养,分离纯化链霉素抗性突变株,通过摇床液态发酵和发酵提取物乙酸乙酯萃取样品的抗肿瘤活性筛选,获得抗肿瘤活性突变株;采用活性跟踪与微量预试先导-放大实验制备组合的实验模式,与原始菌样品对照比较,在快速确定差异活性斑点基础上,组合各种色谱技术,分离纯化突变株新产抗肿瘤活性产物;根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;采用MTT法测评抗肿瘤活性.结果 链霉素对HLF-39和HLF-43的低抑菌浓度分别为3和10 mg·L-1.经抗性筛选,得到对链霉素产生抗性的HLF-39突变株28株、HLF-43突变株204株.在所得突变株中,3株HLF-39突变株和14株HLF-43突变株有抗肿瘤活性,100 mg·L-1样品对K562细胞的抑制率大于20%;其中,4株分别对11、100、200和300 mg·L-1链霉素产生抗性的HLF-43突变株CHS-21101、CHS-210010、CHS-220002和CHS-230001活性显著,100 mg·L-1样品对K562细胞的抑制率分别达59 5%、50 0%、44 1%和59 6%.从CHS-21101发酵物中分离得到2个该突变株新产抗肿瘤活性产物,并分别鉴定为环(4-羟脯-亮)二肽(1)和phencomycin(2).化合物1和2对K562细胞呈抑制活性,100 mg·L-1抑制率分别为33 9%和21 4%.结论 利用核糖体工程抗性筛选技术,从2株无活性放线菌野生菌株成功筛选得到17株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株,从其中1株发酵物中分离鉴定了2个该突变株新产抗肿瘤活性产物.用核糖体工程技术改造无活性放线菌野生株的次级代谢功能,可筛选获得活性突变株并提供深入研究新产活性产物,从中筛选新药及其先导结构,从而拓展药源放线菌活性菌株新资源.

海洋微生物抗真菌代谢产物的研究进展

随着化疗、器官移植、免疫抑制剂的广泛使用及检查和治疗技术发展带来的副作用,使得世界范围内的浅部和深部真菌感染的发病率持续性增加,面对真菌病发病率增加的挑战,人们试图寻找新型的具有临床应用价值的抗真菌抗生素,以解决真菌感染带来的困扰.

两起食物中毒中检出致病性弧菌的结果分析

副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolysicus)是一种分布极广的嗜盐性海洋微生物,广泛分布于海域区的海水及海产品中,它是我国沿海地区食物中毒和细菌性腹泻的主要致病菌[1].

用噬菌体快速诊断副溶血弧菌及分型

副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)是一种分布极广的嗜盐性海洋微生物,广泛分布于海域区的海水及海产品中,它是我国沿海地区食物中毒和细菌性腹泻的主要病原菌.多年来,我们在腹泻病监测中常发现该菌的检出率在各种弧菌(霍乱弧菌除外)中居首位,且病例多以集体食物中毒出现,具有起病急、病情重、病例集中等特点.为探讨快速诊断方法,我们采用福建省卫生防疫站细菌室研究建立的用噬菌体来快速诊断副溶血性弧菌及分型新方法.现将试用结果报告如下.

一起由副溶血性弧菌及溶藻弧菌引起的食物中毒

副溶血性弧菌和溶藻弧菌是分布极广的嗜盐性海洋微生物,海产品中常有这两种菌存在.本文报告一起由副溶血性弧菌和溶藻弧菌污染花蟹引起细菌性食物中毒.

天然来源枯草芽孢杆菌的抑菌活性研究

目的:研究一种天然来源抑菌剂对常见致病性细菌(金黄色葡萄球菌,蜡状芽孢杆菌,铜绿假单胞菌,大肠杆菌)以及石斛病原真菌(烟草疫霉菌)的抑制作用.方法:从东海沙滩泥土中分离纯化菌株,通过牛津杯法及对峙法筛选对四株致病性细菌和一株石斛病原真菌具有抑制作用的活性菌株;通过观察菌体形态,16SrRNA测序、GenBank比对,对优活性菌株进行鉴定;通过优化菌株培养条件,获得活性物质产生佳发酵条件.结果:从样品中共分离52株菌,6株菌发酵液提取物对病原细菌具有抑制作用,2株对烟草疫霉菌具有拮抗活性.选取活性佳的菌株,通过鉴定,确定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其发酵液乙酸乙酯提取物对所述5株指示菌具有生长抑制活性;通过优化,确定该菌佳培养条件为37℃,ISP2培养基,发酵培养96 h.结论:从东海中所分离获得的枯草芽孢杆菌对常见致病细菌具有较强的抑制作用,且对烟草疫霉菌具有抑制作用,可用于筛选石斛病原菌天然抑制剂的研究.

利用海洋微生物降解有机磷农药MAP的研究

目的 分离及筛选降解海水养殖区甲胺磷的降解菌,并确定适的降解条件.方法 从被有机磷污染的海水样中分离,以有机磷为唯一碳源反复驯化,分离筛选出1株高效降解甲胺磷的菌株M-1,并对其降解能力和所需条件进行测试.通过离子交换层析、凝胶过滤层析等方法从发酵液中分离纯化了有机磷农药降解酶.结果 初步鉴定菌株M-1属于腊样芽胞杆菌.菌株M-1适生长温度和pH分别为25 ℃和8.0.Zn2+(200 mg/L)、Cd2+(50 mg/L)与Pb2+ (200 mg/L)不影响菌株M-1对甲胺磷的降解作用,但Cu2+ (50 mg/L)、Cr2+ (50 mg/L)对菌株M-1有毒性作用.SDS-PAGE测得降解菌的有机磷农药降解酶的分子质量约为45 kD.结论 海洋微生物在甲胺磷污染的海水养殖区自净中起着重要作用.

海水养殖区甲胺磷降解菌的分离筛选及降解特性的研究

目的 分离、筛选降解海水养殖区甲胺磷的降解菌及确定适的降解条件.方法 从被有机磷污染的海水样中分离,以有机磷为唯一碳源反复驯化,分离筛选出1株高效降解甲胺磷的菌株M-1,并对其降解能力和所需条件进行测试.结果 初步鉴定菌株M-1属于蜡样芽胞杆菌,菌株M-1适生长温度和pH分别为25和8.0.Zn2+(200 mg/L),Cd2+(50 mg/L)与pb2+(200 mg/L)不影响菌株M-1对甲胺磷的降解作用,但Cu2+(50mg/L),Cr2+(50 mg/L)对菌株M-1有毒性作用.结论 海洋微生物在甲胺磷污染的海水养殖区自净中起着重要作用.

海洋微生物活性物质的研究进展

目的 对海洋微生物代谢产物和药理活性的研究进展作一综述,并对海洋药物开发前景进行预测.方法 通过查阅近年来国内外有关文献54篇,按照药理活性的不同,综述来自海洋放线菌、海洋真菌及海洋细菌中分离得到的结构新颖的活性代谢产物及其抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节等作用.结果 海洋微生物代谢产物含有多种活性化学成分,具有多种药理活性,可望开发成抗肿瘤、抗炎等方面的新药.结论 综述了近年海洋微生物生物活性物质的研究进展.

海洋真菌次级代谢产物化学成分及生物活性的研究进展

目的 介绍近年来对海洋真菌化学成分和生物活性的研究进展.方法 检索国内外近几年关于海洋真菌次级代谢产物的文章,从其化学结构和生物活性方面对文献进行整理和综述.结果 对海洋真菌次级代谢产物的结构类型及其活性予以综述.结论 海洋微生物种类繁多,次级代谢产物丰富多样,是筛选新药的资源宝库,为海洋真菌的进一步研究和开发利用提供依据.

海洋微生物中具有引起稻瘟霉孢子形态变异活性的菌株筛选

目的从海洋微生物的次级代谢产物中发现新的具有抗肿瘤活性的新化合物以用于新的抗肿瘤药物的研制开发.方法以稻瘟霉孢子形态变异为指标的生物活性物质筛选模型,对200株海洋微生物资源菌株进行了反复筛选.结果得到了6株在其发酵液中能够产生较强生物活性物质的菌株,即海豚葡萄球菌(Staphylococus delphini)、拟青霉(Paecilomyces sp.)、土曲霉(Aspergillus terreus)、青霉(Penicillium sp.)、中华拟青霉(Sinopaecilomyces)、海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus);并且对这6株菌株的生长发育稳定性,遗传稳定性和生物活性物质的热稳定性进行了考察,发现其中的4株菌株,即拟青霉(Paecilomyces sp.)、青霉(Penicillium sp.)、中华拟青霉(Sinopaecilomyces)、海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)的各项稳定性良好.结论为具有抗肿瘤活性物质的追踪分离奠定了基础.