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ABT-737对顺铂诱导乳腺癌T47D细胞凋亡的增敏作用
目的 探讨Bcl-2抑制剂ABT-737联合顺铂对乳腺癌T47D细胞株凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ABT-737联合顺铂对T47D细胞增殖的影响,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达,采用荧光染色法观察T47D细胞凋亡的形态学变化,采用流式细胞仪检测T47D细胞的凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,ABT-737可明显降低顺铂在T47D细胞中的IC50[由顺铂单药的(26.00±1.41) μmol/L降为联合用药的(13.00±1.11)μmol/L].ABT-737增加顺铂对T47D细胞的抑制作用,并呈剂量依赖性,而ABT-737单药对T47D细胞的抑制作用不明显.Western blot检测多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的剪切结果显示,ABT-737明显降低了顺铂诱导T47D细胞凋亡的浓度,加快了凋亡诱导时间,ABT-737对顺铂诱导T47D细胞凋亡的增敏作用呈剂量依赖性,单药对T47D细胞的作用不明显.与单药组相比,ABT-737与顺铂联合时T47D细胞中PARP和caspase3的剪切明显增加,而Bcl-2、Bcl-XL和Bax的表达无明显变化.荧光染色和流式细胞术检测结果均显示,ABT-737联合顺铂时,T47D细胞的凋亡率明显增加.结论 ABT-737可显著提高顺铂对乳腺癌T47D细胞的凋亡诱导作用.
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以Bcl-2为靶点的小分子抑制剂研究进展
Bcl-2蛋白家族作为抗肿瘤药物的作用靶点受到广泛关注，在研究其蛋白家族成员结构和功能的基础上，靶向Bcl-2小分子抑制剂不断被发现，本文介绍了细胞凋亡与Bcl-2蛋白家族间相互作用机制，并对Bcl-2小分子抑制剂的研究进展进行综述，以期为抗肿瘤药物的研发提供思路。
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Wortmannin与ABT-737诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用研究
目的:探讨磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin单用以及与Bcl-2蛋白抑制剂ABT-737联合应用对人卵巢癌细胞系存活率和凋亡率的影响.方法:①CCK-8法分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO-3生长的抑制率,并计算其IC50.②Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率以及对细胞周期的影响,Western blot法检测相关蛋白的表达水平,分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO3凋亡的影响.结果:①Wortmannin和ABT-737单独作用对ES-2细胞株的IC50分别为14.12 μM和31.31 μM,两药联合应用的IC50为8.15 μM; Wortmannin和ABT-737单独作用对SKVO-3细胞的IC50分别为16.72μM和37.56 μM,联合用药的IC50为9.25 μM.②0.2 μM的Wortmannin作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞的凋亡率分别为9.9％和8.7％,5 μM的ABT-737作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞凋亡率分别为10.2％和9.1％,两者联合应用对两种细胞的凋亡率分别为45.0％和53.0％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).③Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的增加cleaved-caspase-3、细胞色素C以cleaved-PARP的表达量,Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的对人卵巢癌ES-2和SKVO-3细胞周期阻滞在G0/G1期.结论:Wortmannin和ABT-737能够通过线粒体途径抑制卵巢癌细胞株的生长并诱导其凋亡,且Wortmannin和ABT-737联合应用具有协同作用.
关键词： Wortmannin ABT-737 凋亡 卵巢癌 -
ABT-737对顺铂耐药的乳腺癌细胞的杀伤作用及机制
目的 研究ABT-737是否能提高顺铂对耐药乳腺癌细胞株MDA-MB-231/R的杀伤活性并探讨其机制.方法 采用顺铂梯度处理法构建顺铂耐药乳腺癌细胞株MDA-MB-231/R;采用MTT法检测ABT-737是否能增强顺铂对MDA-MB-231/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231/R细胞Bcl-2,Bcl-xl及Bcl-w的表达水平;采用流式细胞术检测ABT-737联合顺铂对MDA-MB-231/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响.结果 顺铂对MDA-MB-231/R细胞的杀伤活性显著低于MDA-MB-231.联合ABT-737治疗后,顺铂对MDA-MB-231/R细胞的杀伤活性显著提高,与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞的Bcl-2抗凋亡蛋白家族成员Bcl-w表达水平显著上调,但Bcl-2和Bcl-xl表达水平不受影响.ABT-737显著增强顺铂对MDA-MB-231/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,进而诱导MDA-MB-231/R细胞发生凋亡.结论 ABT-737通过抑制Bcl-w的功能促进顺铂对耐药乳腺癌细胞的凋亡诱导效应.
关键词： ABT-737 MDA-MB-231/R Bcl-w 线粒体凋亡 -
ABT-737增强Mcl-1小分子抑制剂UMI-77诱导的胃癌细胞凋亡
目的 探讨在对Mcl-1小分子抑制剂UMI-77不敏感的胃癌细胞中,将Bcl-2/Bcl-xL抑制剂ABT-737与UMI-77联用,增加胃癌细胞凋亡的分子机制.方法 MTS法检测不同浓度UMI-77处理胃癌细胞MGC-803和HGC-27的细胞存活率.在对UMI-77抵抗的HGC-27细胞中,将UMI-77和ABT-737联用,MTS法检测细胞存活情况.Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术分析细胞凋亡情况;JC-1染色,流式细胞术分析线粒体膜电位的变化;Western blot检测caspase-9、caspase-3、PARP-1的裂解,以及Bcl-2家族和IAP家族的表达水平.结果 与MGC-803相比,HGC-27细胞对UMI-77较为抵抗,同时它对ABT-737也不太敏感,但是当ABT-737与UMI-77联用后,能明显增加细胞死亡,表现为Annexin V(+)、线粒体膜电位下降、caspases裂解,说明两者联用是通过线粒体途径诱导细胞凋亡.在此过程中,XIAP、cIAP1和cIAP2的表达水平下降,NOXA、Bcl-2升高及PUMA、Mcl-1降低可能参与了增敏作用.结论 在对UMI-77不敏感的胃癌细胞中,将UMI-77和ABT-737联用能明显增加胃癌细胞凋亡.
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ABT-737通过上调NIX介导的线粒体自噬缓解大鼠低氧性肺动脉高压
目的 观察ABT-737对大鼠低氧性肺动脉高压(PAH)肺血管重构的作用,并从NIX介导的线粒体自噬方面探讨其可能的机制.方法 采用随机数表法将18只SD大鼠平均分为3组(n=6):对照组、缺氧组(其中死亡1只)、处理组.后两组大鼠置于低氧环境饲养4周,每天8h.处理组大鼠低氧饲养前,腹腔注射15mg/kg ABT-737,另外两组注射等量溶剂.4周后,检测右室收缩压(RVSP)及右室肥厚指数(RVHI),并作肺血管组织学分析,计算中层厚度指数(WTI).Western blot法检测大鼠肺组织NIX、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ及外膜转运酶(Tom)20蛋白的表达.结果 对照组、缺氧组、处理组大鼠RVSP分别为(15.76±1.27)、(43.16±4.34)、(29.77±2.21)mmHg(1mmHg=0.133kPa),RVHI分别为0.28±0.04、0.37±0.02、0.29±0.03,WTI分别为(6.51±2.46)%、(14.60±2.33)%、(10.20±3.24)%.与对照组比较,缺氧组大鼠RVSP、RVHI及WTI显著增高(P值分别为0.000、0.002和0.000).处理组较缺氧组大鼠RVSP、RVHI及WTI显著降低(P值均为0.000),但RVSP及WTI仍较对照组增加(P值均为0.000).缺氧组NIX蛋白表达(0.93±0.11)比对照组(0.60±0.13)上调(P=0.001),而处理组(1.25±0.12)更高(P=0.000).处理组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(1.59±0.53)较对照组(0.71±0.32)和缺氧组(0.94±0.20)均显著上调(P=0.006,P=0.032).缺氧组Tom20蛋白表达(1.20±0.23)较对照组(0.84±0.15)显著升高(P=0.009),ABT-737干预能显著降低Tom20蛋白(0.97±0.08,P=0.040).结论 低氧导致大鼠肺循环压力升高、肺血管重构并且Tom20蛋白表达增加,而 ABT-737 可以通过上调NIX的表达,促进线粒体自噬,降解Tom20,缓解低氧诱导的PAH.
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联合甲磺酸伊马替尼和ABT-737对胃肠间质瘤细胞凋亡的影响
目的 观察联合甲磺酸伊马替尼(IM)和ABT-737对胃肠间质瘤细胞凋亡的影响.方法 培养胃肠间质瘤细胞株GIST-882；噻唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度ABT-737和不同处理时间对GIST-882细胞生长的影响；分析联合应用不同浓度IM和ABT-737对GIST882细胞生长的影响.Western blot法分析IM处理对bcl-2蛋白的影响；并分析联合应用IM和ABT-737对Caspase-3 蛋白表达的影响.结果 10 μmol/L的ABT-737作用细胞24、48、72 h后,细胞的生存率分别是70％、55％、38％；20 μmol/L的ABT-737作用细胞24、48、72 h后,细胞的生存率均小于10％.0.1μmol/L的IM联合0.1μmol/L的ABT-737可将GIST-882细胞的生存率抑制在20％以下,10 μmol/L的IM联合10 μmol/L的ABT-737可将GIST-882细胞的生存率抑制在10％以下.IM对GIST882细胞bcl-2蛋白的表达无明显影响；联合应用IM和ABT-737可以促进GIST-882细胞活化型Caspase-3 蛋白的表达.结论 联合应用ABT-737可以加强IM对GIST细胞的促凋亡作用.
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Aurora激酶抑制剂与BH3模拟剂协同诱导乳腺癌细胞凋亡
目的 观察VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞增殖的影响；Westen blot法检测凋亡指标；免疫荧光染色及流式细胞术观察多核现象；荧光染色观察细胞凋亡形态学变化；流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,VX-680单独用药对细胞抑制作用不明显,半数抑制浓度(IC50)为( 25.457±1.406)mol/L,ABT-737明显降低了VX-680在T47D中的IC50 (0.277±0.057) μmol/L,AB-737增加VX-680的细胞抑制作用呈剂量关系；ABT737 单药对细胞抑制作用不明显,IC50为(0.959±0.018) μmol/L,VX.-680与ABT737联合对细胞的抑制作用明显增加,IC50(0.268±0.072) μmol/L;免疫荧光染色结果显示1μmol/L VX-680作用48 h出现多核现象；Western blot 检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)结果显示,与单独用药比较,VX-680与ABT737联合用药时PARP、Caspase-3剪切明显增加,B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-xL表达减少、bax 表达增加,呈剂量和时间依赖性.流式细胞术显示VX-680联合ABT-737时T47D细胞凋亡率可达(46.40 ±0.41)％.结论 ABT-737可显著提高VX-680对乳腺癌T47D细胞的诱导凋亡作用.
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野黄芩素协同ABT-737抗头颈鳞癌作用的研究
目的:研究野黄芩素协同ABT-737在体外对人头颈鳞癌HN30细胞的凋亡诱导作用,探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测野黄芩素协同ABT-737抑制细胞增殖作用;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;western blotting检测细胞凋亡蛋白的表达;利用SiRNA技术沉默基因表达.结果:野黄芩素协同ABT-737在体外对人头颈鳞癌HN30细胞增殖有抑制作用,且呈量效关系;两者可协同诱导HN30细胞凋亡;使线粒体膜电位去极化;下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达,上调Bax表达;SiRNA抑制Mcl-1表达可以显著增强野黄芩素和ABT-737协同诱导HN30细胞凋亡的作用.结论:野黄芩素在体外可以协同ABT-737诱导人头颈鳞癌HN30细胞凋亡,野黄芩素下调Mcl-1蛋白的表达,抑制Mcl-1对ABT-737抗肿瘤作用的影响,是两者协同作用的机制.
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ABT737通过延迟宫颈癌细胞放射后DNA损伤修复及诱导凋亡而增敏放疗
[目的]探讨类似BH-3的小分子物质ABT737诱导增敏放疗的作用及其分子机制.[方法]噻唑蓝法(MTT)检测不同浓度ABT737对HeLa细胞的生长抑制作用；细胞克隆形成实验检测ABT737联合放疗对放疗的增敏作用；免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复情况；流式细胞术检测细胞凋亡；免疫印迹法检测Caspase-3、PARP的表达观察凋亡.[结果]与对照组相比,ABT737能显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P＜0.05),并呈浓度依赖性,其IC50为15.7 μmol/L.体外培养克隆形成实验结果显示放疗+ABT737不同用药时间组的DEF值均大于1,放疗+8 μmol/L ABT737持续用药组为1.88,放疗+12 μmol/L ABT737用药72 h组为1.13,细胞存活分数(SF值)持续用药组为0.84,用药72 h组SF值为0.82；免疫荧光结果显示ABT737联合放疗处理HeLa细胞1h后,放射线导致的γ-H2AX聚焦点数量及有γ-H2AX聚焦点生成的细胞数量均明显增加,上述处理24 h后,单纯放疗组γ-H2AX焦点消失,而联用ABT737处理组仍可观察到γ-H2AX焦点聚集.流式细胞术结果显示,单纯放疗组早期凋亡率(Annexin V+,PI-)为23.3％,ABT737联合放疗可以明显提高放射线诱导的细胞凋亡,早期凋亡率高达50.3％.免疫印迹结果显示10 μmol/L ABT737与2 Gy放射联合作用于Hela细胞后,凋亡蛋白cleaved Caspase-3与cleayed PARP的表达较单纯放疗组增加.[结论]ABT737对宫颈癌Hela细胞具有放疗增敏作用,其机制与ABT737可延迟宫颈癌细胞放疗后DNA损伤修复及诱导凋亡有关.
