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人大肠癌细胞蛋白质组中免疫球蛋白重链可变区和B7-1的表达
目的分析人大肠癌LS174T及SW480细胞株的蛋白质表达谱.方法通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离人大肠癌LS174T及SW480细胞总蛋白质,经基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图(PMFs),通过Mascot软件查询蛋白质数据库进行蛋白质的初步鉴定.结果获得了分辨率较高的人大肠癌LS174T及SW480细胞的双向电泳图谱,初步鉴定了一批蛋白质,包括免疫球蛋白重链可变区(IgVH)和共刺激分子B7-1,并通过电喷雾离子阱串联质谱(ESI-MS/MS)分析和免疫细胞化学染色得到进一步证实.结论在人大肠癌LS174T和SW480细胞中存在IgVH和B7-1的表达,这一发现有助于进一步阐明肿瘤的免疫逃逸机制.
关键词： 大肠癌 蛋白质组 免疫球蛋白重链可变区 B7-1 -
慢性淋巴细胞白血病患者IgVH基因突变研究
目的 探讨我国慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者IgVH基因各家族成员的发生频率以及突变情况.方法 应用多重PCR技术检测29例CLL患者的IgVH基因突变,纯化PCR扩增产物后直接测序,测序结果应用IMGT/V-QUEST数据库进行比对分析,明确有无IgVH突变及突变位置.结果 21例患者有体细胞突变,占CLL患者的72.4%;8例无突变.VH3家族16例,占CLL患者的55.2%,其中体细胞突变13例,占81.2%;VH4家族11例,占CLL患者的37.9%,其中突变7例,占63.6%;1例(3.5%)IgVH 2-5*10发生体细胞突变;1例(3.5%)IgVH 7-4-1*02无突变;未发现VH1、VH5和VH6家族成员.结论 我国CLL患者IgVH基因家族表达比例与西方国家存在显著差异,可能与种族和环境因素有关,这也可能是西方国家与我国CLL发病率差异的原因之一.
关键词： 白血病 淋巴细胞 慢性 免疫球蛋白重链可变区 基因突变 -
慢性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白重链片段及其突变状态的研究
目的 探讨我国慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者免疫球蛋白重链可变区基因(IgVH)突变状态、基因偏颇性及其预后价值.方法 应用多重PCR法检测CLL患者表达型IgVH片段使用情况及突变状态,并与患者生存和预后进行相关性分析.结果 ①共检测初诊CLL患者85例,80例(94.1%)成功测序.②IgVH片段的使用存在明显的偏颇性,其中常见的为VH3家族(32例,40.0%)、VH4家族(24例,30.O%),而VH5、VH6和VH7家族少见.VH4-39是常见的VH基因片段.而J4和D3分别是JH家族和DH家族中使用频率高的片段.③IgVH突变型56例(70.0%),非突变型24例(30.O%).其中VH3家族突变率为90.7%(29例),VH4家族突变率为62.5%(15例).④突变组与未突变组患者无进展生存时间(82个月和17个月,P=0.000)和总生存时间(90个月和41个月,P=0.009)差异均有统计学意义.⑤CLL患者IgVH CDR3区序列具重现性,2例VH片段为VH1-69的患者其CDR3序列与文献报道序列有很高的同源性.VH片段为VH1-18、VH3-7、VH3-23的患者中分别有2例CDR3序列完全相同.结论 不同地区间CLL患者IgVH基因家族使用情况和突变状态存在一定差异,IgVH CDR3区序列具重现性,推测相对有限的抗原参与了CLL的发病.
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ZAP-70和CD38在B细胞慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及临床意义
慢性淋巴细胞白血病(CLL)的病程差异很大,可以从数月到数十年.目前认为免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变状态是CLL好的预后指标.
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人类个体发育中的免疫球蛋白重链可变区基因谱型
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)介导的体液免疫反应在人体对抗外来抗原侵袭过程中起着重要作用.全部编码免疫球蛋白的基因被称为免疫球蛋白基因谱型(repertoire).人类胎儿和新生儿存在着相对免疫缺陷,针对病原微生物的侵袭,他们仅能产生多反应性、非特异性的低亲和力抗体.这类抗体的产生反映了人类生长发育早期Ig基因谱型的有限性.本文着重进行人类个体发生过程中免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavy chain ,IgH)可变区基因谱型研究的综述.
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应用CpG-寡脱氧核苷酸免疫刺激进行慢性淋巴细胞白血病的染色体研究
目的 验证CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)免疫刺激是否能提高B细胞慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)核型异常检出率.方法 抽取57例B-CLL患者的骨髓或外周血,分别加入CpG-ODN DSP30+白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、美洲商陆(pokeweed,PWM)和IL-2后进行培养,5 d后按常规收获并制备染色体,应用R显带技术进行核型分析.应用Cen12、D13S25、Rb1、ATM、P53、MYB和IgH探针对其中19例核型正常的患者进行组合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测.抽提骨髓或外周血单个核细胞基因组DNA,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin variable heavy chain,IgVH)并进行DNA序列分析.应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测白血病细胞的CD38和ZAP70表达.结果 DSP30+IL-2组的异常核型检出率(43.85%)明显高于PHA组(15.09%)、PWM组(17.31%)和IL-2组(3.13%)(P<0.01).DSP30+IL-2组共检出畸变52种.数目异常以+12或+12伴其它异常为多见(9例);结构异常以易位为多见(14例),包括平衡易位11例和不平衡易位3例,前者中又以14q32重排为多见(7例).FISH显示19例正常核型患者中13例(68.42%)显示1种或多种异常,包括12三体和p53缺失各l例,IgH重排和部分缺失各1例,13q14.3缺失11例,其中5例合并RB1缺失,1例合并RB1部分缺失,未见ATM和MYB缺失者.PCR揭示10/18例有IgVH突变(55.55%).FCM检测揭示10/45例CD38+,35/45例CD38-,11/27例ZAP70+,16/27例ZAP70-.同时进行CD38和ZAP70检测的26例中,5例为CD38+ZAP70+,13例为CD38-ZAP70-,2例为CD38+ZAP70-,6例为CD38-ZAP70+.统计学分析揭示复杂核型异常与IgVH无突变之间有相关性,但未发现CD38或ZAP70表达与核型之间有相关性.结论 CpG-ODN可显著提高CLL的核型异常特别是各种平衡和不平衡易位的检出率;FISH是常规核型分析的重要补充,二者结合能提供更全面的遗传学信息.
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中国人群慢性淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区基因组成及突变分析
目的 研究中国慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)患者免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin variable heavy chain region,IGVH)基因各个片段的组成以及突变情况.方法 应用多重PCR技术扩增64例CLL患者的IGVH基因片段,纯化PCR扩增产物后直接测序,应用IMGT/V-QUEST及IGBlast数据库分析,明确VH基因有无突变和突变位置,以及VH、DH,JH家族各个成员组成情况.结果 64例CLL患者中,VH3家族31例(48%)、VH4家族26例(41%)、VH1家族4例(6%)、VH2家族2例(3%)、VH7家族1例(2%).44例患者发生体细胞突变,占CLL患者的69%;20例无突变,占CLL患者的31%,其中6例(9%)VH基因的同源性为100%.VH4家族中有9例无突变(9/26,35%);VH3家族中8例无突变(8/31,26%);VH1家族中1例无突变(1/4,25%).在所检测的CLL标本中,VH4-34是常见的VH基因片段,检测出8例(13%),其中无突变3例;其次为VH4-59,检测出7例(11%),无突变者3例.DH基因中DH3家族常见,有25例(39%);其中11例(11/20,55%)出现在无突变组中.无突变组中常见的DH基因片段为DH3-10和DH3-22,各为4例(4/20,20%).JH基因中JH6家族常见,检测出23例(36%),其中9例出现在无突变组中(9/20,45%).结论 中国CLL患者IGVH基因家族表达比例和突变情况与西方国家存在显著差异,推测可能与不同的种族和环境中的抗原选择有关,其预后意义有待进一步探讨.
关键词： 慢性淋巴细胞白血病 免疫球蛋白重链可变区 基因突变
