首页 > 文献资料
-
2016年黔江区家蝇抗药性监测研究
目的:了解黔江区家蝇的抗药性水平,科学指导卫生杀虫剂的使用.方法:点滴法测定野外家蝇对3种杀虫剂的半数致死剂量并与敏感品系进行比较得出抗性系数.结果:黔江区家蝇对高效氯氰菊酯的抗性高,抗性系数为29.81,对敌敌畏的抗性其次,抗性系数为13.70,对残杀威几乎无抗性,抗性系数为0.02.结论:黔江区家蝇对高效氯氰菊酯和敌敌畏都是高抗,建议停止使用高效氯氰菊酯等你除虫菊酯类杀虫剂,改用其他杀虫剂并轮换用药,减缓抗药性的发展.
-
硫酰氟熏蒸4种媒介致死顺序与影响因素研究
目的 研究硫酰氟对蚊、家蝇、蜚蠊和鼠熏蒸绝对致死顺序及温度、湿度等因素对熏蒸致死效果的影响,以指导实际应用.方法 蚊、家蝇和蜚蠊每个浓度梯度选用50只供试成虫,小鼠、SD大鼠每个浓度梯度选用10只,熏蒸24h,进行连续观察,实时记录其死亡情况.固定硫酰氟的用量和熏蒸时间,调节环境温度、湿度,观察媒介的死亡情况.在相同的实验条件下,观察蚊、蜚蠊不同种致死量的差异.结果 硫酰氟熏蒸蚊、家蝇、蜚蠊和鼠24h绝对致死顺序为:蚊(1.099 g/m3)＜家蝇(1.520 g/m3)＜蜚蠊(3.817 g/m3)＜小鼠(3.874 g/m3)＜大鼠(5.122 g/m3).温度、湿度影响硫酰氟对4种媒介的熏蒸致死率.硫酰氟熏不同蚊种和不同蜚蠊种间致死量无明显差异.结论 本研究结果对指导口岸处理集装箱个案化用药具有参考作用.
-
4种滞留喷洒剂室内杀灭蝇和蟑的效果研究
目的 测试4种滞留喷洒剂对室内蝇和美洲大蠊的杀灭效果.方法 依据农药登记用卫生杀虫剂药效试验及评价第1部分喷射剂(GB/T 13917.1-2009),对4.5％高效氯氰菊酯、5％高效氯氰菊酯、10％顺式氯氰菊酯和20％残杀威进行室内滞留喷洒灭蝇和灭蟑药效检测.结果 4种滞留喷洒药剂中4.5％高效氯氢菊酯、5％高效氯氢菊酯和10％顺式氯氰菊酯对蝇和美洲大蠊的致死效果较好,在规定的试验天数内死亡率均能达到95％及以上,可持续天数较长,20％残杀威对蝇和美洲大蠊的致死效果稍差,可持续天数较短.结论 4种滞留喷洒药剂对蝇和美洲大蠊均有较好的防治效果.
-
高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变
目的 探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用.方法 首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况.对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性.结果 与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P＞0.05).使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型.经核酸测序,该扩增片段没有突变位点.结论 杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关.
-
家蝇幼虫乙醇提取物的抗炎解热作用及机制
目的:研究家蝇幼虫乙醇提取物(MDE)对酵母致炎发热大鼠的解热作用及机制.方法:利用干酵母致炎大鼠发热动物模型,设立生理盐水组:ig等体积生理盐水；模型组:ig等体积生理盐水+大鼠背部sc 15％干酵母20 mL·kg-1;阿司匹林组:ig阿司匹林0.3 g·kg-1；给药组:分别ig MDE(1,0.5,0.25 g·kg-1),qd,预防性连续给药7 d(n=10),观察MDE对发热大鼠直肠温度的影响,测定给药后不同时间的体温变化,并采用放免法测定下丘脑中前列腺素E2(PGE2)和环磷腺苷(cAMP)含量.结果:1,0.5,0.25 g·kg-1MDE具有不同程度的退热作用；并能减少致热大鼠下丘脑中PGE2及cAMP的含量,高剂量组(126.86±24.89)ng·g-1,(9.72 ±1.11)nmol·g-1;中剂量组(180.12±34.58)ng·g-1,(10.05±0.26)nmol·g-1;低剂量组(203.54±30.46)ng·g-1,(10.79±0.57)nmol·g-1；与模型组(253.70±43.96)ng·g-1,(12.15±3.11)nmol·g-1比较具有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:MDE具有解热作用,其作用机制与降低下丘脑中PGE2以及cAMP有关.
-
用mRNA RT-PCR差异显示技术克隆拟除虫菊酯抗性家蝇细胞色素P450基因片段
细胞色素P450单加氧酶系是一类广泛分布在生物有机体中的重要酶系,具有多样的功能.细胞色素P450介导的杀虫剂代谢解毒作用的增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的普遍机制.为揭示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的分子基础,我们利用mRNA差异显示技术(DD RT-PCR)从溴氰菊酯抗性品系家蝇Musca domestica中分离出2个新的基因片段(M1,M2).序列比对(BlastP)结果表明,M1与黑腹果蝇Drosophila melanogaster中的Cyp6A9在氨基酸水平上具有54%的相似性,M2分别与果蝇Drosophila simulans中的Cyp6g1有65%的相似性.M1和M2包含P450的特征序列,并与细胞色素P450具有高程度的序列相似性,是为细胞色素P450基因片段.
关键词： 家蝇 抗性 细胞色素P450 mRNA差异显示技术 -
杀虫隆对末龄幼虫家蝇表皮成分及体内激素滴度的影响
用不同剂量的几丁质合成抑制剂杀虫隆(Triflumuron)饲喂家蝇(Musca domestica)幼虫后,对末龄幼虫表皮的化学成分进行定量分析,结果表明表皮中几丁质的含量减少了22.6%～46.3%.杀虫隆对表皮粗脂肪的合成稍有促进作用,但影响不显著.用高浓度(>1mg/L)杀虫隆处理家蝇幼虫后能明显提高表皮中粗蛋白的含量.用高效液相色谱法测定家蝇末龄幼虫不同时龄血淋巴中蜕皮激素和保幼激素的含量变化,结果表明杀虫隆能强烈抑制末龄幼虫血淋巴中蜕皮激素的滴度峰,但对峰期以外时间的滴度没有显著影响.杀虫隆可使末龄幼虫的保幼激素滴度在24时龄前维持在高于正常幼虫的水平,24时龄后,对照组血淋巴中的保幼激素滴度开始上升,在48时龄时上升到一较高值,而处理组却在48时龄时下降到较低水平.
-
抗性家蝇para基因的选择性剪接和位点突变
为了在分子水平上研究拟除虫菊酯抗性家蝇靶标抗性机制,根据昆虫para型钠通道Ⅱ区S4至S6及Ⅱ与Ⅲ连接区的保守区域,设计简并引物,利用降落RT-PCR,克隆拟除虫菊酯kdr(R品系)家蝇para型钠通道704bp的cDNA,根据此序列用Primer Premier 5.0设计特异引物,分别扩增敏感(SS品系)、 super-kdr(RR品系)家蝇各651bp的cDNA.结果SS无有义突变,R和RR在ⅡS6 CTT到TTT的替换导致Leu 1014到Phe的保守性突变,RR在Ⅱ S 4～5细胞内片段接头处没有与超-kdr抗性相关的Met到Thr突变;另外首次发现kdr(R品系)家蝇在Ⅱ与Ⅲ连接区出现39bp的选择性剪接,构成家蝇para钠通道亚型(命名为xych,GenBank登陆号为AF411452).
-
家蝇抗菌肽对 FBL－3红白血病原代细胞增殖影响浓度的探索
本文初步探究不同浓度家蝇幼虫抗菌肽对FBL－3红白血病原代细胞增殖的影响。采用诱导、研磨、离心、 C18固相萃取等方法制备家蝇幼虫抗菌肽混合物，然后处理传代期的FBL－3细胞，调整浓度为2．25×106／mL并通过尾静脉注射C57BL／6小鼠，建立红白血病动物模型。待肿瘤生长较大时，处死并剥离肿瘤，再通过研磨、裂红液裂解、获取原代肿瘤细胞并培养。将抗菌肽混合物调整为不同浓度作用于传代期的FBL－3原代细胞，之后经倒置显微镜观察照相，台盼蓝染色试验计算死亡率、 CCK－8试剂盒做细胞毒性检测。结果显示抗菌肽混合物浓度为250～350μg／mL作用FBL－3原代细胞时，细胞碎片大量增多，死亡率增高，细胞毒性变大。初步证明了抗菌肽混合物在250～350μg／mL抑制细胞增殖效果明显，在300μg／mL浓度下抑制作用强，本研究结果可作为动物模型体内实验的参考。
-
家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响
采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响.结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用.通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系.defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期.家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用.
-
家蝇敌敌畏抗性品系的选育以及乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的变化
本研究采用敌敌畏对家蝇的自然种群选育了20代,抗性指数由初的4倍上升至20倍.选育过程中.F2～F14抗性变化不大,抗性指数在8倍左右变动;F15～F20抗性呈直线增长.通过检测抗性选育过程中家蝇体内乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的活性表明,这两个酶活性的变化与家蝇对敌敌畏的抗性没有明显的相关关系.但是抗性的发展趋势与家蝇体内乙酰胆碱酯酶或羧酸酯酶对敌敌畏的敏感度降低是一致的.
-
寡核苷酸探针法(PCR-ASO)检测家蝇kdr抗性相关的L1014F点突变
为检测家蝇对拟除虫菊酯击倒抗性kdr等位基因上的L1014F点突变,采用了寡核苷酸探针法(PCRAllele Specific Oligo nucleotide probe,PCR～ASO),用于检测该点突变.对L1014位的上下游DNA进行PCR扩增,并将纯化产物平行点样在带正电荷的尼龙膜上,用2条地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,1条为敏感型,1条为突变型,与之杂交,根据显影的阳性信号判断待检样品的kdr等位基因型.该方法能区分敏感纯合子、抗性纯合子及杂合子,是检测家蝇kdr抗性的有用工具.
-
吊飞条件下日龄及性别对家蝇成虫飞行能力的影响
25℃条件下(RH 45%～55%),对家蝇驯化种群1～25日龄的7个日龄组的雌、雄成虫进行吊飞研究,从累计飞行距离看,雌、雄成虫均为双峰型,在9日龄和17日龄,飞行机能分别达到2个高峰.从累计飞行时间看,雄虫为单峰型,在17日龄达到高峰,雌虫为双峰型,在5日龄和17日龄飞行机能达到高峰.从平均飞行速度来看,雌、雄成虫均在5日龄出现1个低值,在9、13、17日龄,飞行机能处于高水平.综合来看,发现5日龄以前雄虫的飞行能力远不如雌虫;9~17日龄家蝇飞行机能维持在较高水平;17日龄后飞行机能显著衰退.从累计飞行距离和累计飞行时间来看,雄虫飞行机能的弱期发生在21日龄,雌虫发生在25日龄;1日龄的飞行机能不论雌、雄均不如5日龄;雄虫的飞行机能高峰值发生在17日龄,9日龄为第2峰值.从平均飞行速度来看,不论雌、雄,家蝇成虫飞行机能在5日龄均为弱,甚至弱于21日龄;雄虫的飞行机能高峰出现在第9日龄,雌虫的高峰同时出现在第9日龄和第17日龄.单从累计飞行距离来看,雌虫的飞行机能高峰值发生在9日龄,17日龄为第2峰值.统计分析结果显示,家蝇累计吊飞飞行距离在17日龄组与1日龄组和21日龄组间均有极其显著的差异(F(0.01)=3.05>F(6,102)=2.99);吊飞飞行速度在雌、雄不同性别间有显著的差异(F(0.05)=4.61>F(1,108)=3.93).
-
家蝇抗性相关P450基因的初步研究
为了在分子水平上研究拟除虫菊酯抗性家蝇的P450基因的特性,更好地研究其与抗性相关的机制,本研究根据在美洲地区的抗性家蝇品系(LPR)克隆的P450基因MDC YP6D1的保守序列设计合成引物,用PCR方法从北京地区的家蝇中也扩增出1条约210 bp的特异性片段,片段长度与原序列对应片段相近,说明北京地区的家蝇P450基因与MDCYP6D1间有很大的同源性.Hinf I酶切发现扩增产物上并没有相应的酶切位点,说明扩增产物与原序列MDCYP6D1的相应部分不一样,提示这一用PCR方法在北京地区的家蝇中扩增出的P450基因片段有可能对应一新的P450基因.PCR-SSCP结果显示扩增产物在一级结构上有一定的多态性,这一现象可能与P450基因在昆虫体内的复杂多样性有关.
-
川楝素对家蝇幼虫中肠细胞及淀粉酶活性的影响
本文通过透射电镜观察和生化分析研究了川楝素对家蝇(Musca domestia)幼虫中肠组织及中肠主要消化酶淀粉酶活性的影响.电镜观察表明,有效浓度的川楝素具有明显的胃毒作用,药物处理组家蝇幼虫中肠柱状细胞结构受到严重破坏:顶膜微绒毛零乱、脱线;线粒体肿胀,双层膜模糊不清,外室水肿,内嵴紊乱;内质网小池扩张,核糖体脱落.淀粉酶测定表明,中毒试虫的淀粉酶活性与正常虫相比,无显著变化.因此认为,川楝素主要作用于中肠细胞的质膜及内膜系统.对其消化酶--淀粉酶的活性没有显著影响.
-
家蝇幼虫抗菌肽粗提物与8种纯化物对SUP－B15细胞增殖抑制和诱导的凋亡作用
将家蝇三龄幼虫抗菌肽粗提物利用反相高效液相色谱仪（ RP－HPLC）进行分离纯化，得到8种与对照组有差异的蛋白分别命名为I1、 I2、 I3、 I4、 G1、 G2、 G3、 G4组。通过CCK－8试剂盒检测发现，其中有4种蛋白及粗提物（ E0组）对sup－b15细胞有增殖抑制作用，生存率均值分别为I1：0．714、 I2：0．785、I4：0．641、 G2：0．686、E0：0．561。采用流式细胞仪检测其诱导凋亡的效果，其凋亡率均值分别为I1：16．73、 I2：9．79、 I4：18．60、 G2：11．85、E0：35．94。对比发现，粗提物（ E0）对sup－b15细胞的抑制率明显高于纯化物，证明粗提物较纯化物对肿瘤细胞抑杀作用更为明显，间接的说明各种纯化蛋白之间具有某些协同作用。
-
贵阳市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状与kdr(L1014F)等位基因频率分析
探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的LI014F点突变频率相关性,为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据.本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定.结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和高效氯氰菊酯的LD50分别为0.00620 ～ 0.013339μg/雌蝇、0.02298 ～0.03614 μg/雌蝇,抗性系数分别为3.35 ～7.56、7.38 ～11.62.采用特异性等位基因PCR法测定基因频率,结果显示4城区家蝇种群的L1014F点突变频率在29％ ～37％.相关性分析显示L1014F点突变等位基因频率与高效氯氰菊酯LD50值之间存在直线相关.研究结果表明贵阳市家蝇对氯菊酯、高效氯氰菊酯已经产生了抗药性,击倒抗性是其抗性机理之一.
-
北京不同城区家蝇种群乙酰胆碱酯酶不敏感个体频率季节变化
本文在不同季节对采自北京4个城区的家蝇Musca domestica(L.)种群的乙酰胆碱酯酶(AChE)对杀虫药剂的敏感度进行检测.结果发现,在4个种群中,海淀区种群对敌敌畏、灭多威和残杀威3种杀虫药剂不敏感的AChE的个体频率均为低,且随季节变化不大;而西城、朝阳和丰台种群,对3种杀虫剂不敏感的个体频率均有随季节呈上升趋势.但是这3个种群上升的高峰期和上升的速度各不相同,其中丰台种群不敏感个体频率高,其上升的速度也快.
-
家蝇二氯苯醚菊酯抗性株分化的研究
本研究采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术,探索了家蝇二氯苯醚菊酯抗性株(2 000倍)在DNA分子水平上的分化.实验数据采用两种分析方法:1)用RAPDPLOT计算出个体间的遗传距离,进一步用PHYLIP软件包的NEIGHBOR程序进行UPGMA(非加权对组算术平均值聚类)聚类分析;2)经bootstrip方法随机取样100次,然后再进行UPGMA分析,在PHYLIP软件包的CONSENSE中形成合意树.两种分析方法结果极为类似,在聚类树中首先是抗性与非抗性个体分成两群,然后雌、雄个体分成两群,说明抗性株在DNA分子水平上已有明显的分化.OPD-02引物在全部抗性株个体中扩增出了非抗性株所没有的特异性同一片段(100bp左右),提示此片段有可能作为家蝇二氯苯醚菊酯抗性株的分子标记,但需进一步研究确定.
-
杀虫隆对家蝇生长发育及实验种群生殖力的影响
本文在适宜的综合实验条件下通过构建生命表，研究了杀虫隆对家蝇(Musca domestica)生长发育及种群动态的影响.结果表明：杀虫隆对家蝇卵不具有杀灭作用，但能显著抑制家蝇幼虫的生长发育，使幼虫各龄发育历期延长，后形成畸形蛹.蛹的羽化率降低48.2%～99.4％，并羽化产生畸形成虫.成虫寿命缩短8天～13天，雌虫首次产卵的日龄推迟1天～2天，产卵抑制率达67.3%～86.9％.种群的内禀增长能力(rm)降低39.4%～73.1％，净生殖率R0降低86.2%～97.3％，周限增长率λ则由1.231/d降低到1.134/d和1.056/d，从而抑制了家蝇种群的生殖力，降低了种群的增长速率.
