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双功能螯合剂与鼠IgG1 Fab′片段的点特异性交联方法改进
同完整IgG分子相比,单价抗体片段在免疫组织化学及核医学免疫显像中有明显优点.由胃蛋白酶消化制备的F(ab′)2抗体片段经温和还原可生成单价含活性基团-SH的Fab′片段.此片段的优点之一是可利用其铰链区的-SH基团与其它分子行点特异性交联.
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全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定.方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"黏附-洗脱-扩增"的亲和筛选.将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性.结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体.结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
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人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达
目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Ck基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAbl8的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHi和Ck基因正确插入到pComb3中,大小分别为324bp和333 bp,同时mAb HAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45 ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
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027 18F-FDG PET和99Tcm标记抗体片段免疫显像法探测结肠直肠癌复发
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基因工程抗体片段——谱写抗体家族的新乐章
随着分子生物学技术的进步和机体基因结构的阐明,以小分子抗体为基础并经基因工程改建从而用于研究和临床诊治的大量基因工程抗体片段应运而生.其中,可将生物学活性效应桥连于治疗靶标的双特异性抗体、同时增强抗体效能及细胞毒靶向性的免疫结合物、以独特的单域结构在生物技术和临床医学等方面倍受青眯的纳米抗体,以及在细胞内特定部位表达的细胞内抗体是近年来研究活跃的几个领域凭借免疫原性弱、组织渗透性强、低毒性及制备简便等优势,基因工程抗体片段较之单克隆抗体受到了更广泛的关注与认可.尽管大多数处于临床开发的抗体片段的安全性和有效性还有待确定,但基因工程抗体片段的研发必将大大提高人类疾病尤其是肿溜的诊治水平.
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国外药物制剂创新之路
2005年以来,国外批准上市的药物新制剂呈现如下特点:制备技术创新(如利用碳酸氢钠代替肠溶包衣、加热元素促进局麻药透皮吸收、抗体片段结合提高靶向给药的选择性、纳米粒技术革除不良反应严重的溶媒、靶向显影和抗体包涂支架等);给药途径创新(如胰岛素口腔喷雾与粉末吸入、沙替菲克口腔喷雾、铁鳌合剂一日1次口服、草过敏免疫治疗剂舌下给药、地西泮直肠给药、氟轻松玻璃体内植入给药和醋酸阿奈他弗眼后给药等);减少口服给药服用次数创新(如口服片剂一月1次);包装创新(如糠酸莫米松粉雾剂采用获DuPont创新包装奖的容器和白蛋白输液采用塑袋灌装).
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基因工程抗体及其在寄生虫病防治中的应用研究进展
抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景.传统多克隆抗体及单克隆抗体由于其固有的缺点使其应用价值受到限制.抗体的人源化与片段化改造催生出一系列基因工程抗体变体.本文就基因工程抗体及其在寄生虫病防治中的应用研究进展作一综述.
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人源性单链抗体在生殖器疱疹治疗中的应用
单链抗体(scFv)是将抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因通过一短肽链连接后融合表达出来的抗体片段,其大小为完整抗体分子的1/6,有与天然抗体相同的抗原结合特征,它又缺乏Fc片段,失去了Fc介导的受体结合作用,使得其快速向靶部位集中;同时scFv还具有分子量小,易入靶细胞,有较强的组织穿透力;免疫原性低,不易产生人抗鼠抗体反应;无Fc段,不易与靶细胞外的细胞结合,且组织分布率高等特点.