首页 > 文献资料
-
不同免疫策略获得c-erbB2单克隆抗体及其结合特性的比较
人类c-erbB2/HER2原癌基因属于EGFR家族.将c-erbB2真核表达载体转染NIH3T3细胞,可赋予该细胞以恶性表型[1];1998年由鼠源抗erbB2抗体人源化改造而来的Herceptin(商品名)已被美国FDA批准用以治疗c-erbB2高表达的转移乳腺癌,并已获得较好的临床治疗效果[2].本工作采用不同免疫策略获得了数株c-erbB2单抗,并对其与靶分子的结合特性进行了比较分析,提出了相对更易获得能与天然erbB2结合的抗体制备策略,可供后续工作参考.
-
稳定表达人乳头瘤病毒16型E7癌基因HaCaT细胞系的建立及其研究
官颈癌是世界第二大妇女常见肿瘤[1].大量流行病学和分子生物学研究证实高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV),尤其是HPV16型在宫颈癌发生、发展进程中起关键作用[2-3].HPV16型E7基因编码蛋白与细胞转化和病毒复制的调控有关,在维持转化组织恶性表型的过程中发挥重要作用.本研究选择与官颈卜皮细胞相似的非肿瘤性人永生化表皮细胞(HaCaT)作为研究对象,通过真核表达载体pCMV将HPVl6 E7基因导人HaCaT细胞,使HPV16 E7在HaCaT细胞中表达,探讨其对HaCaT细胞的增殖、周期及HLA-Ⅰ类分子表达的影响.
-
抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞HT-29生长的影响
目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用.方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重组体转染低表达NGX6的人结肠癌细胞HT-29,Dot blot及RT-PCR方法检测外源性NGX6基因的表达,借助生长曲线、MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、裸鼠成瘤实验对NGX6转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组细胞生长速度比pcDNA3.1(+)/HT-29和HT-29组明显减慢(P<0.05),其倍曾时间为345 h比pcDNA3.1(+)/HT-29(27.1 h)和HT-29(23.0 h)延长;pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组软琼脂集落形成率较对照组明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测NGX6高表达能延缓HT-29细胞周期由G0/G1期→S期的进程;裸鼠成瘤实验表明pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组成瘤受抑.结论:NGX6的重表达可逆转人结肠癌细胞HT-29的恶性表型;NGX6是极具前途的结肠癌相关抑瘤基因侯选者.
-
信号传导抑制剂571抗白血病的研究进展
(9;22)(q34;q11)易位可见于95%以上慢性粒细胞白血病(CML)和20%~25%急性淋巴细胞白血病(ALL),该易位使9号染色体上的abl基因和22号染色体上的bcr基因重排形成bcr/ abl融合基因,导致正常abl基因编码的P145蛋白变为P210蛋白或P190蛋白,后两者的酪氨酸激酶活性增高,刺激细胞增殖,终导致恶性转化[1].由于酪氨酸激酶在CML的发病中起着重要作用,研究人员一直致力于寻找一种针对酪氨酸激酶的药物以阻断其异常的下游信号传导,使CML发生的分子机制被纠正、恶性表型得以逆转.
-
肝细胞肝癌syndecan-1的表达及临床意义
syndecan是一新近发现的基因家族,在肿瘤生长、分化、转移过程中起重要作用[1].我们采用免疫组化和RT-PCR方法研究其在31例肝癌中的表达,以探讨syndecan-1与肝癌恶性表型的关系.
-
基质金属蛋白酶抑制剂-3基因转染抗人肝癌细胞系侵袭与转移的研究
我们将基质金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP-3)基因转入肝癌细胞HCC-7721细胞系,观察上调TIMP-3的表达对肿瘤生物学行为的影响,进而探讨基质金属蛋白酶(MMPs)和TIMPs与肿瘤恶性表型的相关性及其在恶性肿瘤基因治疗上的意义.材料与方法
-
C-erbB2及C-myc基因反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌COC1细胞的作用
近年来,有关卵巢肿瘤的基因治疗研究方兴未艾,特别是反义基因治疗取得了一些明显的效果[1].但随着分子生物学和分子遗传学技术的深入发展,人们已逐渐认识到肿瘤的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程,单一癌基因的反义阻断不能完全抑制或逆转其恶性表型.本研究应用脂质体(LF)介导的C-myc、C-erbB2基因反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)共同作用于卵巢癌COC1细胞系,通过体外实验探讨反义基因治疗对COC1细胞C-erbB2、C-myc 基因表达及细胞增殖的影响.
-
胰腺癌相关基因研究进展
胰腺癌是一种预后较差的消化系统恶性肿瘤,其发生发展过程是原癌基因、抑癌基因和DNA修复基因共同作用的结果.本文主要就近年来研究较多的与胰腺癌相关基因作一复习,并简述其与胰腺癌生物学特性和临床治疗的关系.
-
维甲酸类化合物对非小细胞肺癌作用机制的研究
维甲酸类化合物是维生素A类衍生物,包括维甲酸(retinoic acid,RA)、维胺酸、维胺酯及天然维生素A等,约有4 000多种.其中以RA常用,包括几种异构体:全反式维甲酸(alltran retinoic acid,ATRA)、9顺维甲酸(9-cis retinoic acid,9-cis RA)和13顺维甲酸(13-cis retinoic acid,13-cis RA)等.体内外研究发现,它们对组织细胞的生长、发育及功能维持起重要作用,并能预防恶性肿瘤的发生和诱导多种恶性肿瘤细胞的分化,逆转肿瘤细胞的恶性表型等.因此,近年来倍受重视,为抗肿瘤新药的研究开辟了一条新方向.
-
桂皮酸逆转人肝癌细胞某些恶性表型的研究
目的观察桂皮酸(CINN)对人肝癌细胞(HepG-2)的作用.方法体外培养HepG-2细胞,用CINN处理后,观察细胞形态、细胞集落形成能力、甲胎蛋白分泌量及细胞周期频数分布的变化.结果细胞形态趋向良性分化,集落形成率降低,甲胎蛋白分泌减少,G0/G1期细胞增加而G2+M期细胞减少.结论CINN可使HepG-2细胞某些恶性表型发生逆转.
-
恶性肿瘤基因治疗结合放射治疗的研究进展
肿瘤的基因治疗是当前医学和生物学的一个新的研究领域,它是通过将外源性 DNA片段即目的基因稳定地插入到靶细胞基因中,使其在肿瘤部位表达高浓度产物或在体外相关细胞内重组后再导入体细胞中表达,从而抑制肿瘤恶性表型,达到控制肿瘤细胞生长和繁殖的目的.目前基因治疗研究在细胞和动物实验阶段已取得了一定的成果,有不少方法已进入临床试验阶段,但其临床治疗疗效并不令人满意 [1].基因治疗尚不能取代手术、放疗、化疗等常规治疗手段,但研究已表明其可用来提高放疗、化疗的敏感性,减少肿瘤的复发和转移等 [2].本文将就近几年来基因治疗结合放疗治疗恶性肿瘤的研究进展作一简要综述.
-
辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用
目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制.方法 (1)选取2组人卵巢癌细胞(SKOV3和SKOV3/DDP;HO8910和HO8910-PM)后,设置对照组和终浓度为1、3、5及7μmol/L SAHA组(SAHA 1~4组),采用CCK-8法分别检测SAHA对细胞增殖的影响.(2)设置对照组和SAHA 1、2组(2和5μmol/L),Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术分别检测SAHA对细胞凋亡及周期的影响.(3)RT-PCR和Western blot检测SAHA 1~4组表型相关蛋白的表达水平.结果 (1)随着SAHA浓度的增加,SKOV3细胞株SKOV3/DDP及HO8910细胞株48 h光密度(OD)值均呈逐渐降低趋势(均P<0.05).(2)48 h SAHA 1、SAHA 2组凋亡率高于对照组(均P<0.05);SAHA作用48 h,细胞周期发生阻滞,与对照组比较,SAHA 1组和SAHA 2组SKOV3和SKOV3/DDP细胞S期和G2/M期比例增高,HO8910和HO8910-PM细胞G0/G1期比例增高(P<0.05).(3)SAHA 1、2组CyclinB1和Cdc2(p34)的mRNA表达水平均低于对照组,Caspase-3、p21和p53的mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05);SAHA 1~4组Ac-Histone H3和Ac-Histone H4和p53蛋白的表达较对照组明显增强,CyclinB1、Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱.结论 SAHA通过调节恶性表型相关蛋白Caspase-3、p53、CyclinB1和Cdc2(p34)的表达水平,促进组蛋白乙酰化,抑制卵巢癌细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡.
-
Aurora-B介导NPM1蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞 恶性表型的体外研究
目的 探讨Aurora-B介导NPM1(nucleophosmin1)蛋白磷酸化水平改变对骨肉瘤细胞恶性表型的影响.方法 运用生物信息学数据库预测NPM1在肉瘤中的表达情况以及Aurora-B与NPM1的相互关系.构建重组慢病毒载体,获得沉默Aurora-B慢病毒(LV/ShAurora-B)、过表达NPM1慢病毒(LV/NPM1)和阴性对照慢病毒(LV/negative).转染人源骨肉瘤细胞系143B及U2-OS细胞,分为Lv/ShAurora-B组、NC(LV/negative)组和LV/ShAurora-B+LV/NPM1共转染组.Western blot分别检测LV/ShAurora-B组和NC组中Aurora-B、磷酸化NPM1ser125蛋白表达.采用CCK-8法检测3组细胞增殖情况,Wound healing法检测细胞迁移能力,Transwell invasion法检测细胞侵袭能力.结果 生物信息学结果显示,NPM1在肉瘤中高表达以及NPM1高表达患者的预后较差,且NPM1存在丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点,Aurora-B与NPM1之间可能存在磷酸化作用.Western blot结果显示,与NC组相比,LV/ShAurora-B组中Aurora-B和磷酸化NPM1ser125蛋白的表达均降低(P<0.05),而NPM1蛋白差异无统计学意义(P>0.05).体外表型实验显示,LV/ShAurora-B组细胞的增殖、迁徙和侵袭能力均低于NC组(P<0.05),且LV/ShAurora-B+LV/NPM1共转染组能部分恢复下调Aurora-B对骨肉瘤细胞恶性表型的抑制(P<0.05).结论 Aurora-B通过介导NPM1蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞恶性表型.
-
端粒酶催化亚单位基因转染对人胚胎成纤维细胞表型及寿命的影响
目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEFs)寿命的影响以及基因转染后细胞是否存在恶性表型.方法应用脂质体法将pIRES2EGFPhTERT正义重组质粒及pIRES2EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs,Westernblot检测hTERT蛋白及I、III型胶原表达.染色体核型分析、裸鼠皮下致瘤性实验、DNA倍体实验以及形态学观察分析转染细胞是否存在恶性表型.结果外源性hTERT基因转染的胚胎成纤维细胞hTERT蛋白和I、III型胶原表达增加,体外传代次数增加,传至75代仍保持以2d的倍增周期生长,并且染色体仍为23对,均为正常二倍体细胞;裸鼠皮下不具有成瘤的能力;而hEFs和空载转染细胞传至60代左右平均五六天传代1次,出现生长停滞现象.结论外源性hTERT基因转染使胎儿成纤维细胞增殖旺盛,寿命延长,且不具有恶性表型.
关键词: 人端粒酶蛋白催化亚单位 人胚胎成纤维细胞 恶性表型 -
微卫星不稳定性与非霍奇金淋巴瘤的研究进展
肿瘤是一种基因病.正常细胞逐步获得恶性表型需要多个遗传改变的积累,是多种基因变异并长期累积所致的结果.微卫星是广泛存在基因组中简单串联重复DNA序列,具高度多态性,变异率极低.肿瘤的发生发展与基因组特定微卫星DNA遗传的不稳定性(Microsatellite instability,MSI)及相应等位基因的杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)有关,并发挥重要作用[1].本文就近年非霍奇金淋巴瘤中此领域的研究进展作一综述.
-
膀胱癌中线粒体DNA的研究进展
膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多步骤的过程,异常基因型的长期积累导致恶性表型的出现[1].膀胱镜检能在直视下进行可疑病变的检测,但它是一种创伤性诊断方法,又对设备技术要求较高,限制了它在早期诊断和普查中的应用.尿脱落细胞学检查是膀胱癌无创性诊断常用的手段[2],但敏感性较低,容易漏诊.开发对患者特异、敏感无创伤的早期诊疗手段成为膀胱癌成功治疗的关键.目前认为肿瘤生物学特征不仅取决于核遗传物质,而且与mtDNA关系密切.mtDNA缺乏组蛋白保护,缺乏有效的损伤修复系统,极易受到致癌物的攻击,进而诱发突变[3-4].目前,线粒体突变在不同的肿瘤中已多有报道,而本文主要针对其与膀胱癌相关性进行探讨.
-
膜型基质金属蛋白酶-1增强乳腺癌细胞系MCF-7的恶性表型
目的:探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MTI-MMP)蛋白酶-1表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生物学行为的影响及MTI-MMP催化亚单位在其中的作用.方法:应用脂质体转染法将携带MTI-MMP及其突变体基因MTI-MMP-E240A的pcDNA3.1载体分别稳定导入MCF-7细胞,通过超微结构观察及体外生长、迁移实验检测MCF-7细胞生物学行为的变化.结果:转染后的细胞经RT-PCR证实MTI-MMP mRNA的表达与对照组比较明显增强;免疫荧光细胞化学染色显示MTI-MMP蛋白呈强阳性表达,阳性颗粒分布于肿瘤细胞的胞浆和胞膜.透射电子显微镜观察显示pcDNA3.1组和MCF-7组细胞未见异常,而MTI-MMP组与MTI-MMPE240A组细胞与对照组相比出现较多处于分裂期的细胞和瘤巨细胞,部分细胞胞浆内出现糖原池和髓样小体样溶酶体.细胞增殖周期、细胞生长曲线测定结果显示,MTI-MMP组与MTI-MMP-E240A组处于G2M期的细胞比率明显高于对照组(P<0.01),提示转染组细胞的增殖能力增强.转染组细胞在Matrigel和FN上的迁移能力较对照组明显增强(P<0.05).结论:MTI-MMP能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移,在一定程度上增加其恶性表型;MTI-MMP催化亚单位在其中不发挥主要作用.
关键词: 膜型基质金属蛋白酶-1 乳腺肿瘤 MCF-7 恶性表型 迁移 -
模拟微重力对恶性胶质瘤细胞U87影响的实验研究
目的:探讨模拟微重力(Modeled microgravity,MMG)对恶性胶质瘤细胞U87形态、生长增殖、基质金属蛋白酶-2、-9(Matrix metalloproteinase 2,MMP-2、Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响.方法:常规培养U87细胞,传代培养3代后分为两组,正常重力组(Normal gravity,NG组)及模拟微重力干预组(Modeled microgravity,MMG组),相应条件下培养24 h,48 h和72 h.倒置显微镜观察U87细胞形态改变,细胞计数法及四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyitetrazolium bromide,MTT法)检测模拟微重力干预和干预后U87细胞生长增殖情况;Western Blot检测不同培养时间后胶质瘤细胞U87 MMP-2、MMP-9及GFAP蛋白的表达情况.结果:模拟微重力条件下培养72 h后,U87细胞轮廓不规则,边缘圆钝,触角变少;模拟微重力条件下,U87细胞生长速度明显减慢,并且经模拟微重力干预48 h和72 h后的胶质瘤细胞经传代再培养,其增殖率也明显低于正常重力组;同时,U87细胞MMP-2及MMP-9蛋白表达水平与模拟微重力处理时间呈时间依赖性下降,而GFAP蛋白表达水平则呈时间依赖性升高.结论:模拟微重力影响U87细胞的形态、生长及表型.
-
ZSTK474对结肠癌细胞PI3K、Akt、FASN表达及细胞增殖的作用研究
目前,大多数肿瘤组织的恶性表型与特殊的物质代谢和能量代谢密切相关.近期研究表明,脂肪酸合酶( fatty acid synthase,FASN)介导的代谢异常在肿瘤发生、发展过程中具有重要作用[1].同时,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)信号通路也与细胞代谢密切相关.因此,本研究将一种新型的PI3K抑制剂ZSTK474作用于结肠癌细胞株Caco-2,以探讨PI3K/Akt信号通路调控Caco-2细胞FASN表达的作用及其对Caco-2细胞增殖的影响.
-
食管癌组织中EphA2蛋白的表达及其与E-钙粘蛋白的关系
近研究发现,EphA2的高表达与许多肿瘤的组织学分级、淋巴结转移及预后有关.E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达减少或缺失也已被证实与多种人类肿瘤的恶性表型相关联.有研究表明,在上皮细胞中,E钙粘蛋白调控EphA2的配体结合及后续降解,从而调控EphA2的功能转化及表达[1,2].我们采用免疫组化方法,研究EphA2及E-钙粘蛋白在食管癌中的表达及相关性,并探讨其与食管癌临床病理特征的关系及意义.