首页 > 文献资料
-
抗胃癌抗体轻链可变区序列测定和三维结构模建
目的:确定抗胃癌抗体轻链可变区(VL)的一级结构,并模建其三级结构.方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出VL基因,并进行序列测定和分析.利用同源蛋白结构模建技术,采用计算机辅助分子设计系统模建VL的三维空间结构.结果:所获得的VL序列符合鼠抗体可变区特征,并成功构建了其三维空间结构.结论:所测得的VL一级结构和构建的三维空间结构均有较高的可靠性.
-
胶质瘤单链抗体的基因构建及表达
单链抗体(ScFv)因其能较好地保持对抗原亲和活性,分子量小,穿透力强,抗原性弱,且易与效应分子相拼接,是构建免疫毒素和双功能抗体的较理想元件.我们在已克隆抗胶质瘤单抗SZ39重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因的基础上,构建了抗人脑胶质瘤ScFv基因,并克隆于表达载体pGEX-5X-1,在大肠杆菌中诱导表达,现将结果报道如下.
-
单链抗体表达研究进展
单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)由抗体重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸的短肽(linker)连接而成.在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物,将极大增强对靶细胞的杀伤能力.Kanter等[1]研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白,是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗.Wang等[2]通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和抗单端孢霉毒素(ZEN)scFv基因融合.表达为抗DON和抗ZEN scFv,结果显示双功能抗体成功构建.并可应用于DON和ZEN检测.
-
人源性单链抗体在生殖器疱疹治疗中的应用
单链抗体(scFv)是将抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因通过一短肽链连接后融合表达出来的抗体片段,其大小为完整抗体分子的1/6,有与天然抗体相同的抗原结合特征,它又缺乏Fc片段,失去了Fc介导的受体结合作用,使得其快速向靶部位集中;同时scFv还具有分子量小,易入靶细胞,有较强的组织穿透力;免疫原性低,不易产生人抗鼠抗体反应;无Fc段,不易与靶细胞外的细胞结合,且组织分布率高等特点.
-
用聚合酶链反应制备抗端粒酶蛋白重链和轻链可变区基因
目的:为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因.方法:采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的E.coliJM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT,并免疫小鼠.从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA,逆转录成cDNA,以逆转录合成的cDNA第一条链为模板,分别用VH和VL引物,通过PCR进行扩增.结果:PCR扩增反应产生350bo大小的抗hTERT重链和轻链可变区基因.VH和VL基因片段的获得为进一步制备抗hTERT单功能区抗体(dABs)和单链抗体ScFv奠定了实验基础.结论:提示该方法具有稳定性好,易于重复,扩增后VH和VL量较高的优点.
-
抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区VL与GFP融合蛋白的表达及生物活性测定
目的:在大肠杆菌中表达抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区基因(VL)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白,并测定其生物学活性.方法:应用基因工程技术,将EGFP基因克隆到载体pTO-T7中构建原核表达载体.然后将MA18/7的VL基因按照读码框插入到无终止密码子TAA的EGFP基因的5′末端,构建融合蛋白表达载体.通过ELISA和相对荧光强度测定在大肠杆菌中表达的融合蛋白的活性.结果:构建了EGFP-MA18/7-VL表达载体.SDS-PAGE表明,融合蛋白主要以包涵体的形式存在.荧光测定显示,融合蛋白保持了GFP的荧光性质.ELISA的结果表明,融合蛋白与重链可变区(VH)片段结合成的Fv,能特异性地识别HBV pre-SI抗原.结论:成功地获得具有良好生物学活性的融合蛋白,可用于进一步的研究.
-
单链抗体在肿瘤治疗中的应用研究
1988年以来,抗体基因工程的研究取得了一些技术上的进展.Huston等[1]和Bird等[2]利用基因工程技术成功制备了单链抗体(single chain Fv ScFv或single chain antigen bindingprotein SCA),scFv是由免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段连接肽连接而成的重组蛋白,它是具有完全抗原结合位点的小抗体片段,大小为完整抗体的六分之一,分子量约为27KD.它具有许多优点:①分子小,免疫原性低,用于人体不易产生抗异种蛋白反应;②容易进入实体瘤周围的微循环;③血循环和全身廓清快,半衰期短,肾脏蓄积很小;④无Fc段,不易与具有Fc受体的非靶细胞结合,成像清晰;⑤易于基因操作和基因工程大量生产.此外单链抗体还可以与毒素、前体药物转化酶、放射性同位素、细胞因子等效应分子构建成多种双功能抗体分子,单链抗体也是构建双特异抗体的理想元件,用于肿瘤的临床诊断和治疗显示出了具大的潜力.