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绿原酸完全抗原的制备及鉴定
目的 制备绿原酸完全抗原,对完全抗原进行鉴定.方法 通过碳二亚胺(EDC)法把绿原酸与载体蛋白牛血清白蛋白和卵蛋白进行偶联制备,采用紫外扫描法对合成抗原进行了鉴定;用绿原酸完全抗原免疫豚鼠,设生理盐水对照组,绿原酸标准溶液对照组.间接酶联免疫法测定免疫豚鼠抗血清的效价.结果 完全抗原偶联成功,测定偶联比20,符合动物免疫的要求.ELISA法检测豚鼠抗血清效价,完全抗原组豚鼠抗血清稀释1∶128为阳性,大于空白复孔A值2倍.结论 成功制备绿原酸完全抗原.
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绿原酸人工抗原的合成及反应条件的优化
目的:制备中药成分绿原酸(CGA)的人工抗原,并优化合成反应条件,为中药注射剂不良反应的深入研究提供物质基础和技术基础.方法:采用碳二亚胺法,将CGA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原(CGA-BSA);正交法优化合成反应条件;经基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和紫外吸收光谱(UV)测定其偶联率(Mr).结果:MALDI-TOF-MS和UV测得合成的人工抗原CGA-BSA的Mr分别为20和18.8;反应佳条件为NHS,EDC,BSA与CGA的比率为4:1,1:1,1:200,pH为9.结论:成功合成了绿原酸全抗原(CGA-BSA),为进一步深入研究绿原酸的过敏原性及其相关性研究提供物质基础.
关键词： 绿原酸 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 完全抗原 -
芦丁完全抗原的合成鉴定及免疫原性分析
目的:合成中药活性成分芦丁的完全抗原并进行鉴定及免疫原性研究,同时建立快速检测芦丁的酶联免疫吸附(ELISA)分析方法.方法:采用高碘酸钠法制备芦丁完全抗原,用紫外扫描和SDS-PAGE的方法对其进行鉴定,以此抗原免疫健康雄性新西兰大白兔,制备抗血清.结果:紫外分析表明合成的完全抗原偶联比为13∶1,SDS-PAGE显示完全抗原与牛血清蛋白或卵清蛋白相比后移了.免疫新西兰大白兔得到特异针对芦丁的抗血清,芦丁抗体的效价为1∶4 000.经方法学考察,灵敏度IC50为5.37 mg ·L-1,低检测限为1 mg·L-1,平均添加回收率为102％,批内和批间RSD均小于10％,抗体与其他类似物的交叉反应率小于1％.结论:成功的合成了具有较好的免疫原性的芦丁完全抗原,并成功的建立了快速检测芦丁的酶联免疫吸附(ELISA)方法.
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甲醛诱导获得性过敏体质致哮喘发病机理研究
甲醛可介导多种毒性效应,特别是甲醛诱导型哮喘.传统观点认为,甲醛是一种半抗原,可以与血浆清蛋白或皮肤角蛋白形成完全抗原,通过Ⅰ型超敏反应诱发哮喘.但是有关的研究指出,在甲醛所致哮喘的病例中,只有部分的个体可以在体内检出甲醛特异性IgE(FA-IgE),多数个体体内没有发现FAIgE,提示甲醛诱导型哮喘有其不同于传统理论的发病机理.
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人甲状旁腺激素多肽抗体制备及纯化方法研究
人甲状旁腺激素(hPTH)是维持机体钙磷平衡等生命活动的重要激素, hPTH 1-84、1-34、1-37、44-68、54-84是人体中重要的免疫活性片段[1].HPTH 1-84的分子量为9 500,介于完全抗原和半抗原之间.由于抗hPTH 1-84抗体可测定任何具有免疫活性的hPTH片段, 因此具有重要应用价值.本研究用基因工程表达hPTH 1-84制成3种免疫原,分别免疫家兔后制备抗体,并对特异抗hPTH 1-84抗体和载体BSA抗体的效价进行比较.同时,分别用盐析、Q膜、蛋白A和免疫亲和层析纯化方法对抗hPTH 1-84抗体的纯度、活性和回收率进行研究.
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氯胺酮单克隆抗体的研制及其免疫学特性研究
目的:制备氯胺酮单克隆抗体(McAb),并对其特性进行分析.方法:采用丁二酸酐偶联法将氯胺酮(Ket)与BSA和OVA偶联合成人工完全抗原Ket-BSA和Ket-OVA,选择Ket-BSA免疫BALB/C小鼠,用Ket-OVA作包被抗原进行间接ELISA和竞争ELISA检测免疫小鼠血清效价,从而选择小鼠脾细胞为融合备用.应用杂交瘤技术制备氯胺酮单克隆抗体(Ket-McAb),并对其效价、亲和性和特异性等进行鉴定.结果:成功地合成了氯胺酮人工完全抗原,用该抗原免疫小鼠产生高效价抗Ket抗体(1:12800),并能被Ket单体抑制;建立了一株分泌稳定的单克隆抗体细胞株,细胞培养上清液的抗体效价为1:6400,腹水抗体效价为2×10<'6>;同种型为IgG2a,50%抑制浓度为80ng/ml,经鉴定能与Ket特异性结合与其它毒品类药物如冰毒、摇头丸,大麻、吗啡等无交叉反应.结论:抗氯胺酮McAb是一种特异的探针,对吸毒和戒毒病例的检测具有潜在的应用价值.
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毒品胶体金免疫层析检测板在缉毒侦查中的应用
毒品胶体金免疫层析检测板即"尿检板",由于具有操作简便、经济实用、快速准确等优点,一直是公安机关检测嫌疑人是否吸毒的重要工具,在禁吸戒毒执法工作中应用广泛.其实,如果善加利用,"尿检板"在缉毒办案过程中,也可以发挥重要作用.1 "尿检板"的工作原理"尿检板"是采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术,通过单克隆抗体竞争结合原理进行检测的[1-2].即样本中的毒品与硝酸纤维素膜上的毒品完全抗原竞争结合胶体金标记的毒品单克隆抗体,通过观察检测区的色带情况判别样本中是否存在毒品.如果样本中含有毒品,毒品与胶体金标记的毒品单克隆抗体结合,检测区不会出现色带;如果样本中不含毒品或毒品含量低于"尿检板"的检测阈值,毒品完全抗原与胶体金标记的毒品单克隆抗体结合,在检测区呈现红色色带.而不论样本中是否含有毒品,对照区都会出现红色色带,否则说明测试结果无效.
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百草枯完全抗原及多克隆抗体的制备
目的 改造百草枯(Paraquat PQ)半抗原,制备百草枯完全抗原及多克隆抗体,为建立酶联免疫吸附方法及其在食品安全快速检测中的应用奠定基础.方法 改造半抗原PQ-hap,混合酸酐法合成免疫原(PQ-BSA)和包被原(PQ-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA对其进行效价、灵敏度和特异性检测.结果 成功合成百草枯免疫原和包被原,6次免疫后2只家兔血清的效价分别达到1∶40 000和1∶160 000,抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为281.6 ng/ml和98.4 ng/ml,与百草枯类似物没有明显交叉反应.结论 合成的百草枯完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗百草枯多克隆抗体具有较好的灵敏度和特异性.
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喹乙醇代谢物完全抗原的合成与多克隆抗体的制备
目的 制备喹乙醇代谢物3-甲基-喹啉-2-羟酸的多克隆抗体,为食品安全快速检测喹乙醇代谢物提供支持.方法 用乙酰甲喹制备喹乙醇代谢物3-甲基-喹啉-2-羧酸半抗原,再经以活化酯法制备喹乙醇代谢物-OVA(OLA-OVA)与喹乙醇代谢物-BSA(OLA-BSA),用质谱分析鉴定完全抗原;采用长程免疫法免疫小鼠,用间接ELISA法检测抗体血清效价,用竞争ELISA法检测所得抗体特异性与灵敏度.结果 成功制备了喹乙醇代谢物-OVA与喹乙醇代谢物-BSA完全抗原,长效免疫小鼠并获得血清抗体效价均达到1:104以上.结论 经过长程免疫法可以得到高效价抗体血清,为食品安全快速检测提供技术支撑.
关键词： 喹乙醇代谢物 3-甲基-喹啉-2-羟酸 完全抗原 多克隆抗体 -
对硫磷完全抗原的合成鉴定及其免疫效果
目的 合成免疫原性较强的人工抗原,为制备对硫磷单克隆抗体和建立免疫快速检测食品中农药残留方法奠定基础.方法 选用2种方法合成羧基化对硫磷:一种以对硫磷为原料,改造硝基一端;另一种以三氯硫磷为原料,改造磷硫键一端.EDC法偶联牛血清白蛋白(BSA)制备免疫原(PA-1-BSA和PA-2-BSA),并分别免疫Balb/c小鼠.间接ELISA测定抗血清效价,竞争ELISA测定检测灵敏度,比较免疫效果.结果 SDS-PAGE电泳表明,2种完全抗原均合成成功；质谱法鉴定免疫原的偶联比分别为:N(PA-1/BSA)=7.2,N(PA-2/BSA)=15.4；小鼠抗血清经间接ELISA检测表明,PA-2-BSA组效价明显高于PA-1-BSA组；间接竞争ELISA检测表明,PA-2-BSA组半数抑制浓度(IC50)为1μg/ml,明显优于PA-1-BSA组(IC50为＞100 μg/ml).结论 成功合成2种对硫磷完全抗原,免疫Balb/c小鼠PA-2-BSA组免疫应答效果好于PA-1-BSA组、
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破伤风抗毒素皮试研究进展
破伤风抗毒素(简称TAT)是一种异性蛋白质,属外源性完全抗原.当人体注射破伤风抗毒素血清时,一方面向人体提供血清中的抗体,另一方面它又属于抗原性的大分子异种物质,易导致机体的过敏反应.由于传统的皮试法阳性率较高,脱敏注射方法既繁琐又耗时.因此,近年来护理界同行对TAT的浓度、剂量、皮试部位、脱敏次数及能否免作皮试等问题进行了临床研究,现将TAT皮试的研究进展综述如下.
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Wistar大鼠EAE模型的制备
目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达,探讨山西医科大学动物室的Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型.方法:采用免疫诱导方法制备EAE模型并HE染色,同时用原位杂交法检测EAE大鼠MCP-1的表达.结果:免疫后12d～17d,发病鼠出现EAE临床症状,HE染色,光镜下可见血管周炎性浸润,MCP-1的表达明显增加.结论:山西医科大学Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的.
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BrdU抗原及抗体的制备
溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)可替代DNA前体胸腺嘧啶核苷竞争掺入S期细胞DNA,取代 3H-TdR的应用,避免放射性污染,且检测方便省时.核苷属小分子半抗原,不能刺激机体产生抗体,需与大分子载体连接成完全抗原才引起宿主有效的免疫应答.本文将尿嘧啶核苷与卵清蛋白(ovalbumin,Ova)或牛血清白蛋白(burine serum albumin,BSA)共价结合,并证实偶联物具有免疫原性.
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氯霉素完全抗原的制备及鉴定
目的 制备氯霉素(Chloramphenicol,CAP)完全抗原,并对其进行鉴定.方法 采用重氮化法制备免疫抗原(CAP-BSA)和检测抗原(CAP-OVA),琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE鉴定其偶联后效果；紫外扫描法分析CAP与BSA和OVA的分子结合比；BCA法测定偶联蛋白的浓度；将CAP-BSA经小鼠腹腔免疫,采血分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价.结果 琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析显示,两种完全抗原偶联成功；CAP与BSA和OVA的分子结合比分别为28∶1和21∶1,蛋白浓度分别为3.16和2.28 mg/ml；CAP-BSA能够刺激小鼠产生高效价的抗CAP抗体.结论 成功制备了CAP完全抗原,为下一步获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体奠定了基础.
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磺胺二甲嘧啶完全抗原的制备及鉴定
目的 制备磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine,SM2)完全抗原,并进行鉴定.方法 采用重氮化偶联法制备SM2免疫抗原(SM2BSA)和检测抗原(SM2OVA),定性和定量分析偶联后的完全抗原.并制备SM2单抗.结果 经1%琼脂糖凝胶电泳和10%SDS-PAGE分析表明,完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA偶联成功;SM2与载体蛋白BSA和OVA的分子结合比分别为23:1和17:1;SM2-BSA和SM2-OVA的蛋白浓度分别为3.24和2.29 mg/ml;完全抗原SM2-BSA能刺激小鼠产生高效、特异的抗SM2抗体;SM2单抗与OVA和BSA无交叉反应.结论 已成功制备了完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA,为下一步建立灵敏度更高、特异性更强、操作更简便的免疫学检测方法奠定了基础.
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全氟辛酸特异性单域重链抗体的制备
[目的]基于抗原抗体特异性结合的原理,制备一种针对全氟辛酸(PFOA)小分子的特异性抗体,以用于PFOA的现场快速检测. [方法]采用碳二亚胺法将PFOA与牛血清白蛋白(BSA)偶联,将此完全抗原作为包被抗原,用重链抗体噬菌体文库进行筛选获得阳性克隆,聚合酶链反应扩增重链抗体片段并与含有人抗体Fc段的质粒连接,采用原核表达系统进行抗体蛋白表达和纯化,间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)进行验证. [结果]成功合成完全抗原PFOA-BSA,偶联比为8.采用重链抗体库进行4轮筛选,获得7株阳性克隆,经进一步的原核表达系统进行蛋白表达和纯化,得到5种与预期大小相符的、含有人抗体Fc段的抗体蛋白.经间接竞争ELISA方法初步检测验证,获得1个可与PFOA特异结合的单域重链抗体. [结论]终获得针对PFOA的特异性抗体,有望用于建立快速检测不同介质中PFOA的免疫学检测方法.
关键词： 全氟辛酸 完全抗原 重链抗体文库 间接竞争酶联免疫吸附试验 -
磺胺二甲基嘧啶完全抗原的合成和鉴定
比较小分子药物磺胺二甲基嘧啶(SM2)用两种不同方法合成完全抗原的免疫效果,通过比较这两种不同方法合成的完全抗原的免疫效果,为进一步的SM2单克隆抗体的制备和SM2残留检测奠定基础.分别采用重氮化(直接连接)、戊二醛法(引入间隔臂)将药物磺胺二甲基嘧啶(SM2)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定完全抗原合成,确定其偶联比,然后用合成的完全抗原免疫小鼠,免疫周期结束后眼眶取血,用酶联免疫分析法测定血清效价,比较两种不同方法合成的完全抗原的免疫效果.通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定,重氮化法和戊二醛法都成功合成了磺胺二甲基嘧啶(SM2-BSA)完全抗原,偶联比分别为13.6∶1和12.6∶1.通过小鼠血清的酶联免疫分析法检测,进一步证明实验成功合成了SM2完全抗原,并能有效的刺激机体产生良好的免疫反应.
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鲨鱼肝再生因子(SHRF)半抗原偶联与多抗制备
探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备.分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将制备的完全抗原免疫新西兰白兔.实验表明碳化二亚胺法具有反应条件温和,偶联效率高等优点,并得到了高效价的兔抗体,为SHRF的ELISA方法的建立奠定了基础.
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微囊藻毒素LR的定量检测研究
目的 制备MC-LR的单克隆抗体,初步建立微囊藻毒素LR定量检测的竞争ELISA方法.方法 从云南滇池中收集蓝藻,提取MC-LR精制样品,与牛血清白蛋白偶联,制备成MC-LR-BSA完全抗原,免疫BALB/c小鼠将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备抗MC-LR特异性单克隆抗体.应用制备的单克隆抗体对不同稀释浓度的MC-LR样品进行竞争ELISA定量检测.结果 制备了3株抗MC-LR的单克隆抗体,MC-LR样品的竞争ELISA定量检测显示浓度从高到低的相应A值呈现明显的递增梯度趋势.结论 制备的MC-LR单克隆抗体能够用于MC-LR的定量检测.
关键词： 微囊藻毒素 完全抗原 单克隆抗体 竞争酶联免疫吸附试验 -
阿莫西林完全抗原的合成与鉴定
目的:制备阿莫西林完全抗原并鉴定.方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原阿莫西林与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用混合酸酐法将阿莫西林与卵清蛋白偶联制备ELISA包被原.采用紫外光谱分析和动物免疫试验鉴定偶联产物.结果与结论:紫外光谱分析和动物免疫试验证实阿莫西林抗原合成成功,该抗原可用于阿莫西林ELISA检测试剂盒的研制.
