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用于水产品中硝基呋喃类代谢物检测的胶体金快速检测试剂板的研制
目的 本文采用胶体金免疫层析技术,研制了一种水产品中硝基呋喃代谢物四合一免疫胶体金快速检测试剂板.方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和微孔中.包被后的NC膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条.结果 经试验,该四合一试剂板对水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD)的检出限分别为1.0、1.0、1.0、2.0μg/kg.结论 试剂板具有快速、准确、灵敏度高的特点,适用于大批量水产样品中硝基呋喃代谢物的检测.
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胶体金免疫层析法检测广州管圆线虫感染小鼠血清特异性抗体的研究
目的 建立一种无需仪器、操作简单,具较好敏感性和特异性的适用于基层快速检测广州管圆线虫感染的胶体金免疫层析方法. 方法 将重组广州管圆线虫五期幼虫抗原Ac11蛋白为检测点膜抗原,羊抗兔IgG喷涂在质控线,与胶体金标记兔抗小鼠单抗组装成广州管圆线虫胶体金免疫层析法检测试剂条,用于检测阳性小鼠血清特异性抗体.试验设阴性小鼠血清为对照. 结果 确定试剂条的检测条件为:检测线重组抗原Ac11用量为4 mg/ml(喷量1μl/cm),质控线羊抗兔IgG用量为1.87 mg/ml(喷量1μl/crn),胶体金标记兔抗小鼠单抗采用吸光度(A)值为5的喷涂量(喷量2 μl/cm).用该方法检测小鼠血清抗广州管线虫抗体,其敏感性为100％(10/10),特异性为100％(10/10). 结论 胶体金免疫层析法检测广州管圆线虫抗体具有较好的敏感性和特异性,经进一步完善后有望用于广州管圆线虫病的临床快速筛查和流行病学调查.
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胶体金免疫层析快速诊断法在羊鼠疫疫情处理中的应用
目的 评价胶体金免疫层析快速诊断试剂盒在动物鼠疫疫情处理中的应用价值.方法 采集病羊血清,用胶体金免疫层析法(GICA)、检测鼠疫FI抗体,并与间接血凝法(IHA)检测结果比较.死亡羊尸检取脏器作细菌分离和培养,并做GICA和反应间接血凝(RIHA),检测FI抗原.结果 检测藏系绵羊、西藏山羊血清1 073份,GICA与IHA法结果一致,抗体阳性率均为6.15%;检测脏器标本的阳性率分别为35.71%和50.00%,差异有显著性(P＜0.05).结论 GICA方法简便,诊断快速,适合现场应用.
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鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒的应用研究
目的 对鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒进行现场应用评价.方法 结合鼠疫常规监测工作,对现场采集的标本同时进行常规鼠疫检验和ELISA检测,然后进行统计分析.结果 鼠疫菌分离培养和ELISA检测人和动物脏器标本1798份,ELISA与鼠疫菌分离培养比较检出率较高(7.01%),符合率可达98.23%,鼠疫抗原ELISA检测试剂盒敏感性好、时间短.ELISA抗体检测试剂盒与间接血凝试验检测人和动物血清1份,结果无明显差异,但符合率低,ELISA加胶体金标记层析检测鼠疫F1抗体阳性可提高符合率(91.56%).结论 鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒可以用于鼠疫的早期快速诊断.
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3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用
2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本.为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法(RGICA)、鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性.在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,上述任何单独的一项检验对该样本的鼠疫诊断都有一定的局限性.因此,我们采用3种方法进行联合检测,获得了可靠结果.
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曲马多完全抗原的合成及其在胶体金上的应用
目的:合成曲马多人工抗原并应用到胶体金试剂条上.方法:用混合酸酐法按4种投料比把曲马多小分子偶联到BSA蛋白上,利用紫外光谱扫描法及蛋白质电泳法鉴定是否连接成功,并组装成胶体金试剂条检测其活性.结果:连接成功,每个BSA蛋白连接上曲马多分子数为4-14个.胶体金测试结果显示,所合成抗原能与曲马多抗体特异结合并具有较好的敏感性.结论:选用投料比为20:1的曲马多完全抗原更适用于胶体金试剂条上.
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毒品胶体金免疫层析检测板在缉毒侦查中的应用
毒品胶体金免疫层析检测板即"尿检板",由于具有操作简便、经济实用、快速准确等优点,一直是公安机关检测嫌疑人是否吸毒的重要工具,在禁吸戒毒执法工作中应用广泛.其实,如果善加利用,"尿检板"在缉毒办案过程中,也可以发挥重要作用.1 "尿检板"的工作原理"尿检板"是采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术,通过单克隆抗体竞争结合原理进行检测的[1-2].即样本中的毒品与硝酸纤维素膜上的毒品完全抗原竞争结合胶体金标记的毒品单克隆抗体,通过观察检测区的色带情况判别样本中是否存在毒品.如果样本中含有毒品,毒品与胶体金标记的毒品单克隆抗体结合,检测区不会出现色带;如果样本中不含毒品或毒品含量低于"尿检板"的检测阈值,毒品完全抗原与胶体金标记的毒品单克隆抗体结合,在检测区呈现红色色带.而不论样本中是否含有毒品,对照区都会出现红色色带,否则说明测试结果无效.
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胶体金法测定降钙素原试剂盒的研究
目的 利用胶体金技术,开发新的半定量检测人血清降钙素原(PCT)试剂盒,为临床提供一种快速、简便、准确的PCT检测方法.方法 依据双抗体夹心法原理,结合金标免疫层析试验,建立降钙素原的半定量检测方法.校准品梯度稀释,检测吸光度,建立标准曲线,并从灵敏度、精密度、特异性和稳定性等方面作出全面的方法学评价.结果 本方法的低检测限为不低于0.1 ng/ml,线性良好,线性范围为0.1～ 30.0 ng/ml;批内变异系数(CV) 13.2％,批间CV为17.76％;与血清中常见的干扰物质特异性良好,重复性稳定.结论 本研究成功建立胶体金技术半定量检测人血清降钙素原(PCT)含量检测方法,具有灵敏、简便、准确等特点,实现了PCT检测的自动化和快速化,所受干扰因素少,能完全满足临床检测需求,具有良好的应用前景.
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新兵嗜肺军团菌抗原快速检测的临床研究#
目的：：应用快速检测方法对出现呼吸道症状的新兵行嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)抗原检测,对检测结果进行分析。方法：收集北京周边5个营区新兵中出现咳嗽、咳痰、咽痛、鼻塞、流涕等呼吸道症状的309人中段尿液标本,应用胶体金免疫层析法(GICA)检测中段尿LP抗原,分析检测结果。结果：LP抗原阳性率9.6%；南北方籍新兵LP抗原阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)；E区LP阳性检出率高(16.5%),与C区相比差异有统计学意义,其他各营区间阳性检出率差异均无统计学意义；发热与不发热的新兵LP抗原阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论：LP抗原检定卡简便、快速,适合基层单位推广。LP感染在出现呼吸道症状的新兵中不容小视,应重视对LP的临床诊断。
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两种检测乙肝表面抗原方法的比较
目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点,为实验室提供快速、准确的检验方法.方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗原,并将资料进行整理、分析.结果胶体金免疫层析法检出阳性250份,阳性率为54.82%;ELISA法检出阳性275份,阳性率为60.31%.两法检测结果的总符合率为94.52%.以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性,敏感性为90.91%,特异性为100%.结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法(ELISA)差,认为检测HBsAg仍然以ELISA法为主.
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鼠疫胶体金免疫层析试纸条在新疆、内蒙的现场应用评价
目的:评价检测鼠疫抗原及抗体胶体金免疫层析试纸条(GICA及RGICA)在新疆和内蒙现场材料的检测效果.方法:1.分别对1404份血清标本(新疆1304份,内蒙100份)采用GICA、IHA及ELISA进行检测;2.分别对334份鼠脏器材料(新疆224份,内蒙100份)采用RGICA、RIHA及F1-ELISA进行检测.结果:1.在1304份新疆血清标本的检测中,GICA、IHA及ELISA三种方法的符合率高度一致,而GICA的敏感性比IHA与ELISA分别高32%和3.1%;在100份内蒙血清标本的检测中,GICA与IHA的检测结果完全一致.2.在224份新疆鼠类脏器标本检测中,RGICA与RIHA、F1-ELISA及检菌三种方法的符合率高度一致,而RGICA的敏感性比RIHA与F1-ELISA分别高22.2%和10%;在100份内蒙鼠类脏器标本的检测中,RGICA与检菌结果完全一致,而与RIHA高度一致,RGICA比RIHA的敏感性高13%.结论:研制成功的检测鼠疫的GICA及RGICA在现场材料的检测中特异性强、灵敏度高、简便快速,有较大的推广应用价值.
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两种方法检测癌胚抗原对比分析
目的:比较化学发光免疫分析法与胶体金免疫层析两种方法的检测性能.方法:用化学发光定量与胶体金免疫层析两种方法对127例血清标本的癌胚抗原进行检测,然后对结果进行比较分析.结果:两种方法检测结果差异性显著(P＜0.05),其相关性良好,但在线性实验中,化学发光免疫分析法优于胶体金免疫层析法.结论:化学发光免疫分析法检测患者结果稳定、可靠、灵敏度高、精密度好.
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应用于胶体金免疫层析的MDMA单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备高特异性的抗3-4亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)单克隆抗体,用于建立快速检测MDMA的胶体金免疫层析方法.方法:用MDMA人工抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经亚克隆筛选得到稳定分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株.制备腹水,辛酸-饱和硫酸铵法纯化得到抗MDMA单克隆抗体(mAb),并用胶体金免疫层析筛选出适用的抗MDMA单克隆抗体(mAb),并对其进行特异性、纯度、亚类的鉴定分析.结果:经多次亚克隆后筛选得到4C10、4D10、7D11、8D44株分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株.其中细胞株8D4分泌的抗体适用于胶体金免疫层析.结论:成功筛选出能稳定分泌mAb的细胞株,为MDMA快速检测试剂的研制提供了关键材料.
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胶体金免疫层析法视黄醇结合蛋白检测试剂对肾小管功能损伤的诊断价值评价
目的:对胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂诊断肾小管损伤的价值进行评价.方法:选择上海柏纳生物技术有限公司生产的视黄醇结合蛋白检测试剂盒(胶体金免疫层析法)与上海太阳生物技术有限公司生产的RBP含量测定试剂盒(酶联免疫法)进行对比试验,分别对临床选取的病例组和对照组的尿液样本进行检测.参考临床单位诊断标准,酶联免疫法结果浓度≥ 300ng/mL为阳性,＜300ng/mL为阴性；胶体金免疫层析法检测结果检测线显色为阳性,不显色为阴性.对两组检验结果进行Kappa一致性检验,分析两种检测方法诊断结果的一致性,同时以临床通用诊断方法为参考,计算胶体金免疫层析法诊断肾小管功能损伤的灵敏度和特异度.结果:两种检测方法的诊断结果一致性良好(市一医院:K=0.9070,95％CI:0.8277～0.9863,P＜0.01;市六医院:K=0.9391,95％CI:0.8714～1.000,P＜0.01).胶体金方法诊断肾小管损伤的灵敏度和特异度,市一医院:灵敏度=100％,精确95％CI为:92.45％～100.00％;特异度=91.80％,精确95％CI为:81.90％～97.28％;市六医院:灵敏度=100％,精确95％CI为:91.40％～100.00％;特异度=95.00％,精确95％CI为:86.08％～98.96％.结论:胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白检测试剂与已批准上市的试剂等效,对肾小管功能损伤的诊断具有重大应用价值.
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胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价
目的 研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价.方法 应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体.结果 190份动物血清IHA检测结果均为阴性;GICA检测出1份阳性血清,滴度1∶10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1∶4(++)2份和1∶16(+)1份.3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA(GICA与IHA:t=3.257,P＜0.05;GICA与ELISA:t=3.625,P＜0.01;IHA与ELISA:t=1.437,P＞0.05).201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99.50%,与DAgS-ELISA总符合率99.00%,3种方法检测结果差异无统计学意义(χ2=0.5,P＞0.05).结论 GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术.
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胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫应用研究
目的 观察胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫的效果.方法 用胶体金免疫层析抗体(抗原)测试条与鼠疫间接血凝试验(IHA)/反向间接血凝试验(RIHA)两种方法平行检测鼠疫的抗体(或抗原).结果 通过对实验感染动物、青海鼠疫疫源地内鼠疫患者(尸体)及染疫动物等396份样品的检测,两种方法符合率为100%.结论 胶体金免疫层析法操作简单、方便、快速,适用于现场应用和鼠疫的快速诊断.
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胶体金免疫层析技术的研究现状与前景
本文基于胶体金免疫层析技术在现阶段的发展及其在病原微生物、药物滥用、动物源性食品安全与质量控制等方面的研究现状作简要介绍，并对其作了展望。
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H-FABP和心肌肌钙蛋白Ⅰ二联试纸条的制备
目的：制备能够同时检测心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）和心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）的二联试纸条，用于急性心肌梗死的早期和中期辅助诊断。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，并对其相关因素进行考察。将胶体金分别与H-FABP和cTnⅠ的单克隆抗体结合，优化胶体金与单克隆抗体结合的影响因素；将胶体金结合物喷于玻璃纤维膜上制成金标垫，再分别将另一亚型cTnⅠ和H-FABP单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线T1、T2和质控线C，后与吸水垫、经预处理的样品垫和底板组装成二联试纸条。结果：制备的二联试纸条检测H-FABP的灵敏度为10 ng／mL，检测cTnⅠ的灵敏度为3．0 ng／mL，10 min内可判定结果，层析速度均匀，没有背景颜色，两种蛋白之间无交叉反应，二联试纸条稳定性好。结论：成功制备灵敏度高、层析速度均匀和稳定性好的H-FABP／cTnⅠ二联胶体金免疫层析试纸条。
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石杉碱甲免疫层析试纸条的研制
目的 利用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测石杉碱甲的方法.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗石杉碱甲单克隆抗体并于4℃保存.石杉碱甲和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水纸组装于PVC底板上,切割成胶体金试纸条.结果 石杉碱甲快速检测试纸条的灵敏度为15 μg·mL-1,检测时间为5min,特异性高,批内和批间重复性良好.结论 该法操作简单,使用方便,可用于现场快速检测石杉碱甲.
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胶体金免疫层析法诊断鼠疫的特异性试验
目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫快速诊断的特异性.方法采用胶体金免疫层析测试条和鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)平行检测.结果检测鼠疫菌F1抗原具有很强的特异性,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森等其他细菌发生交叉免疫反应.结论该方法简便、快速、敏感,适合现场鼠疫监测.
