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鼠疫噬菌体基因组研究进展
随着不同来源鼠疫噬菌体基因组测序的完成,为从基因水平研究鼠疫噬菌体提供了机遇.本文从全基因组的水平描述了鼠疫噬菌体的基本特征,对已测序的鼠疫噬菌体基因组进行分析比较,并探讨其遗传进化关系,以及从基因预测和蛋白注释方面描述鼠疫噬菌体基因组的功能,为进一步研究鼠疫噬菌体提供数据.
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3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用
2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本.为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法(RGICA)、鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性.在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,上述任何单独的一项检验对该样本的鼠疫诊断都有一定的局限性.因此,我们采用3种方法进行联合检测,获得了可靠结果.
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鼠疫研究与控制措施
从自然进化和基因突变人手,阐述鼠疫菌的基因分型和致病性,认为这种突变正好也是各疫源地菌株实现"本土化",形成不同类型鼠疫自然疫源地的过程.在动物间鼠疫监测中,以生境及其鼠迹、鼠洞探查和每月地毯式的搜检自毙鼠为基本出发点,另加一定数量的鼠类及指示动物的血清学监测模式;鼠疫菌与其特定区域的土壤动物、其他微生物、植物群落所具有的不同时空活动特点和生物学特性,以及共同组成的复杂营养食物链网络和在各自能流、物流、基因传递及其协同进化中的角色等,都将是鼠疫自然疫源地空间结构研究的所属范畴.建立以鼠疫噬菌体为病原学和血清学的协同诊断技术.
关键词： 基因突变 鼠疫噬菌体 鼠疫监测 鼠疫自然疫源地空间结构 -
鼠疫噬菌体研究概述
鼠疫噬菌体是一种特异性很强的鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,鼠疫菌)的细菌病毒,一直被用来进行鼠疫病原体的鉴定.鼠疫噬菌体的早期研究主要以如何在自然界分离、生物学特性、诊断和治疗鼠疫,近年来,随着微生物基因组和蛋白质组学技术的发展,揭示了鼠疫噬菌体在鼠疫菌进化过程中所发生的作用.现就鼠疫噬菌体的研究进展,尤其是基因组的结构、与宿主菌在致病和免疫相关研究做一些介绍,为研发新型分子生物学技术和鼠疫治疗药物提供帮助.
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自四川省石渠县分离的1株疑似鼠疫菌的复活报告
目的 利用动物试验和抗鼠疫噬菌体血清对1株已半干枯、污染严重且携带鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌株进行复活和分离.方法 首先对该疑似鼠疫菌株进行动物传代,再经抗鼠疫噬菌体血清处理的赫氏琼脂培养基生长,结果使将要死去的菌株得到重新复活.结果 对已半干枯、污染严重且携带鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌株进行了复活,分离出正常的鼠疫菌,并被鼠疫噬菌体所裂解.结论 通过动物试验和抗鼠疫噬菌体血清使将要死去的菌株得到重新复活,类似菌株在自然界一定条件下一旦返祖成典型鼠疫菌,可能对再次发生动物鼠疫流行具有重要的意义.
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从土壤样本中分离鼠疫噬菌体方法的建立
目的 建立由土壤环境中分离鼠疫噬菌体的方法.方法 采用点滴法和双层琼脂平皿法分离模拟土壤中的鼠疫噬菌体.结果 分别加入5、50、500、1 000μl鼠疫噬菌体的模拟土壤样本,通过点滴法分离噬菌体结果显示,过滤液在稀释前均出现明显的噬菌斑,高压灭菌的模拟土壤样本中鼠疫噬菌体的小检出量为30 PFU噬菌体颗粒;通过双层琼脂平皿法检测模拟土样中鼠疫噬菌体的结果显示,4个模拟土壤样本在双层琼脂平皿上均出现明显的噬菌斑,且不同浓度模拟土壤样本过滤前后鼠疫噬菌体的效价都会降低两个数量级以上.结论 采集的环境样本中野生型鼠疫噬菌体含量很少时,可通过富集提高鼠疫噬菌体的分离率.双层琼脂平板法检测鼠疫噬菌体,既能检测出噬菌体,又能较准确地测定其效价.
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鹤庆新发野鼠鼠疫疫源地中鼠疫噬菌体的分离及其裂解谱测定
目的 查明鹤庆新发野鼠鼠疫疫源地内是否存在鼠疫噬菌体,并对所离分鼠疫噬菌体进行形态鉴定及噬菌谱分析.方法 以鹤庆县马厂村为核心,选择5 km范围内的自然村为采样点,采用鼠铗法进行捕鼠,实验室中取鼠盲肠置入改良PBS中,采用双层平皿对样本进行筛选、纯化得到噬菌体,观察噬菌斑形态,电镜检查噬菌体形态,并在22℃、24℃、28℃及37℃对21株鼠疫菌与115株非鼠疫菌进行裂解特性分析.结果 采集的354份标本,分离到2株鼠疫噬菌体;2株噬菌体在高于24℃温度下可裂解鼠疫菌,低于24℃不能裂解鼠疫菌,而非鼠疫菌在4个温度下均不裂解;电镜形态检测2株噬菌体均属于肌尾噬菌体.结论 鹤庆新发野鼠疫疫源地内存在着鼠疫噬菌体,且所分鼠疫噬菌体只有在高于24℃时才裂解鼠疫菌,此特性与鼠疫菌在鹤庆县的长期存在相关,且两株噬菌体存在裂解谱较窄,特异性良好,可用于备用诊断噬菌体的筛选株.
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剑川野鼠鼠疫疫源地鼠疫噬菌体的分离及其流行病学意义
目的 调查剑川野鼠鼠疫疫源地宿主动物中是否携带鼠疫噬菌体,并探讨其流行病学意义.方法 2017年1-6月采集剑川野鼠鼠疫疫源地4个曾流行过鼠疫乡镇6个自然村的鼠类标本,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,并对分离结果进行流行病学分析,同时挑取部分噬菌体进行电镜扫描.结果 共获得641份标本(齐氏姬鼠334只,大绒鼠236只,其余71只),分离到9株鼠疫噬菌体,总分离率1.40％;有4个疫点(白山母村、石龙村、新松村、大庆村)分离到了鼠疫噬菌体,另外2个点(长乐村、西门社区)未分到鼠疫噬菌体;9株鼠疫噬菌体中,8株分离自齐氏姬鼠,1株自大绒鼠;初次分离这些鼠疫噬菌体时,其噬斑在双层平板上表现为大(直径～2.0 mm)、中(～1.0 mm)及小＜0.5 mm)3种噬斑;4株有代表性噬菌体皆为肌尾病毒科噬菌体.结论 剑川野鼠鼠疫疫源地中普遍存在鼠疫噬菌体,齐氏姬鼠是主要的携带宿主,所分鼠疫噬菌体为肌尾病毒科噬菌体且具有多态性,值得进一步研究.
