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球状脂联素激活血管内皮细胞核因子-κB的表达
脂联素是由脂肪细胞合成并分泌的脂肪因子之一,因其可以调节细胞对胰岛素的敏感性,具有抗炎和抗动脉粥样硬化的作用而受到高度关注.血清脂联素以三聚体、六聚体和高分子量形式存在,球状脂联素作为脂联素的蛋白水解产物和脂联素的主要活性片段也存在于人血循环中.但是,不同形式的脂联素的生物学功能还存在争议.重组球状脂联素可以减轻胰岛素抵抗,促进骨骼肌和培养的肌细胞脂肪酸氧化.但人们注意到高分子量脂联素与总脂联素的比值而不是脂联素的绝对量决定了人和啮齿类动物对胰岛素的敏感性.2型糖尿病和冠心病患者血中高分子量脂联素选择性降低.近Yoshiyuki等发现,球状脂联素可以激活血管内皮细胞核因子-κB(NF-κB),诱导促炎症因子和粘附分子基因的表达.
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人甲状旁腺激素多肽抗体制备及纯化方法研究
人甲状旁腺激素(hPTH)是维持机体钙磷平衡等生命活动的重要激素, hPTH 1-84、1-34、1-37、44-68、54-84是人体中重要的免疫活性片段[1].HPTH 1-84的分子量为9 500,介于完全抗原和半抗原之间.由于抗hPTH 1-84抗体可测定任何具有免疫活性的hPTH片段, 因此具有重要应用价值.本研究用基因工程表达hPTH 1-84制成3种免疫原,分别免疫家兔后制备抗体,并对特异抗hPTH 1-84抗体和载体BSA抗体的效价进行比较.同时,分别用盐析、Q膜、蛋白A和免疫亲和层析纯化方法对抗hPTH 1-84抗体的纯度、活性和回收率进行研究.
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β淀粉样蛋白25-35诱导皮质神经元tau蛋白过度磷酸化
目前阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)研究仍缺乏理想的动物模型,细胞模型通过复制AD的某些分子生化改变,可用于研究AD的发病机制和筛选治疗药物.脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的大量沉积和tau蛋白过度磷酸化是AD的两大主要分子生化改变.淀粉样瀑布学说认为Aβ可直接诱导神经元tau蛋白过度磷酸化.我们于2002年6月至2004年2月采用Aβ的生物活性片段Aβ25-35作用于胎鼠脑皮质神经元,观察Aβ25-35是否也能诱导tau蛋白过度磷酸化,并探讨其作用的可能机制.
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热休克蛋白对类风湿关节炎患者T辅助细胞的作用及意义
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病机制目前尚不十分清楚.研究认为本病为多种因素诱发机体的自身免疫反应而致病,其中,感染因素在RA的发病,尤其是触发疾病方面,可能起着相当大的作用.RA患者存在对某些微生物的高免疫反应现象,提示部分微生物可能与RA的发病有关[1].近年来,国内外研究揭示人的Th1细胞识别软骨的Ⅱ、Ⅸ、Ⅺ型胶原以及其他的软骨和软骨细胞的抗原成分是RA发病机制的重要因素.此外,一些分枝杆菌抗原如结核杆菌65 000的热休克蛋白(HSP65)已被证实在佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)的发病中起重要作用,其中180~188位氨基酸组成的9肽(HSP65-P180-188)是HSP65的活性片段[2].分枝杆菌HSP与人软骨蛋白多糖复合物间的分子模拟亦可能诱发了RA.为进一步研究HSP怎样参与人类RA发病过程,HSP及HSP65-P180-188对Th亚群有何影响,本实验采用酶联免疫吸附法(ELISA)研究热灭活的卡介苗(包含完整的HSP65)和AA的活性片段HSP65-P180-188对15例RA患者外周血及关节滑液中Th亚群分化的影响.
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人甲状旁腺素活性片段前体物Pro-pro-hPTH(1-34)的制备及活性研究
目的 制备出具有生物活性的人甲状旁腺素活性片段类似物,并对其活性进行考察.方法 采用基因工程方法:大肠杆菌BL-21为宿主菌,pET-28a为表达载体,天门冬酰胺酶Ⅱ切除信号肽的C末端片段为融合伙伴,在融合伙伴和目的肽结合处引入-Asp-Pro-酸敏感位点及二肽酶Ⅳ识别的N端Pro-Pro-位点,之后经诱导表达,酸水解使融合伙伴和目的肽分离.结果 成功构建了hPTH(1-34)的融合表达体系,它能高效表达含hPTH(1-34)的融合蛋白,经纯化,得到多肽纯品,经鉴定,该多肽的分子量、氨基酸组成均与设计的分子相符,工程菌中用于编码该多肽的DNA片段其测序结果也与原设计相符,是表达该多肽的正确模板.该多肽在Parsons雏鸡分析及卵巢摘除大鼠模型试验中均显示显著活性.结论 用基因工程方法成功地制备出人甲状旁腺素活性片段类似物,该产物具有显著生物活性及潜在的药用价值.
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Notch信号通路对周围T淋巴细胞活性及分化的调控作用
Notch是一种物种间表达高度保守的跨膜蛋白受体,其在胚胎及出生后个体的生长发育中起重要的调节作用.Notch首次在果蝇中被发现,因其功能缺失后果蝇翅膀产生缺口而得名.在哺乳动物中,Notch受体有4种:Notch1-Notch4,其配体分为Deltalike与Jagged两类,前者包括Delta1、Delta3、Delta4或DLL1、DLL3、DLL4,后者包括Jagged1和Jagged2.当配体与Notch受体结合而将其激活后,Notch活性片段进入细胞核,调控Notch靶基因HES家族或HEY家族的表达.
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人颗粒溶素活性片段原核表达载体的构建与鉴定
目的 构建人颗粒溶素(GMLY)活性片段原核表达载体.方法 采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA,将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切后连接,转化E.coli BL21,挑取阳性菌落,抽提重组质粒并鉴定.IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化,SDS-PAGE分析表达和纯化结果,抑菌圈法鉴定表达产物的活性.结果 重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶素活性片段cDNA.表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量29000处出现一明显条带,与理论结果相符.抑菌试验表明,融合蛋白分子凝血酶切产物对革兰阳性的金黄色葡萄球菌ATCC25938有抑制作用.结论 已成功构建了人颗粒溶素活性片段原核表达载体,为进一步研究其抗菌、抗肿瘤作用奠定了基础.
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奥曲肽作为辅助剂在肠梗阻治疗中的临床研究
奥曲肽(Octreotide),是一个以生长抑素(Somatostatin)活性片段为骨架合成的八肽,广泛应用于消化道出血、急性胰腺炎等消化系疾病和内分泌肿瘤治疗,具有良好的疗效[1,2].我们近2年来应用奥曲肽治疗88例肠梗阻随机进行机分组研究.
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奥曲肽治疗肠梗阻的初步临床研究
奥曲肽(Octreotide)又称善宁是一个以生长抑素(Somatostatin)活性片段为骨架合成的八肽,被广泛应用于消化道出血、顽固性腹泻、急性胰腺炎等消化系疾病和内分泌肿瘤治疗并取得较好疗效.近年来国外有奥曲肽治疗肠梗阻报道[1,而国内有关报道甚少.近一年来用奥曲肽对25例肠梗阻与同期的23例肠梗阻进行随机对照研究,取得较好疗效,现报告如下:
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蛋白酪氨酸磷酸酶1B与胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系
蛋白质酪氨酸磷酸化是细胞代谢、信号传导及细胞周期调控的重要调节步骤.蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(Protein-tyrosine Phosphatase-1B,PTP1B)属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族,是在体内广泛表达的胞内蛋白质酪氨酸磷酸酶,由PTPN1基因编码,PTP1B通过对胰岛素受体激酶(insulin receptor kinase,IRK)或IRK活性片段的磷酸化酪氨酸残基去磷酸化作用对胰岛素信号传导进行负调节.PTP1B表达的改变,与人类的多种疾病相关,包括2型糖尿病和癌症等.越来越多的证据表明:PTPIB在调节胰岛素敏感性和能量代谢过程中均起着重要作用.
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肾上腺髓质素与肺动脉高压
肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)是日本宫崎大学北村等[1]在人肾上腺嗜铬细胞瘤组织中发现的一种血管活性多肽.人的ADM(hADM)由52个氨基酸组成,在第16和21胱氨酸之间有由二硫键形成的环状结构和C末端的酰胺结构,其主要活性片段是羧基端的(13~52)肽段,与降钙素基因相关肽(CGRP)以及胰淀粉样肽(amylin)有轻度同源性.
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奥曲肽在肠梗阻患者中的应用
奥曲肽:是一个以生长抑素活性片段为骨架合成的八肽,广泛应用于消化道出血、急性胰腺炎等消化系疾病和内分泌肿瘤治疗,具有良好的疗效.近4年来我们在常规治疗的基础上辅助应用奥曲肽对肠梗阻的疗效进行了观察,较传统疗法有较明显的优势,取得了较好疗效.
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苦瓜MAP30基因功能性片段的克隆和表达
背景与目的:MAP30是一种具有抗肿瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白.通过克隆和表达该蛋白的核心片段,用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系.材料与方法:设计了两对特异性的引物,通过PCR技术从苦瓜总DNA中分别扩增出两段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8N263,然后将目标基因克隆到原核表达载体pET-28a上,构建成带有C端6His-tag的融合表达载体,经测序鉴定后用CaCl2介导的化学转化法转化到E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中.利用PCR筛选出阳性克隆,经IPTG诱导工程菌表达出重组蛋白.通过Western blot对重组蛋白进行分析. 结果:含T8-S194和T8-N286基因片段的两个表达载体构建成功,它们的表达重组蛋白能与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应.结论:构建的两个含目的基因的表达载体均能在E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中表达出预期的重组蛋白,为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础.