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153胚胎干细胞实验方法及其在发育毒性研究中的意义
胚胎干细胞是一种存在于着床前早期胚胎中具有发育全能性的细胞,可在体外培养、传代并保持其全能性.在一定条件下,胚胎干细胞可发育成各种细胞,包括心肌细胞.胚胎干细胞试验就是利用胚胎干细胞在体外分化成心肌细胞的能力来检测受试物的胚胎毒性、致畸性,并对其进行评价.本文介绍了目前已建立的胚胎干细胞试验的主要实验方法及应用情况.
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小鼠囊胚内细胞团的生长行为
胚胎干细胞[1](ES细胞)是由着床前内细胞团(ICM)或原始生殖细胞经体外分化抑制培养而建立的克隆细胞系.能够广泛的分化成各种组织细胞,具有潜在的科研及应用价值.
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EB病毒潜伏膜蛋白LMP1有关信号传导通路的研究进展
EB病毒的致癌性与细胞源性基因和潜伏感染基因有关,其中潜伏膜蛋白(latent membrane protein,LMP)家族LMP1、LMP2A、LMP2B可干扰信号传导通路并诱导B细胞转化.在EB病毒潜伏感染期所表达的核蛋白和膜蛋白中,LMP1因为能够诱导啮齿动物纤维母细胞系的癌基因转化而引起人们的广泛兴趣.人们发现LMP1高表达与细胞高活性之间有密切关系,如纤维母细胞系癌基因转化、抗凋亡蛋白上调和细胞表面标志及细胞因子产生、上皮细胞分化抑制等[1].LMP1能使啮齿动物的成纤维细胞永生化,失去接触抑制功能,锚定非依赖性生长并对裸鼠产生致瘤性[2].自1995年以来,关于LMP1信号传导的研究取得了重要进展,然而LMP1是通过何种途径引起这些效应,目前尚未完全明了,其信号传导过程仍然是目前研究的重要课题.
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面部激素依赖性皮炎40例临床分析
糖皮质激素依赖性皮炎(CDD)的发生是由于长期局部外用激误认为皮质类固醇激素是止痒的万能药.素引起细胞增殖分化抑制,导致皮肤萎缩、表皮屏障功能受损、3.1.2药品选择不当皮质类固醇激素制剂分为弱效、中效、毛细血管扩张、血管内成分渗出、皮肤局部免疫功能下降造成的强效.强效制剂容易引起皮肤萎缩等副作用,治疗求快及购药皮肤损害[1].的随意性造成滥用.
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分化抑制培养体系体外扩增脐血造血细胞的研究
目的:探讨分化抑制培养体系对脐血造血细胞体外扩增效应.方法:分化抑制培养体系与脐血单个核细胞(MNC)体外共同培养7 d,检测MNC细胞总数、CFC、CD34+细胞反应扩增效果,并检测CD34+细胞表面归巢相关黏附分子VLA-4(CD49d)、VLA-5(CD49e)、LFA-1(CD11a)、HCAM(CD44)、L-selectin(CD62L)的表达率.结果:分化抑制培养体系组明显扩增脐血MNC细胞总数、CFC、CD34+细胞(均P ＜0.05),对照组培养脐血MNC细胞总数明显下降,CFC和CD34+细胞完全死亡(均P ＜0.01).CD34+细胞表面各黏附分子CD49d、CD44和CD62L表达与扩增前相当(均P＞0.05),而CD49e和CD11a表达明显高于扩增前(均P ＜0.05).结论:分化抑制培养体系体外显著扩增脐血造血细胞,并且扩增后的造血干(祖)细胞总体上保持其表面归巢相关黏附分子的表达,归巢功能不会减低,是一种安全有效的扩增体系.
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分泌性卷曲相关蛋白3影响小鼠胚胎肝干细胞体外成熟分化的实验研究
目的 检测不同发育阶段的肝组织中Wnt信号拮抗因子分泌性卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)的表达,并探讨SFRP3对胚胎肝干细胞体外成熟分化的影响.方法 分离胚胎12.5 d至出生后4周共9个阶段的小鼠肝组织,RT-PCR检测5种SFRPs在肝组织及胚胎肝干细胞14.5(embryonic liver stem cells,ELSC)中的表达水平.腺病毒SFRP3感染小鼠胚胎肝干细胞,地塞米松(dexamethasone,Dex)联合肝细胞生长因子(hepatic growth factor,HGF)诱导肝细胞分化,诱导后第3、6、9、12天检测白蛋白启动子荧光素酶报告基因(ablumin promoter-Gaussia Luciferase,ALB-Gluc)活性,诱导后第12天,RT-PCR和Western blot检测肝脏相关基因表达,PAS染色检测糖原合成功能.结果 SFRP1、4、5在不同阶段肝组织中的表达无明显差异,SFRP2和SFRP3只在胚胎期肝组织中表达,随后很快消失.ELSC14.5细胞中,SFRP2高表达而SFRP3表达很低.Dex联合HGF可有效诱导ELSC14.5细胞的体外成熟分化,与对照组相比,SFRP3过表达可降低成熟肝细胞标志白蛋白(albumin,ALB)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、酪氨酸转氨酶(tyrosine aminotransferase,TAT)、载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A(UDP-glucuronosyl transferase,UGT1A)的水平,增强肝干细胞标志Delta蛋白(Delta-like protein,DLK)和甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的表达,并抑制糖原合成功能.结论 SPRF3在肝脏发育过程中表达水平迅速降低,并显著抑制胚胎来源的肝干细胞体外成熟分化,其下调可能是肝脏发育和肝细胞成熟分化的一个重要因素.
关键词： 胚胎肝干细胞 分化抑制 分泌性卷曲相关蛋白3 Wnt信号拮抗因子 -
胶质瘤干祖细胞SU2分化抑制、侵袭性与miRNA-125b和MMP-9关系的研究
目的 探讨胶质瘤干祖细胞SU2分化抑制、侵袭性与基质金属蛋白酶(MMP-9)和miRNA-125b的关系.方法 胶质瘤干祖细胞SU2经丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)诱导分化得到SU2分化细胞.U87胶质瘤细胞经无血清、含生长因子的培养基培养得到U87胶质瘤干祖细胞.免疫荧光双标记法检测SU2及其分化细胞中CD133、Nestin、胶质纤维酸性蛋白( GFAP)、β微管蛋白([β-tubulinⅢ)的表达.Transwell实验检测SU2和U87胶质瘤干祖细胞的侵袭情况.实时荧光定量PCR检测SU2及U87胶质瘤干祖细胞中miRNA -125b和MMP-9基因表达.结果 SU2及其分化细胞均表达β-tubulinⅢ和GFAP.SU2细胞侵袭数明显多于U87细胞(P=0.026 1).SU2细胞中的miRNA- 125b和MMP-9表达明显高于U87细胞(均P ＜0.05).结论胶质瘤干祖细胞SU2分化抑制和高侵袭的生物学特征与miRNA- 125b和MMP-9的高表达有关,MMP-9可作为miRNA- 125b调控的靶基因进一步研究.
