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改良的乳鼠原代心房肌细胞的培养及鉴定方法
目的:主要探讨原代心房肌细胞的培养及鉴定方法,为进一步研究心房颤动的重构机制及治疗方法奠定基础.方法:选取1-3 d的SD乳鼠40只,雌雄不限,分离心房、心室肌,胰酶联合EDTA充分消化心房肌细胞,利用心房肌与成纤维细胞的差速贴壁及细胞传代方法纯化心房肌细胞,免疫细胞化学染色鉴定心房肌细胞.结果:心房肌细胞培养至第3天,可见心房肌细胞覆盖率高达90％,并出现波动性,免疫细胞化学染色可见90％的心房肌细胞肌经α-肌动蛋白抗体染色阳性.结论:经酶化学消化法可成功培养出原代心房肌细胞,是一种较好的培养及鉴定乳鼠心房肌细胞的方法.
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用免疫细胞化学染色法检测尿液中足细胞在肾小球疾病诊断中的初步应用
足细胞(podocyte)损伤和脱落是肾小球疾病早期的病理改变.目前判断慢性肾脏病损伤程度的金标准是肾活检.而尿液检测取材方便、无创伤性、易被患者接受.本研究用免疫细胞化学染色法,检测肾小球疾病患者和健康人对照者尿液足细胞标志蛋白podocalyxin(PCX)并进行足细胞计数,结果报道如下.
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用免疫细胞化学法测定CEA、CK19和HBME-1鉴别腹水中癌细胞
目的 评价单独和联合应用抗癌胚抗原(CEA)、抗细胞角蛋白19片段(CK19)和抗HBME-1抗体进行免疫细胞化学染色在鉴别腹水癌细胞和间皮细胞中的价值.方法 用免疫细胞化学方法检测67例癌性腹水及40例良性腹水细胞CEA、CK19及HBME-1的表达.结果 CEA和CK19在癌性腹水细胞中的表达显著高于良性疾病腹水中的间皮细胞,而HBME-1表达显著降低(P<0.01).单独应用时,HBME-1的敏感性高(95.5%),CEA的特异性高(97.0%),而CK19的准确性高(92.5%);联合应用时,CK19和HBME-1的诊断价值高,迭100%的敏感性和95.5%的准确性.结论 CEA、CK19和HBME-1对于鉴别腹水中的癌细胞与反应性问皮细胞具有重要意义.
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阿利新蓝染色对脑膜癌的诊断价值
目的 探讨阿利新蓝染色对脑膜癌的诊断价值.方法 对34例脑膜癌病患者进行腰椎穿刺术,分别采用阿利新蓝染色与过碘酸雪夫染色(PAS)染色和细胞上皮膜抗原(EMA)、细胞角蛋白(CK)、高分子角蛋白(CKH)、低分子角蛋白(CKL)免疫组化标记针检测CSF标本中的肿瘤细胞.结果 34例脑膜癌病患者的阿利新蓝染色均呈阳性表达,PAS染色和EMA、CK、CKH、CKL免疫组化标记亦证实其为肿瘤细胞.结论 阿利新蓝染色能对脑膜癌患者CSF中的癌细胞进行快速初筛.
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脑脊液改良抗酸染色联合单核细胞内早期分泌抗原靶-6测定用于结核性脑膜炎早期诊断的研究
目的 探寻结核性脑膜炎(TBM)早期诊断的新方法.方法 选取徐州医科大学附属医院神经内科2013年5月-2015年2月收治的TBM患者38例及其他中枢神经系统感染患者38例.所有病例入院后24 ～ 48h内,腰椎穿刺脑脊液(CSF)并予常规检测,同时采用传统集菌法涂片抗酸染色检测结核分枝杆菌(MTB)、改良抗酸染色检测MTB、免疫细胞化学染色及酶联免疫吸附法(ELISA)测定早期分泌抗原靶-6(ESAT-6).结果 ①改良抗酸染色检测MTB的灵敏度(Se)达71.1％,与传统抗酸染色(Se为2.6％)比较,差异有统计学意义(P=0.000);改良抗酸染色图片中,单核细胞、中性粒细胞内见到MTB,同时淋巴细胞内也发现MTB;在同一样本中,MTB以短棒状、点状、球形及细长弯曲型等多种形态存在.②免疫细胞化学染色诊断TBM的Se为84.2％,Sp为89.5％;单核细胞表达ESAT-6为常见,中性粒细胞、淋巴细胞内也存在ESAT-6表达现象.③CSF改良抗酸染色联合免疫细胞化学ESAT-6检测诊断TBM的Se为89.5％,与改良抗酸染色比较,差异有统计学意义(P=0.044);联合检测的Sp为89.5％,与免疫细胞化学染色比较差异无统计学意义(P=0.169).结论 CSF改良抗酸染色联合单核细胞内ESAT-6测定可以提高诊断TBM的灵敏度.
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细胞块石蜡切片在胸腹水病理诊断中的应用价值
胸腹水的细胞学检查是病理的日常工作之一.常规涂片存在厚薄不均、细胞重叠、结构不清、细胞量少而阳性率低,以及难以进行免疫细胞化学染色等缺点.本次研究探讨细胞块石蜡切片及免疫细胞化学染色在胸、腹水检测中的应用价值.现报道如下.1 资料与方法
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细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值
目的 探讨细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理诊断中的意义.方法 收集有异型细胞及癌细胞的浆膜腔积液50例,进行离心涂片、细胞块切片HE染色,并进行CK、CK7、CK20、CDX-2、MC、Calretinin、Vimentin、TTF-1、CA125等免疫细胞化学染色,选择性标记.结果 常规细胞涂片厚,背景不清晰;离心沉渣包埋切片细胞多而集中,背景清晰,染色鲜艳,并有一定的组织结构,免疫细胞化学染色效果较好,阳性定位准确,可靠性高.结论 细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术,能提高胸腹水肿瘤细胞的检出率,对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的价值.
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E-cadherin和Calretinin免疫细胞化学染色对良性与恶性胸腔积液的鉴别诊断价值
目的探讨E-eadherin和Calretinin免疫细胞化学染色对良性与恶性胸腔积液的鉴别诊断价值.方法收集45例胸腔积液,离心取脱落细胞行"标准化"处理后涂片,巴氏染色后进行常规细胞学诊断,采用第二代LAB-SA酶标法进行E-cadherin和Calretinin免疫细胞化学染色.结果恶性积液E-cadherin染色阳性率为86.4%(19/22),良性积液为13.0%(3/23),且前者阳性强于后者;两组间染色阳性率及阳性强度差异有显著性意义(P＜0.01);诊断恶性积液的特异性为87.0%.良性积液Calretinin染色阳性率为95.7%(22/23),恶性积液为9.1%(2/22),且前者阳性程度强于后者;两组间染色阳性性率及阳性强度差异有显著性意义(P＜0.01);诊断良性积液的特异性为90.9%.两者联合检测对诊断良性与恶性积液的特异性均提高到100%.结论E-cadherin和Calretinin免疫细胞化学染色对良/恶性胸腔积液的鉴别诊断有良好的价值.
关键词： E-cadherin Calretinin 胸腔积液 免疫细胞化学染色 -
急性白血病细胞化学和免疫细胞化学染色的应用与进展
细胞化学染色是在组织化学的基础上发展起来的一个分支,它是细胞学与化学相结合而形成的一门科学.迄今,其研究与应用已历数十载.近年来,由于细胞形态学、细胞化学、细胞遗传学和免疫学以及分子生物学等新技术的应用,从而使急性白血病(AL)的诊断和分型研究,取得了显著进展.其中细胞化学和免疫细胞化学反应在AL的FAB分型和MICM(形态学M,免疫学I,细胞遗传学C,分子生物学M)分型方案中,具有诊断和鉴别诊断的重要价值.
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长期右房起搏形成心房颤动动物模型的神经萌出及出现交感神经支配
狗长期快速心房起搏可能形成心房颤动(AF)，有无神经方面的重构?尚乏组织学资料的证明。 6只狗快速心房起搏111±76天，造成持续性AF，6只健康狗的组织用作对照。用抗-生长-相关蛋白43(GAP43)及抗-酪氨酸-羟化酶(TH)抗体作心脏神经免疫细胞化学染色。AF狗右房的GAP43-阳性和TH-阳性-神经密度为470±406及231±126/mm2，明显高于对照组织(25±23及88±40/mm2)。房间隔GAP43-阳性及TH-阳性的神经密度分别为317±36/mm2及155±85/mm2，明显高于对照组织(9±3及30±7/mm2)。同样，AF狗左房的GAP43-阳性及TH-阳性神经密度分别为119±61及91±40/mm2，明显高于对照组织的神经密度(分别为10±15及38±39/mm2)。此外，AF狗右房的神经密度明显高于左房。显微镜检查见到各取样处有不均一的心脏神经分布。 结论：右房长期起搏造成的持续性AF狗模型有明显的神经萌出及交感神经支配过度，两者在右房的程度甚于左房。 编者：已有多位作者提出长期快速右房起搏致动物持续性房颤，是由于起搏引起电和解剖学的重构。近又有作者指出同时有右房交感神经支配的多种改变，［C-11］-羟化麻黄素潴留不均一，右房胜于左房。因此提出神经组织的重构可能在起搏致AF及其维持中起重要作用，Chang CM的结果支持上述假说。(Chang CM,et al.Circulation,103:22,2001.余国膺摘译)
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组织块培养法及胶原酶消化法分离培养豚鼠耳蜗微血管内皮细胞
目的建立稳定的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的培养方法.方法采用显微解剖技术分离出豚鼠耳蜗血管纹,分别用组织块法及酶消化法进行培养及纯化.结果耳蜗血管纹组织块培养后2天,部分组织块边缘有散在的细胞生长,这些细胞逐渐增殖形成大片细胞集落;耳蜗血管纹组织经胶原酶消化后1～3天,可观察到培养皿底由一些细胞组成的细胞岛;细胞纯化后大多呈多边形,致密融合时具有内皮细胞培养时典型的"铺路石样"外观,经免疫组化检测其内皮细胞标志性抗原Ⅷ因子,95%以上的培养细胞的胞浆中呈棕黄色阳性反应.结论组织块法及酶消化法能够获得体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞.
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腹腔积液细胞蜡块细胞来源及免疫细胞化学的诊断价值
目的:探讨腹腔积液细胞蜡块细胞来源并分析PAX8,ER,CDX-2和CDH17免疫染色的鉴别诊断价值.方法:回顾性分析解放军南京总医院/南京大学金陵医院病理科146例腹腔积液细胞蜡块归档样本病理资料,并进行免疫细胞化学染色检测PAX8,ER,CDX-2和CDH17的表达.结果:腹腔积液细胞蜡块中,可见卵巢癌转移35例,胃肠道腺癌转移21例,也可以见到肺癌、乳腺癌、淋巴瘤、恶性黑色素瘤等恶性肿瘤转移.PAX8和ER在卵巢癌中的阳性率均为97％,在其他样本中阳性率分别为0％和5％,差异具有统计学意义(x2=140.56,P＜0.001;x2=116.65,P＜0.001).在21例胃肠道腺癌中,CDX-2及CDH17的阳性率分别为90％和71％;在其余的125例细胞蜡块样本中,可以检测到5例CDX-2表达及3例CDH17表达,差异具有统计学意义(x2=97.88,P＜0.001;x2=79.26,P＜0.001).结论:多种恶性肿瘤细胞可以转移至腹腔积液,其中卵巢癌多,胃肠道腺癌次之;PAX8,ER,CDH17和CDX-2具有较好的鉴别诊断价值.
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双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β- 防御素-2基因表达及其信号转导机制
目的:本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路.方法:厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,利用SepharylS-100HR分子筛分离细胞壁蛋白.分别利用活菌,热灭活全菌,全细胞壁组份和全细胞壁蛋白组分,刺激人肠腺上皮细胞Caco-2,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、Northem杂交、免疫细胞化学染色和ELISA等技术在mRNA和肽水平上检测hBD-2基因的表达.应用Westem Blotting技术检测到IκB-α磷酸化和降解、NF-κBp65的核移位以及细胞内MAPKs蛋白分子ERK1/2、p38 MAPK和JNK的磷酸化.
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消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响
目的:观察消渴颗粒剂对高糖刺激后系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响,以探讨消渴颗粒剂治疗糖尿病肾病的机理.方法:培养正常大鼠系膜细胞,经相差显微镜、扫描电镜观察,免疫细胞化学染色actin和desmin染色均为阳性,证实为系膜细胞后,进行实验.高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入中药含药血清后,用MTT法和激光共聚焦显微镜分别观察消渴颗粒剂含药血清对高糖刺激后系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响.
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3株肝细胞在硝酸纤维素膜界面上生长的初步研究
目的 在体外培养的条件下,观察3株肝细胞在硝酸纤维素膜材料上的生长情况,研究膜的细胞相容性及理化性能的改变,初步探讨硝酸纤维素膜作为一种新的组织工程膜材料用于构建生物人工肝生物反应器中细胞的载体材料的可行性.方法 将生物人工肝常用的细胞:肝肿瘤细胞HepG2、C3A、永生化HL7702细胞株分别接种在浸泡处理后的硝酸纤维素膜片上常规培养,在普通光学显微镜以及扫描电镜观察肿瘤细胞在此种膜上的贴壁情况和细胞形态.同时行免疫细胞化学染色和细胞功能检测.结果 细胞经常规染色、透明处理后,在光镜下观察到膜上生长的细胞保持了较好的增殖状态及细胞形态;免疫细胞化学染色结果表明,膜上细胞特异性标志物表达良好.培养液上清的生化检测表明培养细胞的主要分泌、代谢功能与常规培养无明显差异:扫描电镜下膜表面细胞呈集落式三维生长,增殖明显.结论 硝酸纤维素膜能促进细胞黏附,并且与细胞有良好的相容性.硝酸纤维索膜作为一种良好的细胞黏附生长介质的同时,还具有可以在其上面直接进行相关培养物观察和检测的优点,有望作为一种新的细胞培养介质和生物人工肝反应器中新的膜材料
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胸腹水细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色在胸腹水细胞病理学诊断中的价值
目的:探讨胸腹水细胞块石蜡包埋、免疫细胞化学染色技术在病理诊断中的应用价值.方法:对45例胸腹水标本进行石蜡包埋、切片、苏木精伊红染色,CEA、CK(pan)、Cal、P53、PCNA、GST ∏、P gp等免疫细胞化学染色.结果:胸腹水细胞块石蜡包埋技术,能收集到较多的有核细胞,苏木精伊红染色色彩鲜艳、清晰,有时能观察到组织结构,免疫细胞化学染色,背景清,阳性颗粒定位准确,可靠性高.结论:该法的应用提高了胸腹水的阳性检出率,提高了疑难病例诊断的准确率,方法简单,值得推广.
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硝酸纤维素膜介质对鼻咽癌和胰腺癌细胞株的细胞相容性
目的 观察3株鼻咽癌细胞和1株胰腺癌细胞在硝酸纤维素膜材料表面的生长情况,探讨硝酸纤维素膜材料作为一种细胞生长支架材料用于鼻咽癌细胞和胰腺癌细胞培养的可行性.方法 将3株鼻咽癌细胞和1株胰腺癌细胞培养于硝酸纤维素膜上,HE染色并观察细胞生长情况;并且在扫描电镜下观察鼻咽癌细胞在此种膜上的贴壁情况、细胞生长形态,同时收集细胞培养液上清检测培养细胞LDH渗出量.利用免疫细胞化学染色检测膜上胰腺癌细胞表达CA199、CEA等肿瘤细胞标志物.结果 膜透明处理后,在光镜下可以观察到这4株细胞在硝酸纤维素膜表面较好地生长,膜能促进细胞黏附和生长;通过检测细胞的增殖状态和肿瘤细胞标志物的表达,发现细胞可呈集落状生长且增殖明显,细胞主要肿瘤标志物阳性表达.结论 硝酸纤维素膜不仅具有良好的生物相容性,能够有效地支持鼻咽癌和胰腺癌细胞在其表面的贴附和生长,同时还可以在其上面进行诸如形态学观察及细胞功能检测,有望作为一种新的组织培养介质和细胞贴附的支架材料加以应用.
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236例胸腹水液基细胞学检测及免疫细胞化学分析
目的：探讨液基薄层细胞检测和传统涂片在胸腹水细胞病理诊断中的意义以及免疫细胞化学染色在恶性胸腹水诊断中的价值。方法收集胸腹水标本236例，进行两种方法的制片，HE 染色，并进行 CEA、CK5/6、CK7、Ki-67免疫细胞化学染色。结果液基细胞检测技术检测胸腹水恶性肿瘤检出率高于传统涂片技术，两组间差异有统计学意义（P ＜0．05）；恶性胸腹水 CEA、CK5/6、CK7、Ki-67表达阳性率高于良性胸腹水，两组间差异有统计学意义（均 P ＜0．01）。结论液基细胞检测技术检测胸腹水恶性肿瘤检出率高于传统涂片技术，辅以免疫细胞化学检测，对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的价值。
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抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用
目的 鉴定抗人神经菌毛素1 (neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况.方法 腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况.结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面.细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7 、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823,H6 、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达.结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础.
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激活素ⅡA型受体在免疫细胞上的表达
目的探讨激活素ⅡA受体(ActRH A)在免疫细胞中的表达,揭示激活素(Activin)对免疫细胞的作用方式.方法以ActRⅡA C末端肽作为抗原免疫家兔制备特异性抗ActRⅡ A C末端抗体,通过免疫细胞化学染色技术观察ActRⅡA在免疫细胞上的分布.RT-PCR检测ActRⅡA mRNA表达情况,硝酸还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞产生NO水平.结果采用特异性抗ActRⅡA C末端抗体进行免疫细胞化学染色,结果显示ActRⅡA在小鼠巨噬细胞上高水平表达,而在其它免疫细胞(T、B、NK、DC)上未见表达.RT-PCR检测结果进一步表明ActRⅡA mRNA在巨噬细胞中表达.硝酸还原酶法检测结果显示,激活素A能明显抑制LPS刺激的巨噬细胞NO的产生.结论ActRⅡA主要在巨噬细胞上高水平表达,提示激活素可通过ActRⅡA介导的信号传导途径参与巨噬细胞功能调控.
