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人良性胆管瘢痕成纤维细胞的培养和鉴定
成纤维细胞(fibroblast,Fb)过度增生是良性且日管瘢痕狭窄形成的主要原因[1]…;前期研究发现Fb在良性胆管瘢痕病变中可向肌成纤维细胞转化,并能表达凋亡相关因子如Sur-vivin、BCL-2、BAX等,以及血管生成相关冈子如VEGF等[2];而正常组织的成纤维细胞未见表达.
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胆道损伤一期修复术后是否需留置T管的实验研究
目的 妥善处理已经发生的胆道损伤,大限度地减少再手术.方法 切开兔胆管并自十二指肠乳头行胆管内支撑方法建立模型,将不同时期梗阻段胆管壁进行V.G染色和β1型转化生长因子(transforminggrowth factor beta 1,TGF-β1)免疫组化染色,测定TGF-β1阳性区域的光度以及胆管组织胶原含量积分光密度随时间变化关系.结果 兔胆管壁TGF-β的含量随着时间延长逐渐增加,在60 d左右达到高值,以后逐渐减少,在90～120 d接近正常水平.胶原组织积分光密度对比在30 d内未放置导管组与放置导管组差异有统计学意义(P=0.009),60 d后差异无统计学意义.结论严格选择适应证及精细的手术操作,胆总管损伤一期修复后不放置T管是安全可行的.评价治疗过程和方法是否合理的客观标准是治疗手段能否恢复胆道系统的完整性和通畅性.
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串联飞行时间质谱分析人良性胆管瘢痕成纤维细胞差异蛋白表达
目的 探讨人良性胆管瘢痕成纤维细胞蛋白表达差异.方法 收集15例良性胆管狭窄患者的胆管瘢痕,用10例正常人胆管作为对照,进行体外组织培养,提取两种细胞总蛋白,通过双向凝胶电泳,图像分析,获得差异表达蛋白点.结果 组织培养5d后可见梭形细胞移出、贴壁,14d细胞连接成片,传代后生长良好,电镜可见微丝,免疫荧光检测该细胞有Vimentin表达.检测出人良性胆管瘢痕成纤维细胞差异蛋白28种,上调蛋白9种,下调蛋白19种,其功能与细胞代谢、凋亡等相关.结论 胆管瘢痕成纤维细胞蛋白表达存在差异.
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人胆管瘢痕组织和脂肪组织裸鼠皮下移植动物模型的建立
损伤性胆管狭窄的病理基础是胆管瘢痕[1],防治胆管瘢痕形成是胆道外科一个亟待解决的问题.本研究旨在建立人胆管瘢痕组织和脂肪组织裸鼠皮下移植模型.
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熊去氧胆酸对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长影响的研究
目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长的影响.方法 原代培养人肝内胆管瘢痕组织成纤维细胞.通过显微镜观察和免疫荧光染色鉴定细胞,采用噻唑蓝(MTT)法和划痕实验检测UDCA对瘢痕成纤维细胞生长的影响.结果 ①成功原代培养人肝内胆管瘢痕成纤维细胞;②MTT显示:CA和DCA浓度在0.5～10.0μmol/L之间促进细胞活力,而UDCA浓度大于5μmol/L时,则明显抑制细胞的活力(P＜0 05).随着UDCA浓度升高,CA组和DCA组细胞活力逐渐下降;③划痕实验结果显示:随着UDCA浓度升高,CA组和DCA组细胞愈合距离逐渐增加.结论 UDCA可能抑制CA和DCA的促瘢痕成纤维细胞生长的作用.
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地塞米松抑制胆管瘢痕成纤维细胞的体外研究
目的 研究地塞米松(DEX)对体外培养的兔胆管瘢痕模型成纤维细胞(MF)中I型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)及第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)表达的影响.方法 对家兔采用切开再吻合方法复制胆管瘢痕模型并获取MF,经细胞鉴定后对MF给予不同浓度的DEX(0.00、0.01、0.05和0.25 mg/ml)干预48 h,活细胞计数法试剂盒测定各组细胞增殖水平;实时聚合酶链反应检测各组细胞I型胶原、CTGF和PTEN mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞I型胶原和PTEN蛋白表达水平.结果 在DEX干预48 h后,MF增殖受抑制,细胞I型胶原、CTGF mRNA和蛋白表达下调,PTEN mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),呈浓度依耐性.结论 DEX可能具有抑制胆管瘢痕及良性胆道狭窄形成的作用,其机制之一可能与MF中I型胶原、CTGF及PTEN的调控有关.
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胆汁酸对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长的影响
目的：探讨胆汁酸对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法原代培养人肝内胆管瘢痕组织成纤维细胞。倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化，采用噻唑蓝（ MTT ）法、细胞计数细胞和划痕实验检测胆汁酸对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果（1）成功原代培养人肝内胆管瘢痕成纤维细胞。（2） MTT显示在72 h，浓度0.5、1.0、2.5、5μmol／L的胆酸（CA）和脱氧胆酸（DCA）促进瘢痕成纤维细胞活力（P＜0.05），其他胆汁酸对瘢痕成纤维细胞的生长无明显影响（P＞0.05）；浓度在10、20、50、100、250、500μmol／L，游离胆汁酸和结合胆汁酸抑制瘢痕成纤维细胞的活力（P＜0.05）。同时，单独使用CA（2．5μmol／L）或DCA（5μmol／L）或联合使用CA （2．5μmol／L）和DCA（5μmol／L），与未添加胆汁酸比较，细胞数量、活力明显增加，愈合距离明显缩小（P＜0.05）；联合使用与单独使用比较，细胞数量、活力和愈合距离差异无统计学意义（P＞0.05）。结论游离胆汁酸（ CA、DCA）在肝内胆管瘢痕的形成过程中可能扮演重要角色。
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原癌基因蛋白C-MYC和C-FOS在良性胆道狭窄瘢痕组织中的表达及相关性研究
目的 观察原癌基因c-myc,c-fos蛋白在良性胆道狭窄瘢痕组织中的表达和分布,探讨其与良性胆道狭窄形成的相关性.方法 应用免疫组化SP法,检测c-myc,c-fos蛋白在20例肝外胆管瘢痕组织、12例肝内胆管瘢痕组织和10例正常胆管组织中的表达和分布.对其阳性表达结果进行比较分析.结果 在肝外胆管瘢痕组织和肝内胆管瘢痕组织的成纤维细胞、胆管上皮细胞及血管内皮细胞中c-myc,c-fos呈强阳性表达,而正常胆管组织中无表达.肝外、肝内胆管瘢痕组织中c-myc,c-fos的表达与正常胆管组织差异有显著性意义(P＜0.01),肝外与肝内胆管瘢痕组织中c-myc,c-fos的表达差异无显著性意义(P＞0.05).在肝外胆管瘢痕组中c-myc与c-fos蛋白两者的表达成正相关(r=0.75,P＜0.05).在肝内胆管瘢痕组中c-myc与c-fos蛋白两者的表达亦成正相关(r=0.68,P＜0.05).结论 肝外、肝内胆管瘢痕组织中c-myc和c-fos癌基因受激活,可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生.原癌基因c-myc,c-fos与良性胆道狭窄瘢痕形成密切相关,两者具有协同性.
