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益气活血通络方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:探讨益气活血通络方对糖尿病大鼠周围神经损伤的保护作用机制.方法:采用高脂喂饲联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射,诱导糖尿病大鼠模型.将大鼠随机分为正常组,模型组,中药高、中、低剂量组,甲钴胺组,每组10只.各组用药后,观察大鼠坐骨神经传导速度(MNCV),TUNEL法原位标记凋亡的坐骨神经细胞并计算细胞凋亡率(AR),Western blot法检测坐骨神经Bcl-2、Bax、Cytc、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠MNCV显著下降(P＜0.05),AR显著升高(P＜0.01);与模型组比较,益气活血通络方各剂量组大鼠AR显著降低(P＜0.01,P＜0.05),中、低剂量组大鼠MNCV显著升高(P＜0.01,P＜0.05);益气活血通络方能明显升高模型鼠坐骨神经Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Cytc、caspase-9、Caspase-3蛋白表达,各剂量组间无显著性差异.结论:益气活血通络方可能通过促进Bcl-2与Bax形成异源二聚体,阻断Cytc的释放,抑制下游凋亡因子的激活,有效抑制糖尿病大鼠周围神经细胞凋亡.
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姜黄素预处理减轻急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡
目的 探讨姜黄素预处理减轻急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 大鼠随机分为假手术组、心肌缺血2h组及姜黄素预处理组,采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型.用TUNEL法观察各组大鼠的心肌细胞凋亡情况；采用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠心肌细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白表达水平,并探讨它们之间的关系.结果 与心肌缺血组相比,姜黄素预处理组BCL-2/β-actin/mRNA和蛋白表达相对值水平明显升高(P＜0.05),心肌细胞凋亡数与BCL-2/β-actin蛋白表达相对值之间成明显的负相关(P＜0.05)；姜黄素预处理组caspase-3/β-actin mRNA和蛋白的表达相对值降低(P＜0.05),心肌细胞凋亡数与caspase-3/β-actin mRNA和蛋白表达相对值之间成明显的正相关(P＜0.05).结论 姜黄素对心肌缺血大鼠模型心肌梗死有明显保护作用,其作用机制可能与调节心肌细胞凋亡相关因子作用有关.
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人良性胆管瘢痕成纤维细胞的培养和鉴定
成纤维细胞(fibroblast,Fb)过度增生是良性且日管瘢痕狭窄形成的主要原因[1]…;前期研究发现Fb在良性胆管瘢痕病变中可向肌成纤维细胞转化,并能表达凋亡相关因子如Sur-vivin、BCL-2、BAX等,以及血管生成相关冈子如VEGF等[2];而正常组织的成纤维细胞未见表达.
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APP17肽对SAM鼠脑内Bcl-2和Caspase-3凋亡相关因子的影响
APP17肽是产生老年斑的主要成分β-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段.本课题组曾将APP17肽作用于D-半乳糖脑老化模型,结果发现其具有防止或逆转处于凋亡过程中的神经元恢复或接近正常状态的功能[1],对Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡也有保护作用[2];将APP17肽直接作用于糖尿病大鼠,发现其可以改善末梢神经的脱髓鞘,抑制神经元胞质内钙离子浓度的升高,从而保护神经细胞免受钙离子中介谷氨酸的毒性[3].
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布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5-90诱导巨噬细胞凋亡线粒体途径相关因子的表达比较
目的 比较布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后其凋亡相关因子的转录和表达. 方法 建立16M、M5-90侵染RAW264.7模型,采用CFU计数法比较16M、M5-90侵染RAW264.7 4、8、12、24 h后的胞内生存情况;采用qRT-PCR检测AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl基因转录水平的变化;采用ELISA检测TNF-α和Cyt C在细胞内的表达;采用激光共聚焦检测Cyt C在细胞内共定位表达情况. 结果 布鲁氏菌16M在侵染后4h～24 h胞内CFU呈增多趋势,而M5-90 CFU先增多后减少.qRT-PCR显示AIF基因的转录水平在侵染后4h～24 h内呈上升趋势,且M5-90侵染组与16M侵染组比较差异无统计学意义(P＞0.05);由M5-90侵染诱导的Apaf-1基因转录水平与16M侵染组比较有统计学意义(P＜0.05);Bcl-xl的转录量随着侵染时间增长而不断增加,且16M诱导组与M5-90组比较差异无统计学意义(P＞0.05);M5-90侵染组Bax和Bcl-2水平与16M组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05);M5-90侵染组Bax/Bcl2比值与16M侵染组比较差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA分析显示TNF-α、Cyt C分泌量随着时间增长而增加,且M5-90诱导组与16M组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).激光共聚焦显示Cyt C定位在RAW264.7内,属于胞浆表达,且M5-90诱导的表达量与16M组比较差异无统计学意义(P＞0.05),并随感染时间的延长不断增加. 结论 布鲁氏菌疫苗株M5-90侵染RAW264.7 4 h～24 h内,凋亡相关因子Cyt C、AIF、Bax/Bcl-2、Apaf-1的表达量高于强毒株16M侵染组,而Bcl-xl则相反,表明在此侵染阶段M5-90具有更强的促细胞凋亡作用.
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TIPE2对固有免疫应答的调控及信号通路
免疫系统在进化过程中建立了复杂而精细的调控机制，以产生适度的免疫应答来维持机体免疫系统平衡，使之既能清除异物抗原或病原微生物，又不因免疫过强而损伤机体正常组织。这种免疫自稳功能是免疫系统特有的，通过维持一定数量的免疫细胞以预防过强的炎症反应的能力。研究表明有两类分子对免疫系统维持内环境稳定是必需的，第一类具有限制免疫细胞激活和扩张强度的功能，包括：（1）抑制性细胞因子如TGF-β、IL-10［1-2］；（2）抗原受体信号和Toll样受体信号的负调节子如细胞毒T淋巴细胞相关抗原（ CTLA-4）、核因子-κB 抑制子（IκB）、细胞因子信号抑制子（ Socs1）等［1-3］；（3）抑制性转录因子如Foxp3［1-3］。第二类分子具有调控细胞凋亡的功能，包括凋亡相关因子（ Fas）、凋亡调节蛋白（ Bim ）、Bcl-2相关X蛋白（ Bax ）和caspase-8，caspase-10等［1，3-4］。当这些分子在免疫系统中被耗竭时，免疫稳态失衡，可导致炎症性疾病、组织器官的坏死，威胁生命安全。肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2（ tumor necrosis factor-induced protein 8 like-2，TIPE2）是新近发现的对维持免疫系统的稳定起重要作用的分子，归属于肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（ TNFAIP8）家族［3］。通过TIPE2基因敲除、敲低以及转染等一系列实验证实TIPE2是细胞免疫功能的负调节者，可调控固有免疫和适应性免疫，阻止免疫系统的高反应性，维持机体免疫系统的平衡［3］，在炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病中发挥重要作用。下面主要就TIPE2在固有免疫中的进展作一综述。
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凋亡相关因子Caspase-3、Survivin在急性胰腺炎患者中的表达及意义
目的 探讨急性胰腺炎患者凋亡相关因子Caspase-3和Survivin的表达及其临床意义.方法 选取82例急性胰腺炎患者,其中轻症38例,重症44例.所有患者均术中留取胰腺组织标本进行免疫组化.观察轻症与重症患者的HE染色与免疫组化表现,比较HE病理评分、Caspase-3、Survivin平均光密度及Caspase-3、Survivin阳性率.结果 轻症患者的HE染色表现为胰岛组织出血,胰腺腺泡、小叶、细胞等间隙发生明显增宽;重症患者为正常结构消失、组织坏死、中性粒细胞浸润.轻症患者的Caspase-3免疫组化表现为胰腺腺泡组织胞浆深染,重症患者为淡染;轻症与重症患者Survivin免疫组化均表现为胰腺组织胞浆黄染,但重症患者颜色更深.轻症患者的HE病理评分、Survivin平均光密度低于重症患者(P<0.05),Caspase-3平均光密度高于重症患者(P<0.05).轻症患者Caspase-3阳性率55.26%,高于重症患者31.82%(P<0.05).轻症患者Survivin阳性率26.32%,低于重症患者52.27%(P<0.05).结论 急性胰腺炎患者早期已出现凋亡系统紊乱,表现为轻症患者的Caspase-3高表达与Survivin低表达.随着病情进展,Caspase-3表达减弱、Survivin表达加强,二者有负反馈调节作用.
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凋亡相关因子和肿瘤坏死因子-α介导的细胞凋亡及白介素-19、白介素-10在高原慢性肺心病发病中的作用
目的探讨凋亡相关因子(Fas/Apo-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的细胞凋亡及白介素-19(IL-19)、白介素-10(IL-10)在高原慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并慢性肺心病(CCP)发病机制中的作用.方法采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定60例高原COPD合并CCP急性加重期患者(急性加重组)和稳定期57例患者(稳定组)血清Fas/Apo-1、TNF-α、IL-19、IL-10浓度;测定1 s用力呼气容积(FEV1％)占预计值百分比(FEV1％pred)、动脉血氧分压(PaO2)和动脉血二氧化碳分压(PaCO2),并与30例当地健康人(健康组)进行比较.结果急性加重组和稳定组患者血清Fas/Apo-1、TNF-α、IL-19浓度和PaCO2[分别为(46.89 ±6.18) pg/ml、(18.37±3.26) ng/ml、(285.52±38.71) pg/ml、(56.36±5.28) mmHg和(37.25±4.82) pg/ml、(13.34±2.5) ng/ml、(166.12±32.45) pg/ml、(43.05±4.43)mmHg]显著高于健康组[分别为(30.44 ±4.16) pg/ml、(9.26±2.01)ng/ml、(86.59±20.91)pg/ml],血清IL-10浓度、FEV1％pred、PaO2[分别为(37.29±6.88) pg/ml、(33.19 ±5.45)、(35.22±5.26) mmHg和(55.36±7.62) pg/ml、(51.33±5.27)、(47.63±5.50) mmHg]显著低于健康组[(30.67±2.91)mmHg、(65.68±7.06) pg/ml、(72.15±5.23)、(68.08±529) mmHg](均P＜0.01),急性加重组与稳定组比较亦有非常显著性差异(均P＜0.01).急性加重组血清Fas/Apo-1、TNF-α、IL-19与FEV1％pred、PaO2显著负相关(分别r=-0.525、-0.498、-0.603和-0.536、-0.528、-0.463,均P＜0.01),与PaCO2显著正相关(分别r=0.533、0.562、0.498,均P＜0.01);IL-10与FEV1％pred、PaO2显著正相关(分别r=0.476、0.563,均P＜0.01),与PaCO2显著负相关(r=-0.525,P＜0.01).结论高原COPD合并CCP患者Fas/Apo-1和TNF-α表达上调介导细胞凋亡异常,Fas/Apo-1、TNF-α、IL-19和IL-10可能共同参与了气道慢性炎症反应.
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骨肉瘤预后相关分子生物学指标研究进展
骨肉瘤是一种临床常见的成骨性恶性肿瘤,约占所有骨肿瘤的20%.其恶性程度高,进展快,好发于青少年,预后较差.近来研究发现,骨肉瘤的预后与细胞凋亡失衡有关.细胞凋亡又称程序性细胞死亡,是由于细胞内环境变化或死亡信号触发以及在基因调控下所引起细胞主动死亡的过程.这一过程对保持机体的稳态至关重要,若凋亡调控失衡则可致多种肿瘤的发生发展.因此研究骨肉瘤凋亡相关因子的调控机制,以了解这些因子在骨肉瘤发生发展及治疗中的作用,为有效治疗提供新思路十分重要.
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子宫内膜癌组织中磷酸化蛋白激酶B及Bim蛋白表达的研究
3-羧基磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B (PKB)信号转导途径是调控细胞凋亡的重要途径,PKB是PI3K的下游因子,PKB磷酸化激活后,可通过对多种凋亡相关因子的调节来抑制细胞凋亡.Bim为bcl-2蛋白家族中仅含有BH3区域的成员之一.有研究表明,活化的PKB可通过作用BH3区域,进而抑制bcl-2家族相关蛋白的促凋亡活性[1].目前,国外有关Bim基因表达的研究多集中在造血干细胞及粒细胞[2],在子宫内膜癌方面的研究尚少.本研究对子宫内膜癌组织的磷酸化PKB(p-PKB)与Bim蛋白表达水平进行检测,并探讨其与子宫内膜癌发生的关系.
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细胞凋亡的检测方法(综述)
近年来,细胞凋亡一直是生物医学领域各专业的研究热点,凋亡检测技术种类繁多却并不完善,此文就凋亡的特征以及常用的细胞凋亡的各种定性、定量检测方法的优缺点做一综述,同时提及了重要的凋亡调控基因和凋亡相关因子的检测.
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丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关因子表达的影响
目的 观察丁苯酞(NBP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织Bcl-2和Bax表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂对照组和丁苯酞治疗组,用线栓法,制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24 h后,断头取脑,用免疫组织化学法和RT-PCR法,观察脑组织Bel-2和Bax表达水平的变化.结果 大鼠脑缺血再灌注损伤后,Bel-2和Bax显著增多;与模型组和对照组相比,治疗组Bel-2的表达显著上调,Bax的表达显著下调,差异均有统计学意义(P <0.05).结论 丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与上调Bel-2的表达、下调Bax的表达有关.
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半胱天冬酶与缺血性脑血管病
缺血性脑血管病是目前困扰医学界的难题之一,除了缺血期造成的急性神经元坏死外,迟发性神经元凋亡是造成缺血后损伤的另一主要原因.而且,与坏死不同,通过调控凋亡相关因子,迟发性神经元凋亡可以逆转.而被称为"死亡杀手"的半胱天冬酶(caspases)在神经元凋亡中起十分重要的作用.国内外学者对半胱天冬酶的调控机制进行了大量研究,并且通过调控半胱天冬酶的活性,在缺血性脑血管治疗方面取得了初步的进展.本文将对这一主题进行综述.
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雌孕激素受体调节剂治疗子宫肌瘤
子宫肌瘤是女性常见的良性肿瘤,临床上约25%的妇女都有子宫肌瘤,30～50岁的女性发病率较高.子宫肌瘤主要由子宫平滑肌细胞增生而形成,其中有少量结缔组织纤维仅作为一种支持组织而存在,因其发病和女性激素(雌激素、孕激素)有关,故属性激素依赖性肿瘤.体外实验也支持雌、孕激素在子宫肌瘤发病机制中起主要作用的论断.研究表明,雌、孕激素可能通过与其特异性受体结合而调节局部生长因子及凋亡相关因子,影响子宫肌瘤的发生与发展[1].
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人类白细胞抗原G分子、凋亡相关因子及FAS配体分子在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变中表达的研究
目的 检测人类白细胞抗原-G分子(HLA-G)、FAS/FASL分子在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变中的表达情况.方法 应用免疫组织化学方法检测18例宫颈鳞癌,40例宫颈上皮内瘤变(包括CINⅢ16例,CINⅡ12例,CIN Ⅰ 12例),18例正常宫颈组织中HLA-G分子、FAS分子、FASL分子的表达,并分别比较各分子之间的相关性.结果 宫颈鳞癌中HLA-G分子的表达水平显著高于正常宫颈组织,其FAS分子的表达水平显著低于正常宫颈组织.HLA-G与FAS分子在宫颈鳞癌与CINs中的表达水平无统计学差异性,在CINs组间以及CINs与正常组织中的表达无显著差异性.FASL分子在宫颈鳞癌和CINs及正常组织中的表达水平无明显差异性.HLA-G与FASL分子在各宫颈病变中表达均具有正相关性,其两者与FAS分子之间表达无相关性.结论 宫颈鳞癌组织中HLA-G和FASL分子呈高表达,FAS分子呈低表达.HLA-G与FASL分子呈正相关.但HLA-G分子是否介导宫颈鳞癌的免疫耐受,以及FAS/FASL分子介导的细胞凋亡途径是否为其发生的途径之一尚需进一步研究.
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科学家发现细胞凋亡的分子制动器
细胞色素C从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤.释放到细胞质的细胞色素C,在脱氧三磷酸腺苷(dATP)存在的条件下,能与凋亡相关因子1(Apaf-1)结合,使其形成多聚体,并促使半胱氨酸蛋白酶(caspase)9与其结合形成凋亡小体,caspase-9被激活,激活的caspase-9能激活其他的caspase如caspase-3等,从而诱导细胞凋亡.
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凋亡相关因子 p21和 Caspase -3及 Survivin 在胃癌中的研究进展
随着社会的发展，人类文明的进步，肿瘤已成为威胁人类生命和健康的首要疾病。肿瘤是机体在多种因素的作用下基因水平失调形成的新生物［1］。研究发现，发达国家和我国大中城市的癌症死亡人数占全部死亡人数的第一位，对人类的生存已构成严重威胁。胃癌（gastric carcinoma）起源于胃黏膜上皮细胞，临床表现无特异性，是癌症死亡的重要原因之一，其发生、发展涉及到细胞内基因水平、蛋白水平的相互交叉等共同参与，是中国乃至全世界多发肿瘤之一，在各种恶性肿瘤中位于第二位，反映了公众的健康问题［2-3］。一般而言，胃癌患者五年的平均存活率大约22%，进展期胃癌患者的五年存活率不到5%，由于胃癌的浸润和迁移，胃癌根治术后易复发。随着对胃癌发病机制研究的深入，人们发现胃癌的发生、发展与胃癌细胞的凋亡有着密切关联，胃癌的自主增殖和凋亡失控是肿瘤发生、发展的本质的生物学特性，因而研究细胞凋亡在胃癌的发生、发展中起重要作用［4］。
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心力衰竭与细胞凋亡研究进展
细胞凋亡是心力衰竭时心脏重构的重要方面，抑制心肌细胞凋亡能够减轻心脏重构，改善心功能。心力衰竭时心肌细胞凋亡发生机制复杂，目前没有统一定论。现将心力衰竭与细胞凋亡的研究进展综述如下。
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参附注射液对实验性心力衰竭大鼠血浆凋亡相关因子的影响
目的 观察参附注射液对实验性心力衰竭大鼠血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及可溶性Fas(sFas)含量的影响,探讨参附注射液在心力衰竭治疗中抗凋亡作用机制.方法 采用结扎冠状动脉左前降支近端的方法建立心肌梗死后心力衰竭大鼠模型.将大鼠随机分为假手术组(14只,除不结扎冠状动脉左前降支外,余同手术组)CAF组(13只)和参附组(11只).参附组腹腔注射参附注射液[6.2 mL/(kg·d)],CHF组和假手术组给予同等量生理盐水,每日1次腹腔注射,连续4周.给药4周后颈动脉取血,采用双抗体夹心ELISA法测定血浆中TNF-α、IL-6及sFas含量.结果 与假手术组相比,CHF组大鼠血浆TNF-α、IL-6及sFas浓度明显增高(P<0.01),参附注射液能降低CHF大鼠血浆TNF-α、IL-6及sFas的水平(P<0.05).结论 参附注射液改善梗死后心衰大鼠的心功能,可能与抑制凋亡相关因子减少心肌细胞的凋亡,发挥心肌细胞的保护作用有关.
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金钗石斛多糖对2型糖尿病大鼠心肌组织凋亡相关蛋白的影响
目的 探讨金钗石斛多糖对2型糖尿病大鼠心肌组织Bcl-2、Bcl-xl、Bax和Bad凋亡蛋白表达的影响,探讨其对心肌的保护作用机制.方法 60只雄性SD大鼠,在适应性喂养2周后随机分为正常对照组、2型糖尿病心肌损伤组(模型组)、金钗石斛多糖低、中和高剂量治疗组以及阳性药物贝那普利治疗组(阳性对照组),每组均为10只.造模成功后,给予相应治疗,正常对照组和模型组给予1 mL/(kg·d)生理盐水灌胃;金钗石斛多糖3个剂量组分别给予金钗石斛多糖100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d)和400mg/(kg·d)灌胃治疗;阳性对照组则给予贝那普利1 mg/(kg·d)灌胃治疗,8周后检测心脏指数,之后处死大鼠,检测血糖和胰岛素含量,HE染色检测心脏病理学,荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织中Bcl-2、Bcl-xl、Bax和Bad的表达特点.结果 正常对照组大鼠精神状态良好,模型组有明显的多饮、多食和多尿的特点,金钗石斛多糖3个剂量治疗组和贝那普利阳性对照组大鼠一般情况较模型组明显好转,但和正常对照组比较差异仍较明显.模型组较正常对照组血糖和胰岛素抵抗指数明显升高,胰岛素含量明显下降;金钗石斛多糖有一定降低血糖、升高胰岛素含量的作用;而贝那普利改善血糖和胰岛素抵抗指数能力较差.模型组较正常对照组左室收缩压(LVSP)及左室内压大变化速率(±dp/dtmax)显著降低,左室舒张末压(LVEDP)明显升高;金钗石斛多糖3个剂量治疗组和贝那普利阳性对照组可以明显升高大鼠LVSP和±dp/dtmax,降低LVEDP(P＜0.05),而金钗石斛多糖中剂量组和贝那普利阳性对照组疗效基本一致.病理学检测可见,正常对照组大鼠心肌纤维排列整齐,细胞核大小均一;模型组则有明显的心肌纤维断裂和细胞核大小不均一;金钗石斛多糖3个剂量治疗组和贝那普利阳性对照组对改善受损的心肌具有明显的促进作用.模型组较正常对照组Bcl-2、Bcl-xl表达明显降低,Bax及Bad明显升高;金钗石斛多糖和贝那普利可以明显升高Bcl-2和Bcl-xl表达,降低Bax和Bad表达(P＜0.05).结论 高脂高糖饮食6个月构建的2型糖尿病大鼠具有明显的心肌损伤特点,而金钗石斛多糖不仅对降低血糖和升高胰岛素含量有明显的促进作用,其对心脏基本指数的改善也有明显的促进作用,其作用机制可能是通过调节凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl、Bax和Bad实现的.
