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呼吸道合胞病毒激活靶细胞NF-κB的机制及途径研究进展
NF-κB是一个重要的转录调节因子,调控许多生物活性介质基因的转录和表达.静息时,NF-κB与IκB结合以非活性异寡聚体的形式存在于胞浆中,胞外刺激通过不同的信号转导途径激活NF-κB.本文主要介绍了呼吸道合胞病毒作用于靶细胞通过蛋白激酶C、磷脂酰肌醇激酶3、丝裂原活化蛋白激酶及蛋白磷酸酶2A等介导的信号级联反应活化NF-κB的机制及途径的研究进展.
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子宫内膜癌组织中磷酸化蛋白激酶B及Bim蛋白表达的研究
3-羧基磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B (PKB)信号转导途径是调控细胞凋亡的重要途径,PKB是PI3K的下游因子,PKB磷酸化激活后,可通过对多种凋亡相关因子的调节来抑制细胞凋亡.Bim为bcl-2蛋白家族中仅含有BH3区域的成员之一.有研究表明,活化的PKB可通过作用BH3区域,进而抑制bcl-2家族相关蛋白的促凋亡活性[1].目前,国外有关Bim基因表达的研究多集中在造血干细胞及粒细胞[2],在子宫内膜癌方面的研究尚少.本研究对子宫内膜癌组织的磷酸化PKB(p-PKB)与Bim蛋白表达水平进行检测,并探讨其与子宫内膜癌发生的关系.
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氟砷联合染毒对仔鼠空间学习记忆能力及海马和大脑皮质组织中磷脂酰肌醇激酶和苏氨酸激酶蛋白表达的影响
目的 探讨氟、砷及其联合染毒对仔鼠空间学习记忆能力及脑组织中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和苏氨酸激酶(AKT)蛋白表达的影响.方法 将32只SPF级SD孕鼠随机分为4组,分别为对照(自来水)组、氟(100 mg/L NaF)染毒组、砷(75 mg/L亚砷酸钠)染毒组和联合(100 mg/L NaF+75 mg/L亚砷酸钠)染毒组,每组8只.从妊娠第0天至仔鼠出生后21d(postnatal day 21,PND21),孕鼠经自由饮水方式进行染毒,断乳(PND21)后仔鼠饮用与母鼠相同浓度的染毒溶液继续染毒至PND42.采用Morris水迷宫检测PND21和PND42仔鼠的空间学习记忆能力,采用Westem blot方法检测海马和大脑皮质组织中PI3K、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达水平.结果 训练第1天时,仅砷染毒组PND21仔鼠的逃避潜伏期长于对照组;训练第11天时,仅联合染毒组PND21仔鼠的逃避潜伏期长于氟染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,训练第4天及第11天时联合染毒组PND21仔鼠首次到达平台时间均较长;训练第4天时砷染毒组PND21仔鼠的目标象限停留时间较短,联合染毒组PND21仔鼠的穿台次数较少,差异均有统计学意义(P＜0.05).训练第11天时,仅砷染毒组PND21仔鼠的穿台次数少于氟染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组、氟染毒组相比,砷染毒组和联合染毒组PND42仔鼠在训练第1天和第11天的逃避潜伏期时间均延长;且联合染毒组PND42仔鼠在训练第2天的逃避潜伏期长于对照组和砷染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).训练第4天时,联合染毒组PND42仔鼠的首次到达平台时间长于对照组和氟、砷染毒组;联合染毒组和氟、砷染毒组PND42仔鼠的目标象限停留时间均短于对照组,穿台次数少于对照组;且联合染毒组和砷染毒组PND42仔鼠的穿台次数少于氟染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).训练第11天时,联合染毒组和砷染毒组PND42仔鼠的首次到达平台时间均长于对照组和氟染毒组;联合染毒组和氟、砷染毒组PND42仔鼠的目标象限停留时间均短于对照组;而4组PND42仔鼠的穿台次数间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,除PND42氟染毒组AKT蛋白的表达水平较高(P＜0.05)外,PND21和PND42氟、砷染毒组及联合染毒组仔鼠海马组织中PI3K、AKT及p-AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与氟染毒组相比,PND21时联合染毒组及PND42时砷染毒组和联合染毒组仔鼠海马组织中AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,除PND42氟、砷染毒组AKT蛋白外,PND21和PND42氟、砷染毒组及联合染毒组仔鼠大脑皮质组织中PI3K、AKT及p-AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与联合染毒组比较,仅氟、砷染毒组PND42仔鼠大脑皮质组织中AKT蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 氟、砷单独及其联合染毒可能通过降低仔鼠海马和大脑皮质组织PI3K、AKT和p-AKT蛋白的表达水平,损伤其空间学习记忆能力.
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葡萄糖刺激胰岛素分泌中活性氧及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化情况
目的 研究葡萄糖刺激后胰岛素分泌过程中活性氧(ROS)及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化.方法 不同浓度葡萄糖(0、5、10、15、20、25 mmol/L)分别干预胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)细胞24、48 h后,采用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)荧光法检测细胞内ROS水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测胰岛素分泌,采用蛋白印迹(Western blot)法检测磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达.结果 随葡萄糖浓度的升高,INS-1细胞分泌胰岛素水平增加,细胞内ROS水平上升,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相同刺激条件下,细胞内PTEN蛋白表达逐渐下降,P-AKT表达逐渐升高,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路可能为参与调节葡萄糖刺激胰岛素分泌的信号通路之一.
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RKIP对前列腺癌PC3细胞侵袭、转移的影响及机制
目的 探究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)过表达对前列腺癌PC3细胞侵袭、转移及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核转录因子(NF-kB)通路的影响.方法 蛋白免疫印迹(Western blot)检测前列腺癌肿瘤组织、癌旁组织中RKIP蛋白表达情况.将pcDNA3.0-RKIP、pcDNA3.0、RKIP-shRNA和shRNA-NC转染至前列腺癌细胞,命名为pcDNA3.0-RKIP组、pcD-NA3.0组、RKIP-shRNA组、shRNA-NC组,以未经转染的PC3细胞作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PC3中RKIP mRNA表达情况,分别采用transwell小室和划痕实验检测PC3细胞侵袭和转移能力,蛋白Western blot检测PC3细胞中PI3K、Akt、及NF-kB表达情况.结果 前列腺癌肿瘤组织RKIP蛋白表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);pcDNA3.0-RKIP组PC3细胞中RKIP mRNA表达水平显著高于RKIP-shRNA组和对照组(P<0.05);pcDNA3.0-RKIP组PC3细胞侵袭和迁移能力显著低于RKIP-shRNA组和对照组(P<0.05);pcDNA3.0-RKIP组PC3细胞中PI3K、p-Akt和NF-kB的表达水平显著低于RKIP-shRNA组和对照组(P<0.05).结论 RKIP过表达能够抑制前列腺癌细胞侵袭和转移,并能够抑制PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白的表达,为前列腺癌的靶向治疗提供一定的理论依据.
