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组织细胞固定保护液在AKP组化染色中的应用
传统的碱性磷酸酶(AKP)组织化学染色法,染色前多采用10%福尔马林-钙液及丙酮等固定液在4℃冰箱内对组织进行处理后,再进行冷冻制片或低温石蜡包埋切片.在实际应用过程中,我们发现经这些方法处理的组织,染色后酶活性明显降低且定位不佳.我们在酶染色前改用自行研制的组织细胞固定保护液(tissue cell fix protection solution,TCFPS)对组织进行前期处理,可收到理想染色效果.
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离体甲的甲真菌病模型研究
甲真菌病是真菌侵犯甲板引起的感染性疾病.发病率为2%~13%,是常见的甲疾病.甲癣则是皮肤癣菌侵犯甲板引起的甲病.为探讨不同真菌在甲真菌病中的致病作用及凝集素组织化学染色法对判断甲真菌病病原菌的意义,特制备离体甲的甲真菌病模型,进行组织病理检查、扫描电镜观察,并研究甲板中真菌与4种不同凝集素的结合形式.
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家兔胫骨前肌神经两型纤维分布
本研究以家兔为实验动物,采用乙酰胆碱酯酶(AchE)组织化学染色法对家兔坐骨神经的下属分支胫骨前肌神经进行定性研究,并对其内2种主要神经纤维计数,以期了解该神经中躯体运动纤维和躯体感觉纤维的分布情况,进一步了解该肌在后肢运动中的作用.
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改良碱性磷酸酶染色法
1939年Gomori首次提出碱性磷酸酶组织化学染色法用于哺乳动物神经系统血管内皮,1951年Gomori修改了自已的方法,并称为"钙钴法".1984年Bell在Gomori碱性磷酸酶染色法的基础上进行了改良,用于人脑海马和距状裂区的毛细血管取得成功[1].本文以Bell法为基础,对其法的某些步骤进行了简化和改良,应用于脑微血管的研究,同时可以显示出脑微动脉、微静脉.现将此法介绍如下.
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用NDP组化方法显示猴脊髓中间外侧核一氧化氮合酶阳性神经元的实验技术探讨
一氧化氮(Nitric Oxice,NO)作为一种内源性的活性物质,是二十世纪九十年代初新发现的一类神经递质,以其广泛的存在和独特的作用,成为近年来科学研究的热点.一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)是NO生成的关键因素.NO是气体,结构简单又不稳定,易扩散、且生物半衰期仅5秒,为了反映NO在中枢神经系各部内的存在和分布,一般采用显示NOS的方法来间接反映NO的水平.Hope[1]等人证明,NOS与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶(NADPHd)为同一种物质,因此,常常采用NADPH-d组织化学染色法(简称NDP法)来显示NOS,从而间接分析NO含量的改变[2,3,4,5].本文用NDP法研究恒河猴(Macaca Mulatta)脊髓中间外侧核含NOS的阳性细胞,取得满意结果.该法具有简便、快捷等特点,尤其适合做中枢神经核团的定位,细胞计数等形态学计量研究.
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改良Warthin-Starry染色技术的新用途
我们用改良Warthin-Starry(W-S)染色方法检查一些病原体取得较好效果,现将我们的工作体会介绍给同行。1材料和方法 1.1材料实验材料均取自外检组织,包括梅毒螺旋体感染的皮肤粘膜组织、鼻硬结症之鼻腔粘膜,侵袭性霉菌病之上颌窦粘膜组织、胃炎粘膜组织及淋病炎性渗出物涂片。组织均经常规处理、石蜡包埋,每份切成数张6μm厚的切片备用。涂片常规固定1 min后漂洗吹干备用。
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近红外光谱分析法快速原位鉴别周围神经束性质
周围神经损伤后的修复中如何鉴别其运动束与感觉束,仍是困扰临床的一大难题.现有的鉴别方法解剖法、同位素法、组织化学染色法[1]、电刺激法等,由于存在检测时间长,需切取神经断端,准确性低等缺点,并不能真正用于临床.如何寻找一种快速、准确无创原位鉴别周围神经束性质的方法,成为人们努力的方向.近红外光谱技术是近年来发展起来的一种无创、简便的分析方法,已广泛应用于工业和生物医学领域,为无创测血糖、血氯含量及药品成分及含量的检测等.我们用近红外光谱分析技术对Beagle犬的脊神经前根和后根进行采样分析,以期实现快速原位鉴别周围神经运动束与感觉束.
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酶组织化学法观察喉内淋巴管细微分布
有关喉内淋巴管分布和吻合的研究报道较多,但尚有争议.酶组织化学染色法研究淋巴管细微分布比淋巴管间接注射法更客观,但应用该法研究喉内淋巴管分布的报道甚少.本文采用该法对喉内不同部位淋巴管细微分布进行观察.
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喉内微血管和微淋巴管的分布及其意义
喉癌的浸润和扩散与喉内微血管和微淋巴管分布密切相关.观察喉内微血管和微淋巴管分布,对研究喉癌扩散规律、喉癌术式选择和手术安全边缘界定等都有重要的意义.本文采用酶组织化学染色法,观察喉内各部组织微血管和微淋巴管分布的差异,借以探讨其临床意义.
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调肝颗粒剂阻断肝癌前病变的机理研究
目的:探讨调肝颗粒剂及其拆方在阻断肝癌前病变的作用.方法:用二乙基亚硝胺(DEN)建立Solt-Earber二步肝癌前短期动物模型,用调肝颗粒剂全方(Ⅰ号药物)及调肝颗粒剂拆方(Ⅱ号药物)进行干预,应用流式细胞术(FCM)测量肝癌前病变大鼠肝组织的DNA相对含量;取肝组织进行病理组织形态及超微结构的观察.采用组织化学染色法检测肝癌前病变中r-谷氨酰转肽酶、葡萄糖-6磷酸脱氢酶、三磷酸腺苷酶的活性.采用琼脂糖电泳法测定各组动物血清中乳酸脱氢酶(LDH)总活力及其同功酶、碱性磷酸酶(ALP)同功酶、血清r-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(r-GT-Ⅱ).电子自旋共振(ESR)技术测定羟自由基清除率,改良的硫代巴比土酸(TBA)测定过氧化脂质(LPO),用DTNB直接显色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD).c-myc、N-ras基因检测采用核酸原位杂交技术.
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1,25(OH)2D3及其类似物对人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化调节作用的分子机制
目的:研究维生素D3受体(VDR)及其靶基因p21在1,25(OH)2D3及其类似物调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用.方法:构建VDR反义cDNA的真核表达载体,用Lipofectamine法转染人骨肉瘤细胞系HOS-8603,经G418筛选后获得稳定转染的单克隆细胞株(VDRasl~6),并采用免疫组化方法和瞬时转染报告基因技术分别检测VDRas3细胞内源性VDR蛋白的表达情况和转录激活功能;继而利用VDRas3细胞研究VDR被阻断后细胞增殖以及靶基因p21 mRNA表达的变化.用定量RT-PCR法检测1,25(OH)2D3对p21 mRNA表达的诱导作用;构建p21真核表达载体(pcDNA3-p21)并稳定转染HOS-8603细胞(细胞株命名为HOS-p21),Western blot法鉴定HOS-p21细胞内p21蛋白的表达情况;采用组织化学染色法检测细胞内碱性磷酸酶(AKP)的表达,观察该细胞的生长情况并绘制生长曲线.结果:VDRas3细胞内源性VDR蛋白的表达量低于对照细胞;1,25(OH)2D3作用72 h后,对照细胞的报告基因CAT转录活性增加约3.5倍,而VDRas3细胞CAT的转录基本不受激素诱导;在内源性VDR被阻断后,1,25(OH)2D3及其类似物对细胞增殖的抑制作用以及对VDR的靶基因p21 mRNA表达的诱导作用均明显减弱.1,25(OH)2D3作用2 h即可诱导HOS-8603细胞内源性p21的表达,4 h达高峰,24 h仍未回降.细胞过度表达p21后生长速度明显减慢,培养6 d时细胞数为未转染细胞的50%;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶的表达明显增强.结论:1,25(OH)2D3及其类似物对HOS-8603细胞增殖抑制作用是由VDR介导的.1,25(OH)2D3对p21 mRNA诱导作用可能是激素调节细胞增殖分化的重要机制之一.