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石蜡包埋尤文瘤/外周原始神经外胚瘤中EWS-FLI1融合基因的表达
目的运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测石蜡包埋尤文瘤/外周原始神经外胚瘤(ES/pPNET)组织中特异性染色体易位融合基因EWS-FLI1/ERG mRNA的表达并探讨其诊断意义.方法运用一步法RT-PCR技术检测25例石蜡包埋ES/pNETs和15例其他小圆细胞肿瘤(包括8例胚胎型和腺泡型横纹肌肉瘤、4例低分化滑膜肉瘤、2例神经母细胞瘤和1例淋巴瘤)组织中EWS-FLI1/ERG的表达.结果25例ES/pPNET中20例检测到EWS-FLI1/ERG融合基因的表达(80%),15例对照组均未检出EWS-FLI1的表达.结论EWS-FLI1/ERG mRNA的表达是ES/pPNETs分子诊断的可靠指标,一步法RT-PCR是一种适用于临床常规石蜡包埋组织EWS-FLI1融合基因表达的检测方法.
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颈部骨外型尤文氏瘤1例
1 病例报告女,27岁,已婚.以左颈肿物3个月,于2000-06入院.查体:一般情况可,左颈至肩部,左锁骨上肿物12 cm×10 cm×8 cm,质中,有触痛,固定,界限不清,表面凹凸不平,余无殊.行肿物活检,病理诊断为骨外型尤文氏肉瘤.免疫组化:VM(),NSE(+),SYN(+),HHF39(-),CK(-),CD99(-),S100(-),DESMIN(-).常规X线见左颈软组织肿胀,颈椎及锁骨未见异常.CT示:左胸锁乳突肌后方,斜角肌区见一软组织肿物,呈浸润性生长,形态不规则,边缘模糊不清,大截面积8 cm×4 cm,密度欠均匀,平扫CT值38～49 Hu,增强后38～74 Hu,病灶内见低密度坏死区.双锁骨、颈椎骨质未见异常.经放疗加化疗1个疗程后肿块明显缩小,并行左颈清扫术,患者目前已存活2 a,未见远处转移或复发.
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盆腔尤因肉瘤/外周原始神经外胚层瘤1例
患者男,34岁,主因“体检发现盆腔包块1个月”就诊.查体:下腹部触及明显包块,约8.0 cm×6.0 cm,质软、活动度较好,有轻压痛.CT:左侧盆腔内见团状等密度为主的等低混杂密度影,边缘光滑清晰,呈椭圆形,约68.87 mm×56.08 mm×61.71 mm,CT值约1～43 HU,膀胱及直肠轻度受压(图1A～1C).CT提示:盆腔内占位性病变,良性可能性大,神经来源?行盆腔肿瘤切除术,术中见包块位于腹膜后,呈类圆形,直径约6.90 cm,被覆包膜,与周围组织界限清晰,切面呈灰白色,实性部分质软.免疫组化:CK7(+),CK20(-),NSE(阳性细胞数约20％),S-100(阳性细胞数约30％),SYN(+),MyoD1(-),CK(阳性细胞数约30％),Vimentin(阳性细胞数约20％),CD30(-),WT-1(-),CD56(+),P53(+).术后病理诊断(图1D):符合尤因肉瘤/外周原始神经外胚层瘤(primitiveneurotodermaltumour,PNET).
关键词： 肉瘤 Ewing 外周原始神经外胚层瘤 诊断显像 -
婴儿股骨尤因肉瘤膨胀性改变1例
患儿为8个月女婴,体质量约8 kg,因"发现右侧股骨渐进性异常增粗2个月"就诊.X线检查示右侧股骨明显增粗,骨皮质菲薄、欠连续,骨小梁消失,其内可见片状高密度影,骨骺密度减低,关节间隙正常,周围软组织层次不清(图 1A),CT:右侧股骨膨大,略显弯曲,骨皮质菲薄、欠连续,正常骨质结构消失,代之以密度不均匀的软组织密度影,其内可见多发斑片状钙化灶;骨骺可见类似改变,骨小梁消失,皮质尚连续(图1B、C).影像学诊断:右侧股骨占位性病变,良性中瘤可能性大.行有股骨肿瘤切除术,术中见肿瘤质地柔软,有包膜,切开包膜后出血为暗红色,约20 ml.术后病理诊断为尤因肉瘤(Ewing's Sarcoma,ES).
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儿童颈椎硬化型尤因肉瘤1例
患儿女,13岁,无明显诱因出现颈部疼痛6个月,呈阵发性针刺样,活动后加剧,平卧休息后缓解,同时颈部活动受限,右上肢、右手麻木,左上肢疼痛.查体:脊柱生理弯曲存在,未见明显侧凸及后凸畸形.颈、胸椎棘突压痛,叩击痛明显,右上肢、手感觉较左侧减退.四肢肌力正常,病理反射阴性.实验室检查:血沉35.00 mm/h.C反应蛋白5.14 mg/L.X线平片:第7颈椎及右侧横突骨质密度增高(图1).CT:第7颈椎椎体及右侧横突骨质密度增高,边缘不光整,呈毛刷状(图2).MRI:颈7椎体T1WI、T2WI均呈低信号,其横突及部分棘突信号异常,右侧较明显,椎管内见等T1等T2纵行条状信号(图3、4),边缘欠清楚,增强后轻度强化,局部脊髓受压向左偏.考虑为感染性病变.患儿行颈7椎体占位活检术,术中见颈椎前方约6 mm×3 mm鱼肉样组织.病理诊断:颈7椎体尤因内瘤.
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鼻咽部骨外尤因肉瘤1例
患者,男,47岁,主因“双侧鼻塞伴右耳听力下降2个月,头痛3天”入院.CT检查:鼻咽侧壁、顶后壁软组织增厚,咽旁间隙变窄,边界欠清;增强扫描病灶内可见明显不均匀强化(图1A),邻近部分骨质吸收变薄.MR检查:鼻咽顶后壁及双侧壁黏膜明显增厚,双侧咽旁间隙结构不清,双侧鼻腔、筛窦可见不均匀软组织信号,增强扫描病灶明显强化(图1B),前颅窝底面及前纵裂膜脑膜不规则增厚强化.
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髂骨原发骨肉瘤和尤文肉瘤的影像学分析
目的 对比分析髂骨原发骨肉瘤和尤文肉瘤的X线、CT和MRI特征,探讨其临床特点.方法 回顾性分析13例髂骨骨肉瘤患者及10例尤文肉瘤患者的临床和影像学资料.结果 骨肉瘤患者发病年龄12～51岁,平均(26.6±13.5)岁,尤文肉瘤患者发病年龄4～22岁,平均(16.2±8.2)岁.骨肉瘤患者混合型骨质破坏7例、成骨型骨质破坏3例;瘤骨形态多为棉絮状、针状、不规则形,体积较大.2例骨肉瘤内见多囊性灶并液-液平面.尤文肉瘤患者混合性骨质破坏8例,溶骨性骨质破坏2例;层状骨膜反应7例;尤文肉瘤内可见反应性新生骨,多为淡片状.骨盆内尤文肉瘤大层面面积为(38.55±28.74)cm2,盆外为(22.85±15.70)cm2.结论 髂骨骨肉瘤的发病年龄较尤文肉瘤偏大;大面积瘤骨、单纯成骨性骨质破坏和软组织肿块内出现液-液平面提示骨肉瘤;层状骨膜反应和倾向于向骨盆内生长的软组织肿块多见于尤文肉瘤.
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脊柱尤文肉瘤的临床及病理特征和MRI表现
目的 探讨脊柱尤文肉瘤的临床、病理及MRI特点.方法 回顾性分析9例经手术病理或穿刺活检证实的脊柱尤文肉瘤的临床、病理特征及MRI表现.结果 9例脊柱尤文肉瘤中,发生于颈椎、胸椎和腰椎各2例,骶椎3例.6例进行了MRI检查,均显示椎体骨骼信号异常,在T1WI上4例表现为中等信号,2例表现为稍低信号;在T2WI上表现为稍高信号,钆喷替酸葡甲胺(Gd-DTPA)增强后不均匀强化.3例表现为溶骨性骨质破坏、椎体压缩变扁;3例表现为椎体轻度膨胀性溶骨性破坏.相邻的椎间隙无狭窄、椎间盘信号无异常;均见周围明显的软组织肿块,增强后明显强化.HE染色并镜下观察肿瘤细胞均呈小圆形,不伴有Homer-Wright(H-W)菊形团排列;PAS染色阳性6例,NSE弱阳性2例.结论 脊柱原发性尤文肉瘤的MRI表现有一定的特点,但缺乏特异性.当患者为儿童或青少年,且影像学表现为溶骨性骨质破坏伴明显的软组织肿块时需考虑尤文肉瘤的可能.
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腰椎原发尤文肉瘤的诊断学特征
目的 探讨腰椎原发尤文肉瘤的临床、病理学特征和影像学表现.方法 对1例原发于腰椎尤文肉瘤患者的实验室检查、CT、磁共振、病理检查等进行分析并复习文献.结果 患者实验室检查结果,除神经元特异性烯醇化酶111.30μg/L外,余皆正常;X线显示T5椎体楔形变,相邻间隙变窄,CT结果示T5椎体楔形变,局部骨质后突.磁共振结果显示多椎体破坏,并局部软组织肿块形成.免疫组化结果:S-100散在+,突触核蛋白(Syn)局灶+,增值指数67(Ki-67):10％～30％,FLI-1弱+,波形蛋白(Vim)+,CD99+,CD56+,肌酸激酶(CK)-,CD3-,CD20-,甲状腺转录因子-1(TTF-1)-,髓过氧化物酶(MPO)-,CD34-,末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)-,嗜铬蛋白A(CgA)-,CD7-,CD38-,B细胞特异性激活蛋白(PAX-5)-,CD138-,CD79a-,CK8/18-,病理诊断为尤文肉瘤.结论 尤文肉瘤病程短,早期即可发生广泛转移,预后差,结合临床及影像学检查,可以对该病做出诊断.
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肾脏未分化网状细胞肉瘤一例报告并文献复习
目的 探讨肾脏未分化网状细胞肉瘤(尤因肉瘤)的临床诊治及预后特点. 方法 肾尤因肉瘤患者1例,男,33岁.体检发现左肾肿物3d.B超检查见左肾实质下部占位病变,边界清楚,其内血流信号丰富.CT检查示左肾下极类圆形肿块,5.1 cmu×4.7 cm大小,平扫中等密度,内见多个小斑片状低密度区,增强扫描明显不均匀强化,静脉期强化明显,考虑为肾癌.行后腹腔镜下左肾根治性切除术,手术顺利.检索相关文献复习讨论. 结果 病理报告:左肾下极直径4.0 cm灰白色肿物,部分坏死,瘤细胞小圆形,较均匀一致,成片分布,胞界不清,胞质稀疏,细胞核大小较一致,可见核分裂象.免疫组化染色:Vimentin(+),CD99(+),PAS(+),WT-1(-).病理诊断为肾尤因肉瘤.术后化疗:短周期(环磷酰胺+长春新碱+吡柔比星,每天1次,连续2d),长周期(异环磷酰胺+依托泊苷,每天1次,连续6d),长短周期交替进行,共6个周期,周期间隔21 d.随访14个月未见复发. 结论 肾尤因肉瘤临床罕见,恶性程度高,生物学行为进展快,诊断主要依据病理组织学及免疫组化染色检查,治疗以手术切除加放、化疗为主,但预后不佳.
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骨盆尤文肉瘤31例治疗结果分析
目的 了解骨盆尤文肉瘤综合治疗的肿瘤学和功能学的预后.方法 回顾性分析2001年7月至2008年7月符合入选标准的31例初治的骨盆原发尤文肉瘤的患者资料,其中原发肺转移10例.所有患者都接受了包括新辅助化疗、手术以及术后辅助放疗的综合治疗措施.28例患者接受了保肢手术,3例患者接受半盆离断术.对治疗的并发症进行记录,同时应用国际保肢学会功能评分( MSTS)93标准进行功能评分.对观察指标进行Kaplan-Meier生存分析,Log-rank检验显著性,对有显著差异的因素进行Cox多因素分析.结果 随访时间为13～121个月,平均46.8个月.5年整体生存率为42.3％.在单因素分析中,肿瘤直径＜10 cm(x2 =4.382)、外科分期为ⅡB期(x2 =4.521)、获得广泛性切除(x2=4.851)的患者预后较好(P＜0.05)；在多因素分析中,肿瘤分期(RR =2.480,95％CI:0.857 ～7.173)和切除的外科边界(RR=2.576,95％ CI:0.474～14.011)是影响预后的独立危险因素.采用MSTS93标准对患者的功能进行评分,平均分为63.3％,并发症的发生率为29.0％ (9/31).结论 对于骨盆尤文肉瘤,外科分期、切除的外科边界是影响预后的独立危险因素.就诊时出现转移和(或)切缘阳性的患者应该采取更为积极的治疗.外科手术产生了一定的功能障碍,但是患者经过康复治疗,多数患者能够取得较满意的功能评分.
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缺氧反应元件增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/GCV对乏氧环境Ewing肉瘤细胞杀伤作用的研究
目的 构建一种由缺氧反应元件(hypoxia responsive element,HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)基因的真核表达载体,观察HRE能否增强HSV-TK/GCV(gancyclovir,GCV)系统对乏氧环境中的人Ewing's肉瘤细胞系SK-ES细胞的杀伤作用,为弥补放、化疗的不足,探索有效的治疗方法.方法 (1)将合成的HRE片断,插入到pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP)的双顺反子荧光蛋白报告基因的真核启动子的增强子部位,获得重组质粒pHRE;以PCR法扩增HSV-TK基因中TK基因片断,将其克隆到pIRES2-EGFP及pHRE的双顺反子荧光蛋白报告基因上游的多克隆位点,获得重组质粒pTK及pHRE-TK.(2)通过脂质体将pHRE-TK、pHRE、pTK及pIRES2-EGFP导入SK-ES细胞,分别在乏氧(O2浓度为3%)和富氧(O2浓度为21%)环境中培养,荧光显微镜观察报告基因增强性绿色荧光蛋白表达变化,并进行荧光吸光度分析;再予以GCV处理5 d后,用MTF法检测GCV对培养细胞的杀伤效果.结果 (1)测序结果证实,重组质粒pHRE含HRE片断,pTK及pHRE-TK含HSV-TK片断,均为单拷贝正向插入,序列正确.(2)对比各组细胞EGFP荧光吸光度值发现:①在乏氧环境中培养,pHRE和pHRE-TK组细胞荧光吸光度值高于在富氧环境培养的荧光吸光度值(P＜0.01);②在乏氧环境培养,pHRE组和pHRE-TK组细胞荧光吸光度值高于pTK组和pIRES2-EGFP组(P＜0.01);③在富氧环境培养的各组细胞之间荧光吸光度值差异无统计学意义(P＞0.05).(3)对比GCV对各组细胞杀伤效果发现:①在乏氧、富氧两种环境培养的pHRE-TK和pTK组细胞对GCV的敏感性均高于pHRE组细胞(P＜0.01),敏感性随GCV浓度增加而增大;②在乏氧环境培养的pHRE-TK组细胞对GCV的敏感性高于pTK组(P＜0.01),而在富氧环境中培养的pHRE-TK组与pTK组细胞对GCV的敏感性差异无统计学意义(P＞0.05);③在乏氧环境培养的pHRE-TK组细胞对GCV的敏感性高于在富氧环境中培养的pHRE-TK组细胞(P＜0.01);而在乏氧、富氧两种环境培养的pTK组细胞对GCV的敏感性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 (1)成功地构建了含有HRE及HSV-TK基因片断的真核表达载体.(2)在缺氧的SK-ES细胞内,HRE使报告基因EGFP表达增强.(3)HRE能增强HSV-TK/GCV系统对乏氧环境中的SK-ES细胞的杀伤效率.
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尤文氏肉瘤九例临床特点分析
回顾分析了5所医院的9例尤文氏肉瘤患者的临床病理资料,对其症状、体征、Χ线检查、实验室检查进行分析.以疼痛就诊的8例,体温平均38.2℃,白细胞平均11.09×109L-1, AKP平均45.40 King-Armstrong U,ESR平均36.44 mm/h,Χ线检查7例有融骨性破坏,其中同时伴有骨膜反应者6例,无骨破坏及密度减低者1例,仅表现为骨密度减低者1例.通过分析发现,尤文氏肉瘤有如下特点:1)无明显诱因,以疼痛为主要症状;2)长管状骨尤文氏肉瘤易误诊为骨髓炎;3)脊柱尤文氏肉瘤不侵犯椎间盘组织;4)有的患者X线检查单纯表现为骨密度改变;5)也可发生于颅内、软组织;6)偶见于中年人;7)恶性程度高、转移早;8)误诊率高.
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三氧化二砷对尤文肉瘤细胞迁移和侵袭能力抑制作用的体外研究
目的 研究三氧化二砷在体外对尤文肉瘤细胞系迁移和侵袭能力的抑制作用.方法 通过噻唑蓝(MTT)实验选择对尤文肉瘤细胞系(A-673、RD-ES)无毒性的三氧化二砷浓度(＜2μmol/L)后,Transwell迁移和侵袭实验检测三氧化二砷作用下尤文肉瘤细胞的迁移和侵袭能力.Western blot实验及明胶酶谱实验检测PI3K-AKT通路相关作用蛋白及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化.结果 迁移和侵袭穿过Transwell基底膜的尤文肉瘤细胞的数量随着三氧化二砷浓度的增加而逐渐降低,经不同浓度三氧化二砷处理过的A-673迁移平均数量分别占未处理组的54.3％、49.0％和17.0％,差异有统计学意义(F=112.78,P＜ 0.01),在侵袭实验中分别为52.7％、32.3％和10.3％,差异有统计学意义( F=183.76,P＜ 0.01);经过不同浓度三氧化二砷处理后的RD-ES细胞迁移平均数量分别占未处理组的46.0％、39.0％和8.0％,差异有统计学意义(F=408.25,P＜0.01),在侵袭实验中分别为58.7％、22.3％和9.0％,差异有统计学意义( F=373.25,P＜ 0.01).PI3K-AKT通路相关蛋白和MMP-9表达水平下降.结论 低浓度三氧化二砷可以通过下调PI3K-AKT信号通路的表达来抑制尤文肉瘤细胞系的转移能力.
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口腔颌面部Ewing肉瘤/原始神经外胚层瘤的临床病理学研究
目的提高对口腔颌面部Ewing肉瘤/原始神经外胚层瘤(Ewing肉瘤/PNET)的临床病理特征的认识,减少误诊.方法收集四川大学华西口腔医学院病理科1970年1月至2004年12月临床病理诊断符合Ewing肉瘤/PNET的病例共15例,年龄1～49岁,平均14.5岁,主要表现为肿胀,影像学可见骨质破坏.结合文献对其组织学特征进行分析,并行免疫组化LSAB法染色,抗体为CD99(12E7)、波形蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100、突触素(Syn)、CD45(LCA)及结蛋白.结果①组织学特征:肿瘤主要由密集的小细胞组成,弥漫分布,纤维性条索将其分隔成不规则片块状,可见菊形团样结构,部分细胞含糖原.②免疫组化标记 :所选7例CD99 及波形蛋白均阳性, CD45、结蛋白均阴性;S-100阳性4例,NSE阳性3例,Syn阳性1例,2例对NSE、S-100、Syn均为阴性.结论口腔颌面部Ewing肉瘤/PNET极为少见,多为青少年,免疫组化可辅助诊断,p30/32MIC2高水平表达对确诊有价值.
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疲劳骨折伴软组织坏死误诊为尤文肉瘤1例
1 病例资料患者,男,18岁,当年入伍新兵,主诉"左小腿疼痛、肿胀一个半月"入院.患者自述一个半月前长跑训练后出现左小腿疼痛,休息后明显缓解,活动后加重,无夜间痛,未进行任何治疗,左小腿逐渐出现红肿,疼痛逐渐加重,患者病程内体重下降3kg.外院拍摄X线片提示左胫骨上段横行骨折,可见棉絮状增生和虫蚀状骨质破坏,考虑诊断为左胫骨尤文肉瘤.
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骶骨尤文肉瘤和原始神经外胚瘤的影像表现
目的 探讨骶骨尤文肉瘤和原始神经外胚瘤的影像表现.方法 回顾分析经病理证实的17例骶骨尤文肉瘤和原始神经外胚瘤的影像表现.全部患者均行X线诊断,其中13例行CT检查,10例行MR检查,分析其影像特征.结果 17例骶骨尤文肉瘤和原始神经外胚瘤均为单发偏侧性病灶.12例X线及CT表现为溶骨性骨质破坏,其中2例伴骨质硬化；l例表现为弥漫性骨质硬化性改变；11例可见盆腔软组织肿块,9例侵犯邻近的大血管,4例侵犯患侧骶髂关节,增强扫描病灶8例呈轻中度强化,5例呈明显强化.MR检查8例为T1WI中等信号,10例患者T2WI及抑脂像为不均匀中高信号；4例患者DWI序列表现为明显的高信号,增强扫描7例呈明显强化.结论 骶骨尤文肉瘤和原始神经外胚瘤的影像表现具有一定特点,影像检查可为本病的临床诊断提供可靠依据.
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EWS易位分离探针荧光原位杂交和免疫组织化学抗体(FLI-1和CD99)在尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤诊断中的价值
目的:评价EWS易位分离探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)与免疫组化抗体CD99、FLI-1对尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤(Ewing's sarcoma/primitive neuroectodermal tumor,EWS/PNET)的诊断价值.方法:收集35例EWS/PNET和其他小圆细胞肿瘤24例,应用FISH检测EWS基因易位、免疫组化抗体CD99和FLI-1的表达,进行对比研究,评价各自及联合应用的诊断价值.结果:ISH检测在EWS/PNET的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为93.8%(30/32)、81.8%(18/22)、88.2%(30/34)和90%(18/20);CD99分别为100%(35/35)、58.3%(14/24)、77.8%(35/45)和100%(14/14);FLI-1分别为71.4%(25/35)、62.5%(15/24)、73.5%(25/34)和60%(15/25).不同指标两两联合应用敏感性、特异性和阳性预期值、阴性预期值为:CD99+FLI-1分别为71.4%(25/35)、75%(18/24)、80.6%(25/31)和64.3%(18/28);FLI-1+FISH分别为68.7%(22/32)、86.4%(19/22)、88%(22/25)和65.5%(19/29),CD99+FISH分别为93.8%(30/32)、95.5%(21/22)、96.8%(30/31)和91.3%(21/23).结论:应用EWS基因易位分离探针FISH检测染色体易位,是辅助诊断EWS/PNET非常敏感和特异的分子指标,与CD99联合应用诊断价值大.在缺乏FISH结果的情况下,FLI-1和CD99联合应用能够提高诊断的特异性.
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四种不同尤文肉瘤树突状细胞免疫疫苗的体内外抗肿瘤免疫应答研究
目的:制备4种尤文肉瘤树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,并比较和分析其在体内外抗肿瘤免疫反应中的效果.方法:从健康供者体中分离和培养外周血单核细胞,利用粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和白细胞介素(interleukin-4,IL-4)将单核细胞诱生为DC,并对其表型进行流式细胞仪分析,分别制备4种DC疫苗:(1)融合瘤,将DC与A673细胞进行电融合,并通过流式细胞仪检测荧光双染色融合瘤,以确定其融合率;(2)负载肿瘤裂解物DC,将DC与A673细胞反复冻融物共培养;(3)EWS/FLI1修饰DC,用编码EWS/FLI1的腺病毒转染DC;(4)未作处理的成熟的DC.将各种DC疫苗与组织相容性白细胞抗原(histocompatibility leukocyte antigen,HLA)相配的CD8+T细胞共培养,用ELISA试剂盒检测刺激增殖细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL)分泌干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)的量,用51Cr细胞杀伤试剂盒检测CTL在不同比例下对A673细胞的杀伤作用.通过腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),皮下接种A673细胞,构建重建人免疫系统的SCID鼠尤文肉瘤模型,应用ELISA试剂盒检测小鼠外周血中IgG的量,以确定免疫重建效果,并接种不同的DC疫苗,检测其对小鼠成瘤的影响.结果:流式细胞术检测出从外周血单核细胞诱生出的CD83、CD80、CD86及HLA-DR高表达的成熟DC.DCs/A673融合细胞的电融合效率达到16.32%.各种DC疫苗都可以诱导出有效的抗肿瘤免疫反应,IFN-γ分泌检测显示,融合瘤组较其他DC疫苗组产生CTL水平高,其后依次为肿瘤裂解物负载组、EWS/FLI1修饰组和未作处理组.而在体外杀伤A673实验中,融合瘤组杀伤效率高,肿瘤裂解物负载组次之,EWS/FLI1修饰组与未作处理组低,且后两组间差异无统计学意义.在抑制肿瘤生长的体内实验中,融合瘤组小鼠肿瘤小,EWS/FLI1修饰组、肿瘤裂解物负载组和未作处理组之间差别不大.结论:尤文肉瘤DC疫苗可以诱导有效的抗肿瘤免疫反应,将各种尤文肉瘤DC疫苗进行体内外综合比较时发现,融合瘤是佳的尤文肉瘤免疫疫苗.
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尤文肉瘤融合基因修饰的重组腺病毒的构建及其转染的树突细胞体外抗尤文肉瘤免疫应答
目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用.方法:将质粒Pec1/ EWS-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的hCMV启动子下游.将穿梭质粒和骨架质粒共同转化大肠杆菌BJ5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pADeasy-1/ EWS-FLI1.将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EWS-FLI1.扩增、纯化产生高滴度的Ad EWS-FLI1.转染PBMC并经过鉴定后致敏淋巴细胞,4 h 51Cr释放试验测定致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用.结果: 同源重组后产生的pADeasy-1/ EWS-FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/mL.转染PBMC后,RT-PCR证实有EWS-FLI1 mRNA的转录.致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系有明显的杀伤作用,效靶比在40:1时,对尤文肉瘤673细胞系的杀伤率为35.1800%±0.0128%,和对照组相比差异有统计学意义. 结论 :重组腺病毒Ad EWS-FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,Ad EWS-FLI1转染的DC可高效地诱发机体T细胞的特异性抗肿瘤免疫应答作用.
