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单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因对骨关节炎滑膜细胞的作用
目的 探讨单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-TK)对骨关节炎滑膜细胞的作用.方法 含HSV-TK基因的重组腺病毒转染骨关节炎滑膜细胞,通过丙氧鸟苷(GCV)处理观察滑膜细胞抑制率,经荧光染色分析细胞核形态,定量分析细胞凋亡及坏死情况.结果 含TK基因的重组腺病毒有效感染骨关节炎滑膜细胞,经GCV对滑膜细胞存在明显抑制(P＜0.05),转染细胞死亡存在坏死与凋亡两种.结论 HSV-TKPGCV系统对骨关节炎滑膜细胞存在明显抑制效果.
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血清胸苷激酶1和前列腺特异性抗原联合检测在前列腺癌中的临床应用
目的 探讨血清细胞质胸苷激酶1和前列腺特异性抗原联合检测在前列腺癌诊断中的临床价值 方法 利用免疫印迹法和化学发光法分别检测50例经病理活检确诊的前列腺癌患者(PCA组)的血清胸苷激酶1(TK1)和前列腺特异性抗原(PSA)的含量,并同时检测50例前列腺增生患者(BPH组)和80例健康体检者(对照组)的血清TK1和PSA的含量.结果 实验组TK1和PSA的浓度水平、联合检测的阳性率显著高于BPH组和对照组,差异有统计学意义.结论 血清TK1和PSA联合检测可作为前列腺癌的早期筛查方法之一,且两种检测方法可相互补充,具有辅助诊断及监测疗效等方面的临床作用.
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血清胸苷激酶1在健康体检中的应用
目的 评估血清胸苷激酶1(STK1)在健康体检人群中的临床应用价值.方法 选取健康体检人群8896例,采用高灵敏度点印染/免疫增强发光检测系统(ECL)进行STK1浓度测定,同时与常规体检平行进行.结果 以2 pmol/L为阈值,阳性组STK1水平为(5.47±4.23)pmol/L,明显高于阴性组(0.62±0.48)pmol/L(t=11.90,P=0.00).STK1水平高低无性别相关性,但与年龄老化有关,STK1阳性组平均年龄(48.2±12.0)岁,STK1阴性组平均年龄(41.8±12.3)岁(t=5.37,P=0.00).STK1阳性率为1.2％(108/8896),其中疾病包括:恶性肿瘤治疗前/后1.9％,癌前病变/良性肿瘤27.8％,非肿瘤增殖性疾病36.0％,乙型肝炎(乙肝)/幽门螺旋杆菌(HP)感染14.8％,脂肪肝10.2％,其他疾病占9.3％,与肿瘤没有直接或间接联系,STK1预示可能渐变为癌症的风险为90.7％.STK1阴性组未筛查出恶性肿瘤和癌前病变,而恶性肿瘤治疗后、良性肿瘤、非肿瘤增殖性疾病在与STK1阳性组相应疾病比较中,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 STK1能真实评估体内细胞异常增殖情况,适用于体检人群早期肿瘤风险筛查.对于STK1阳性者,需对导致STK1增高的其他非肿瘤因素进行排查,同时体检者要定期监测,以便尽可能给予预防治疗和早期诊断.
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胸苷激酶1在乳腺癌诊断和预后判断中的应用研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,全世界每年约有130万妇女患乳腺癌,约有50万妇女死于乳腺癌.我国虽属低发国家,但据北京、上海、天津等大城市的统计,乳腺癌发病率以每年约3%的速度增长,发病年龄也从50～55岁提前了10岁左右,逐渐成为城市女性的第一杀手.
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HER2状态与脑膜瘤分级及复发的相关性
目的 探讨HER2、细胞增殖指标Ki-67、胸苷激酶1(TK1)与脑膜瘤分级和良性脑膜瘤复发的相关性.方法 按2007年WHO神经系统肿瘤分类分级标准选取良性未复发的脑膜瘤、不典型脑膜瘤及恶性脑膜瘤石蜡标本各20例,并选取间期良性复发的脑膜瘤石蜡标本20例,将实验对象分为4组:良性非复发组、良性复发组、不典型组及恶性组.采用免疫组织化学MaxVision法对4组石蜡切片进行HER2、Ki-67、TK1蛋白的检测;并运用双色荧光原位杂交(FISH)法检测HER2蛋白表达阳性样本的HER2基因扩增情况.结果 免疫组织化学:(1)良性非复发组、良性复发组、不典型组和恶性组脑膜瘤的HER2阳性的例数分别为3例(15%)、6例(30%)、7例(35%)和10例(50%),随恶性程度增加,HER2蛋白阳性率升高(P<0.05);良性复发组HER2阳性率高于良性非复发组(P<0.05);(2)良性非复发组Ki-67和TK1的标记指数(U)均分别低于不典型组和恶性组(P<0.05);不典型组低于恶性组(P<0.05),随着恶性程度增高,Ki-67、TK1 LI升高;且良性复发组高于良性非复发组(P<0.05);(3)HER2与Ki-67、TK1均呈正相关(均P<0.01),Ki-67与TK1呈正相关(P<0.05).FISH法:(1)在26例HER2蛋白阳性表达的脑膜瘤组织中HER2/neu基因的扩增率为26.9%(7/26);HER2蛋白表达3+、2+者HER2/neu基因扩增比例分别为3,/4和4/6,均多于1+者(均P<0.01),3+者与2+者比较差异无统计学意义(P>0.05).(2)26例HER2蛋白阳性表达的脑膜瘤组织中9例存在17号染色体的非整倍性(34.6%),但HER2蛋白表达1+、2+、3+者间17号染色体的非整倍性出现率差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 HER2阳性且Ki-67或TK1 LI高提示脑膜瘤恶性程度较高或复发可能性较大.脑膜瘤组织中存在HER2/neu基因的扩增.HER2、Ki-67和TK1蛋白可能可以作为临床判断脑膜瘤生物学行为的参考指标.
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逆转录病毒载体介导的HSVtk基因表达及提高重组逆转录病毒滴度的研究
目的探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施.方法将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pReyTRE中,构建重组逆转录病毒载体.通过微乒乓感染法导入包装细胞PA317中,以潮霉素B筛选克隆细胞,浓缩克隆细胞上清制备重组逆转录病毒.在不同时间及不同丁酸钠浓度下,检测分析经筛选获得阳性克隆靶细胞中有无HSVtk基因的表达及如何获得高滴度的重组病毒液.结果成功构建了重组逆转录病毒载体RevTRE/tk,制备的重组病毒感染靶细胞后有HSVtk基因的表达.结论通过微乒乓感染法在包装细胞PA317培养30 h和10 mmol/L丁酸钠浓度下,经冷冻超速离心能获得携HSVtk基因的高滴度逆转录病毒颗粒,为其基因治疗的应用及研究奠定了基础.
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胸苷激酶1对恶性肿瘤的早期诊断价值
恶性肿瘤是当今威胁人类健康主要的疾病之一.目前对肿瘤的诊断主要靠影像学和细胞病理学技术,并且在患者具有明显占位性病变和临床症状后才能确诊.而患者出现占位病变时已非癌变初期,贻误了佳治疗时期,因此,寻找对癌症具有早期诊断作用的血清肿瘤标志物更具有临床价值.新研究发现了一种新的细胞增殖标记物—胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1),TK1在全身脏器肿瘤的发生、发展及其预后起重要作用.本文对TK1和其他常见肿瘤标志物在恶性肿瘤和癌前病变患者中的检测进行研究,以评价TK1在肿瘤早期诊断中的价值.报告如下.
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胸苷激酶1是恶性肿瘤预后判断的动态标志
据2011年官方统计,在我国城市人口中,恶性肿瘤所致患者的病死率为172人/10万,占全部病死率的27.8％,为死因的第一位.在县乡级,肿瘤所致患者的病死率为23.6％,也是第一位的.因此,肿瘤诊治的研究是我国医务人员面临的重大课题.在肿瘤诊治中,人们曾对早期诊断寄予很大希望,国家和学术界制订了一系列基本对策,如重在一级预防、早期发现、早期诊断、早期治疗等.至今已涌现近200种用于肿瘤诊断的标志物,然而癌症患者的病死率一直居高不下.
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血清胸苷激酶1在恶性肿瘤筛查和复发转移监测中的研究进展
恶性肿瘤是目前死亡常见原因之一，检测合适的肿瘤标记物可以提高肿瘤的诊疗效率，用于早期筛查和治疗监测的血清学肿瘤标记是近年来肿瘤研究的热点。胸苷激酶1（TK1）是一种新型细胞增殖标记物，作为补救途径合成 DNA 的关键酶之一，其在实体肿瘤的疗效监测、早期诊断、预后随访中得到广泛的临床研究。现对TK1的结构、功能及其与恶性肿瘤的关系予以综述。
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P53基因在宫颈癌组织中的表达及与细胞质胸苷激酶关系的临床研究
宫颈癌是全世界常见的妇科恶性肿瘤之一,其预后与宫颈癌细胞的生物学特征密切相关[1-3].胸腺嘧啶核苷激酶(thymidine kinase,TK)是将胸腺嘧啶核苷合成DNA的关键酶,在人体内存在两种同工酶:细胞质TK (TK1)和线粒体TK(TK2),其中,TK1与DNA合成正相关,是评估细胞增殖程度的重要标志之一.TK1含量越高,提示处于G2期的细胞数越多,组织增生越活跃.研究发现,健康人体血清中TK1含量极低,而恶性肿瘤患者血清中TK1患者含量明显升高.
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逆转录病毒介导HSVtk基因转导体外抗结肠癌的作用
原发性大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一[1],传统的手术、放疗和化疗等措施对提高生存率和生活质量取得了一定的成绩[2-5],但对于中晚期癌特别是伴有局部复发和远处转移者的治疗效果仍不能令人满意[6,7].基因治疗为其提供了新的治疗途径[8-13].单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)/丙氧鸟苷(GCV)系统疗法已广泛用于胶质瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、黑素瘤及淋巴肉瘤等多种恶性肿瘤的试验性治疗研究[14-19],在基础实验和临床试验中取得了肯定疗效[ 8,20.该疗法是通过病毒载体将HSVtk基因导入肿瘤细胞,其表达产物可将无毒性的药物前体(GCV)代谢为三磷酸化产物,取代鸟苷酸掺入DNA,并抑制DNA聚合酶而杀伤肿瘤细胞[21].我们用逆转录病毒载体携带HSVtk基因转染人大肠癌LoVo细胞,研究HSVtk/GCV系统体外治疗大肠癌的作用.
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HSVtk/GCV体外诱导人大肠癌LoVo细胞凋亡
目的探讨HSVtk/GCV系统在体外诱导LoVo细胞凋亡.方法用逆转录病毒转染LoVo细胞获得阳性克隆,以GCV(10μmol@L-1)作用,经光镜、电镜和荧光显微镜观察各组细胞凋亡情况.HSVtk+/LoVo细胞经GCV(10μmol@L-1)作用0 h～48 h不等,荧光显微镜观察计数计算其凋亡率,并用流式细胞仪检测细胞周期.结果通过光镜、电镜和荧光显微镜观察到实验组HSVtk+/LoVo细胞凋亡情况,HSVtk+/LoVo细胞分别经GCV(10bμmol@L-1)作用0,12,24,36,48 h,凋亡率随时间的增加而升高.作用24 h后凋亡率低于0.3,48 h升至0.925.经流式细胞仪检测GCV作用后的肿瘤细胞,细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从0.31上升到0.42,S期细胞从0.62下降到0.39.结论 HSVtk/GCV系统可诱导LoVo细胞凋亡,且存在时间效应,GCV可抑制细胞DNA的合成,阻止细胞由G1期向S期转化.
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胸苷激酶基因联合阿昔洛韦对细胞杀伤机制的研究
目的了解转染单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(tk)的血管平滑肌细胞在阿昔洛韦(ACV)的作用下细胞周期及微形态的变化,研究细胞死亡的原因.方法以逆转录病毒为载体向原代培养大鼠颈动脉平滑肌细胞转移tk,给予ACV,流式细胞仪观察细胞周期的变化,电镜观察细胞微形态的改变.结果转基因细胞在ACV的作用下,出现增生抑制或细胞死亡.非转基因细胞不受影响,存活的转基因细胞大部分停留在合成期和分裂前期.电镜发现细胞核染色质浓集,核破碎.结论推测转基因细胞死亡在合成期,死亡原因是DNA的大量无功能复制,部分细胞发生凋亡.
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高湿地区中老年人群胸苷激酶1水平差异
目的 了解高湿地区不同年龄段中老年人群血清中胸苷激酶1(TKI)浓度,探讨世居高湿地区人群血清TKI浓度水平,以及细胞异常增殖发生的高危年龄,查出病因,及时给予干预治疗.方法 采用增强化学发光法检测世居年平均湿度83％地区的128例中老年人群(49～89岁)血清TKI浓度. 结果 中年人群(49～岁)和老年人群(60～岁)血清TK1浓度分别为(1.3894±0.5004) pmol/L、(1.6516±0.8685)pmol/L,中年人群血清TKI浓度低于老年人群(t=2.159,P＜0.05);但中老年人群TK1阳性率差异无统计学意义(x2=1.894,P＞0.05);同时将老年人群分为3个年龄段:60～岁,70～岁,80～89岁,其血清TKI浓度分别为(1.7854±0.9736) pmol/L、(1.5345±0.7039) pmol/L、(1.4420±0.7354) pmol/L,将其与中年人群比较,发现60～岁人群高于中年人群(t=2.369,P＜0.05);老年人群其余年龄段与中年人群相比以及老年人群三个年龄段相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);每个年龄段不同性别之间血清TKI浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高湿地区老年人群细胞异常增殖水平高于该地区中年人群,应注重老年人群的健康体检.
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胸苷激酶1与 Ki67在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的：检测骨肉瘤组织中胸苷激酶1( thymidine kinase 1，TK1)及 Ki67的表达水平，并分析 TK1与 Ki67之间的表达差异及其与患者临床预后的关系。方法应用免疫组织化学 MaxVisionTM 法测定TK1及 Ki67在50例骨肉瘤和20例骨软骨瘤中表达情况。结果TK1，Ki67在骨肉瘤组中阳性率分别为84%(42/50)，54%(27/50)，在骨软骨瘤对照组中阳性率分别为10%(2/20)，15%(3/20)，两组间 TK1，Ki67表达差异有统计学意义。在骨肉瘤组中 TK1阳性率高于 Ki67并具有统计学意义。TK1及 Ki67的表达均与患者 Enneking 分期、局部复发相关，而与性别、年龄、肿瘤大小、病理类型等均无关。同时 TK1的表达与患者肺转移及化疗后肿瘤坏死率相关。TK1高表达(阳性率＞25%)患者中位生存时间短于低表达者。单因素分析表明，局部复发、Enneking 分期、肺转移及 TK1表达水平是影响骨肉瘤患者预后的因素。多因素分析显示，肺转移( P＝0.012)及 TK1表达水平( P＝0.002)是影响骨肉瘤预后的相关独立因素。结论TK1，Ki67在骨良、恶性肿瘤中的表达显著，差异有统计学意义，且 TK1在骨肉瘤中敏感性强于 Ki67；TK1与骨肉瘤临床病理学特征的联系较 Ki67紧密；TK1的表达可作为预测骨肉瘤预后的指标，而 Ki67则无此特性。
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逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因对胰腺癌细胞的杀伤作用
目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)基因治疗系统在体内外对人胰腺癌细胞的杀伤效应. 方法构建含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体pDOR-tk-neo,经病毒包装细胞PA317产生重组逆转录病毒,后者将HSV-tk基因转入人胰腺癌细胞系PC-2细胞内,筛选出稳定表达HSV-tk的细胞克隆PC-2/tk.测定PC-2/tk细胞在体外对GCV的敏感性及其旁观杀伤效应;PC-2/tk细胞在裸鼠皮下成瘤,观察GCV的治疗作用. 结果 GCV对PC-2/tk细胞有明显的杀伤作用,且其作用呈现剂量和时间依赖性特点以及旁观杀伤效应,对母本细胞则无明显毒性.裸鼠腹腔注射GCV后对移植瘤有明显治疗作用. 结论表达HSV-tk的人胰腺癌细胞在体内外均可被GCV有效杀伤.
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CEA启动子特异性启动双自杀基因CD与TK在CEA+恶性肿瘤中表达
目的 探讨CEA启动子(CEA promoter, Cp)在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase, TK)的作用.方法 培养Lovo与Hela细胞,传代冻存.10 μl带有Cp.CD.TK重组腺病毒(recombinantadenovirus with Cp.CD.TK, RA-Cp.CD.TK)病毒液转染Lovo与Hela,荧光显微镜观察,收集细胞提取总RNA, PCR扩增Cp、CD与TK,电泳鉴定.病毒转染Lovo与Hela传代接种96孔培养板,每株细胞分两组,每组24孔:第一组给予5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-Fc)10 mg/L培养液,第二组给予更昔洛韦(ganciclovir,GCV) 5 mg/L培养液,光镜观察细胞形态,台盼蓝染色检测细胞活力.结果 转染病毒的Lovo细胞及Hela细胞均可见绿色荧光,PCR均可扩增出Cp、CD和TK.5-Fc和GCV对Lovo细胞具有很强的杀伤作用,对Hela细胞则微弱,5-Fc实验组Lovo细胞活力平均为8.54%±1.34%,Hela细胞平均为95.05%±2.18%( P＜0.01).GCV实验组Lovo细胞活力平均为8.38%±1.22%,Hela细胞平均为95.39%±1.64%(P＜0.01).结论 RA-Cp.C.T靶向性杀伤CEA+的Lovo结肠癌细胞,而对CEA-的Hela子宫颈癌细胞生长无影响.
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腺病毒介导的双自杀基因对直肠癌细胞的杀伤作用
目的探讨直肠癌的基因治疗方法. 方法用重组腺病毒介导外源胞嘧啶脱氨酶(CD)基因、单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转移到人直肠癌细胞系HR-8348,通过细胞集落形成实验、细胞存活率测定(MTT法),检测、分析CD和HSV-tk双自杀基因系统对肿瘤细胞的作用. 结果重组腺病毒介导的CD和HSV-tk自杀基因可在HR-8348细胞高效表达.用腺病毒穿梭质粒pAdCMV-Link1 (CD+tk)、pAdCMV-Link1(-)、pAdCMV-Link1(CD)、pAdCMV-Link1(tk)重组腺病毒感染HR-8348细胞,不加5-氟胞嘧啶(5-FC)、环氧鸟苷(GCV),各组肿瘤细胞的集落形成和存活率的差异无显著性意义(P＞0.05).应用5-FC、GCV 后,pAdCMV-Link1(CD+tk)转染组细胞集落形成和存活率显著低于对照组和pAdCMV-Link1(-)转染组(P＜0.01),也低于pAdCMV-Link1(CD)、pAdCMV-Link1(tk)转染组(P＜0.05).CD和5-FC、HSV-tk和GCV 系统联合作用较单一自杀基因系统对HR-8348直肠癌细胞的集落形成、细胞生长有更显著的抑制作用,对肿瘤细胞有更强的杀伤能力和"旁观者效应”. 结论 CD和HSV-tk双自杀基因联合作为肿瘤基因治疗的一种手段和方法,较单一自杀基因具有更强的抗肿瘤作用.
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半胱天冬酶3前酶增强胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合双自杀基因系统治疗人卵巢癌的体外研究
目的探讨半胱天冬酶3前酶(procaspase-3)能否增强胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶+更昔洛韦(CD-TK/5-FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞的体外杀伤作用.方法构建procaspase-3的表达载体pcDNA3-casp3和人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的CD-TK融合双自杀基因表达载体pBTdel-279-CD-TK.应用蛋白印迹法检测pcDNA3-casp3和pcDNA3质粒转染后的3AO细胞(3AO-pcDNA3-casp3、3AO-pcDNA3细胞)中procaspase-3蛋白的表达情况;应用RT-PCR技术检测pBTdel-279-CD-TK和pBTdel-279分别转染的3AO-pcDNA3-casp3和3AO-pcDNA3细胞中CD和TK基因的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪技术、蛋白印迹法和荧光底物分析法分别检测4种细胞在CD-TK/5-FC+GCV系统作用后的细胞存活率、细胞周期及半胱天冬酶3(caspase-3)活性.结果 3AO-pcDNA3-casp3细胞有明显的procaspase-3蛋白表达,而3AO-pcDNA3细胞则无表达.3AO-pcDNA3-casp3和3AO-pcDNA3细胞在pBTdel-279-CD-TK转染后均可检测到CD和TK基因,但在pBTdel-279质粒转染后则CD和TK基因表达均为阴性.在5-FC+GCV作用下,3AO-pcDNA3-casp3+pBTdel-279-CD-TK细胞的存活率显著低于3AO-pcDNA3+pBTdel-279-CD-TK细胞.在5-FC(2 mmol/L)+GCV(10 μg/ml)作用48 h后,3AO-pcDNA3-casp3+pBTdel-279-CD-TK细胞的凋亡率为37.98%,S期比例为49.67%,分别高于3AO-pcDNA3+pBTdel-279-CD-TK细胞的21.34%和35.76%,两者分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).在5-FC(1 mmol/L)+GCV(1 μg/ml)作用48 h后,3AO-pcDNA3-casp3+pBTdel-279-CD-TK细胞中的caspase-3活性值为189.7,高于3AO-pcDNA3+pBTdel-279-CD-TK细胞的44.9,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论procaspase-3可显著增强CD-TK/5-FC+GCV系统对人卵巢癌细胞的杀伤作用.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 基因疗法 卵巢肿瘤 -
人端粒酶逆转录酶启动子调控下胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合基因治疗卵巢癌的体外研究
目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因--胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶+更昔洛韦(CD-TK/5-FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用.方法应用脂质体转染法将hTERT核心启动子报告质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERT mRNA的表达水平.应用基因克隆技术分别构建hTERT启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控下的 CD-TK基因真核表达载体pBTdel-279-CD-TK和pcDNA3-CD-TK,以及hTERT启动子调控下的TK基因表达载体pBTdel-279-TK.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC+GCV系统对上述3 种细胞不同的杀伤作用;应用RT-PCR技术检测pBTdel-279-CD-TK 和 pcDNA3-CD-TK转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的表达情况.用扫描电子显微镜观察pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV作用后3AO细胞的形态变化.结果卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为24.1%, RT-PCR 检测hTERT mRNA为阳性,而在正常细胞NOEC和HELF中,hTERT启动子活性仅为0.3%和0.7%,hTERT mRNA为阴性.与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显著增强,5-FC 浓度为2 ol/L、GCV 浓度为10 mg/L时,细胞杀伤率为74.5%,而对端粒酶阴性的正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;hTERT启动子系统诱导卵巢癌细胞系的细胞凋亡效能与CMV启动子系统相似,差异无显著性 (P>0.05). pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;而pBTdel-279-TK转染后,3种细胞中只有3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性;扫描电子显微镜观察pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统所致3AO细胞的死亡形式以细胞凋亡为主.结论 hTERT启动子调控下的融合双自杀基因治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗策略.
