宁夏HIV/AIDS抗病毒治疗人群HIV病毒基因亚型及耐药研究

目的 调查分析宁夏地区接受抗病毒治疗的艾滋病病人HIV病毒基因亚型和耐药突变流行情况,指导抗病毒药物的选择.方法 收集宁夏地区接受抗病毒治疗的人群中HIV-1感染者的血浆,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和套式聚合酶链反应(Nested-PCR)方法,扩增蛋白酶(PR)基因区和反转录酶(RT)基因区,并对扩增片断进行序列测定和分析,用Mega等软件构建进化树、亚型及耐药研究.结果 共获得17例HIV-1完整的PR和RT基因序列,10例产生15个耐药位点致使7例AIDS耐药,总耐药率为8.3％,其中1份样本产生了核苷类抑制剂(NRTI)和非核苷类抑制剂(NNRTI)耐药性突变,1份样本产生蛋白酶抑制剂(PI)主要耐药突变,4份样本产生PI次要耐药突变;1份样本产生了NRTI耐药性突变,5份样本产生了NNRTI耐药性突变.非核苷类耐药性突变、核苷类耐药性突变和PI次要耐药突变位点分别以V179E、Y181C、V179D、K101E、G190A和M46LM、L10LV、A71 AT为主.结论 宁夏已经出现了针对蛋白酶抑制剂耐药的毒株、核苷类抑制剂和非核苷类抑制剂双重耐药的毒株,有必要对未进行抗病毒治疗的感染者进行耐药监测.

载脂蛋白基因多态性与冠心病易感性的研究进展

冠心病（coronary artery disease，CAD）是由遗传因素和环境因素相互作用导致的，其高发病率和高死亡率，严重威胁着人类的健康，对于其发病机制多数学者从分子遗传学角度进行研究。关于冠心病候选基因的研究主要集中在载脂蛋白基因，血管紧张素受体基因，细胞因子基因，脂蛋白受体基因，基质金属蛋白酶基因等，其中载脂蛋白基因是研究的热点之一。常见的载脂蛋白（Apo）有ApoA1、ApoA2、ApoA4、ApoA5、Apo B100、Apo B48、ApoC1-4、ApoD、ApoE等，载脂蛋白在结合和转运脂质及稳定脂蛋白结构、调节脂蛋白代谢关键酶活性、参与脂蛋白受体识别上发挥着重要作用，其结构和功能的改变常导致血脂代谢异常，而血脂异常已被证实为冠心病的独立危险因素。编码这些载脂蛋白的基因存在多态性，与冠心病易感性研究较多的有载脂蛋白A5、B、C3、E基因，本文仅对这些载脂蛋白基因的常见多态性位点与冠心病易感性的关系综述如下。

HIV-1耐药性基因型检测法在临床治疗随访中的应用

目的探索HIV-1耐药性基因型检测法在高效抗逆转录病毒疗法(HAART)治疗组中监测HIV-1耐药性病毒株的临床应用.方法从接受HAART的HIV-1感染者血浆中抽提病毒RNA,采用套式RT-PCR方法扩增HIV-1的PR和RT基因片段,并对扩增片段进行序列测定和分析.结果HIV-1耐药性基因型检测法能够从血浆病毒载量在1 000拷贝/ml以上的样本中得到扩增产物.在16例接受HAART的HIV-1感染者中,发现1例感染者DP31的PR和RT基因出现了突变,这些突变为L63P、T215F、K219Q和M184V.所有突变均与公开报道的结果一致,并被证明与HIV-1的耐药性有关.另外,DP31在接受HAART前已出现T215F、K219Q的耐药性突变,究其原因,还有待进一步研究.结论HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测接受HAART的HIV-1感染者血浆中耐药性病毒株的存在.该方法提供的结果准确、可靠,并且为临床医生评价HAART效果,合理选择和及时优化药物组合方案提供了可靠的依据.

应用HIV-1耐药性基因型检测广东部分地区HIV耐药株

目的利用艾滋病病毒1型(HIV-1)耐药性基因型检测法,在HIV-1感染者中监测HIV-1耐药性病毒株,掌握广东省HIV-1感染者在利用抗病毒药物治疗前是否存在耐药突变及其流行情况.方法从未接受高效抗逆转录病毒联合疗法(HAART)治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用套式PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析.结果 HIV-1耐药性基因型检测法能够从HIV-1感染者血浆病毒载量大于1 000拷贝/ml以上、CD4低于400以下的样本中扩增到目的片断.在广东省50例未治疗对象中,低中度耐药相关突变例数为2例,占4%;高度耐药相关突变例数为0;总耐药相关突变例数为2例,占4%.结论 HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且方法提供的结果准确、可靠.对广东省未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中耐药突变的检测表明,HIV-1感染者中存在病毒的耐药性突变,也反应了HIV毒株自然变异情况的存在.

获得性免疫缺陷综合征患者抗病毒治疗后耐药基因变异分析

3例人类免疫缺陷病毒(HIV)-1阳性患者.采集血浆,设计针对HIV-1全长蛋白酶基因和部分逆转录酶基因(40-250 aa)引物,RT-PCR法扩增模板RNA,PCR产物序列测定后,用HIVdb软件进行HIV-1耐药突变相关位点的分析;流式细胞术检测患者外周血CD4+/CD8+ T淋巴细胞数,核酸序列扩增实验(NASBA)进行外周血病毒负荷的测定.所用抗HIV病毒药物包括去羟肌苷(ddI),司他夫定(d4T),双汰芝[AZT (齐多夫定)+ 3TC(拉米夫定)],奈韦拉平(NVP),施多宁(EFV)和佳息患 (IDV).

减毒单增李斯特菌疫苗递呈研究进展

单核细胞增生性李斯特菌（ Listeria monocytogenes，Lm)是一种革兰氏阳性兼性厌氧胞内寄生条件致病菌。该菌可穿越肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障，引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症[1]。且具有独有的胞内逃逸存活和胞间传送等特性，因此是研究胞内寄生的模式细菌。目前研究发现 Lm 的毒力主要由六个毒力因子编码基因（ prfA-plcA-hly-mpl-actA-plcB )组成。 plcA 和 plcB 分别编码磷脂酰肌醇特异性磷脂酶（ PI-PLC )和卵磷脂酶（ PC-PLC)，有助于Lm逃离吞噬小体；actA与基于Lm肌动蛋白的运动性有关；hly则与Lm的溶血素有关，参与单增李斯特菌一级和次级吞噬小体的逃离；prfA 主要调控 Lm 的侵袭相关毒力因子，如inlA和inlB 等；mpl是一个依赖锌的金属蛋白酶基因[2，3]。以“Listeria monocytogenes+vaccine”为关键词在Medline进行检索发现，截至（2015/05/06)为止，共有703篇关于Lm作为疫苗载体的研究，其中近五年相关研究为301篇。这些研究表明，Lm能够同时引起MHCⅠ和MHCⅡ类抗原递呈系统，具有显著激发强烈的CD8+和CD4+细胞免疫的能力。同时，减毒Lm作为口服疫苗载体可以调动机体的黏膜免疫效应[4]。近年来随着对单增李斯特菌毒力基因、跨膜转运机制研究的不断深入，以及平衡致死载体和细菌表面展示等技术的快速发展，进一步证明了减毒单增李斯特菌作为高效递呈抗原活载体的实用价值。迄今为止减毒Lm活载体疫苗已成功应用于人类免疫缺陷病毒（ Human immunodeficiency virus，HIV)、人类乳头瘤病毒（ Human papillomavirus ；HPV)和转移性胰腺癌等[5-7]人类复杂疾病的免疫治疗中。

176引起帕氏利什曼原虫半胱氨酸蛋白酶基因的一个拷贝被截短的新突变证据

063卫氏并殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

吲哚美辛诱导胃黏膜细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶基因及蛋白表达上调

已有研究显示,非甾体类抗炎药(NSAIDs)诱导的胃黏膜细胞凋亡伴有半胱氨酸蛋白酶(caspases)活性的明显升高,caspases抑制剂可逆转这一作用[1-3].我们通过灌胃吲哚美辛(IND)建立急性胃黏膜损伤动物模型,检测caspase-3基因表达和caspase-3、-8蛋白表达变化,探讨其在此类细胞凋亡中的作用及地位.

湖南省未经抗病毒治疗的HIV-1感染者耐药基因变异研究

目的 研究湖南省未经抗逆转录病毒治疗的人免疫缺陷病毒(HIV)/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的HIV蛋白酶和逆转录酶区耐药基因变异情况,为更有效地开展高效抗逆转录病毒治疗提供参考.方法 从184例研究对象的血浆中提取HIV-1 RNA,采用套式逆转录-聚合酶链反应扩增HIV-1 POL基因片段,并对扩增片段进行序列测定直接分析.结果 获得阳性结果的106例感染者中,蛋白酶基因区次要耐药变异以M36I、H69K、I13V和I93L为多,它们的累积可引起蛋白酶抑制剂的耐药.逆转录酶区的耐药变异较少见,但发现1例同时存在多个与核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药基因相关的基因位点变异的HIV感染者.结论 湖南省未经抗病毒治疗的HIV感染者中存在原发耐药相关基因位点变异,耐药基因变异处于较低水平的流行状态,感染者在抗病毒治疗开始前和后均应定期检测耐药基因突变情况以指导用药.

深圳地区HIV-1感染者的本底耐药水平调查初探

[目的]建立一套完善,可靠,适合深圳人群的HIV-1耐药性基因型检测方法,调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者的病毒株耐药突变及其本底流行情况. [方法]从未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析. [结果]通过HIV-1耐药性基因型检测法能够获得1300 bp长度的目的基因片断.经序列分析所得的21份RT基因结果中有8份对NRTI产生耐药突变(38.5%),5份对NNRTI产生酎药突变(23.81%);另外分析所得的12份PR基团结果中1份产生对蛋白酶抑制剂主要耐药突变(8.33%),5份产生对蛋白酶抑制剂次要耐药突变(41.67%). [结论]HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且检测结果表明,深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中已经存在耐药突变株.

贵州省HIV抗病毒治疗病人群耐药基因突变研究

目的:研究贵州省经抗反转录病毒治疗的艾滋病毒感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)的人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency virus,HIV)的反转录酶区和蛋白酶区耐药基因变异情况.方法:采集贵州省抗病毒治疗的感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS) 56例的血样,进行RNA核酸提取、采用套式反转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增HIV-1 pol基因基因片段及基因测序,对所得结果登录美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行在线分析确定耐药突变情况.结果:分析获得的44例目的基因片段,有24例发生基因突变.亚型分布为:17例AE亚型、15例BC亚型、10例C亚型及2例B亚型.逆转录酶抑制剂(reverse transcriptase inhibitors,RTIs)突变率和蛋白酶抑制剂(protease inhibitors,PIs)突变率分别为45.5％(20/44)和13.6％ (6/44),其中核苷酸类逆转录酶抑制剂(nucleotide reverse transcriptase inhibitors,NRTIs)耐药突变发生率为34.1％(15/44),非核苷类逆转录酶抑制剂(non-Nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)耐药突变发生率38.6％(17/44).结论:贵州已经出现了针对NRTIs与NNRTIs高度耐药毒株,有必要对未进行抗病毒治疗的感染者进行耐药监测.