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  • 宁夏HIV/AIDS抗病毒治疗人群HIV病毒基因亚型及耐药研究

    作者:吴忠兰;杨东智;关光玉;马学旻;陈慧;张蕴惠;詹军;赵伟明

    目的 调查分析宁夏地区接受抗病毒治疗的艾滋病病人HIV病毒基因亚型和耐药突变流行情况,指导抗病毒药物的选择.方法 收集宁夏地区接受抗病毒治疗的人群中HIV-1感染者的血浆,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和套式聚合酶链反应(Nested-PCR)方法,扩增蛋白酶(PR)基因区和反转录酶(RT)基因区,并对扩增片断进行序列测定和分析,用Mega等软件构建进化树、亚型及耐药研究.结果 共获得17例HIV-1完整的PR和RT基因序列,10例产生15个耐药位点致使7例AIDS耐药,总耐药率为8.3%,其中1份样本产生了核苷类抑制剂(NRTI)和非核苷类抑制剂(NNRTI)耐药性突变,1份样本产生蛋白酶抑制剂(PI)主要耐药突变,4份样本产生PI次要耐药突变;1份样本产生了NRTI耐药性突变,5份样本产生了NNRTI耐药性突变.非核苷类耐药性突变、核苷类耐药性突变和PI次要耐药突变位点分别以V179E、Y181C、V179D、K101E、G190A和M46LM、L10LV、A71 AT为主.结论 宁夏已经出现了针对蛋白酶抑制剂耐药的毒株、核苷类抑制剂和非核苷类抑制剂双重耐药的毒株,有必要对未进行抗病毒治疗的感染者进行耐药监测.

  • 河南省接受抗病毒治疗的艾滋病患者耐药性及CD4+T淋巴细胞计数影响因素的研究

    作者:朱新朋;李宏;刘宏伟;袁源;刘春华;朱谦;崔为国;王哲

    目的 了解河南省艾滋病病毒感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)高效抗病毒疗法(HAART)后HIV-1基因耐药性及患者CD4+T淋巴细胞计数的影响因素.方法 对河南省部分HIV/AIDS进行问卷调查,采集抗凝血,检测CD4+T淋巴细胞绝对计数、HIV-1病毒载量,用扩增/测序(In-House)法扩增HIV-pol区基因并测序,和斯坦福耐药数据库对比得到基因耐药结果 .结果 使用一、二代一线治疗方案的基因耐药率分别为32.21%和29.17%,差异无统计学意义(P=0.7538);治疗时间>2年的耐药率(33.20%)与<1年的耐药率(18.97%)之间的差异有统计学意义(P=0.0031).在多因素logistic回归模型分析中,年龄(OR=0.68)和领药间隔时间(OR=1.93)与耐药性的关系有统计学意义.在多因素logistic回归模型分析中,治疗方案(OR:0.51)、耐药(OR=3.20)和近1个月按时服药比例(OR=0.51)与抗病毒治疗CD4+T淋巴细胞计数的关系有统计学意义.结论 河南省部分HIV/AIDS出现基因耐药性,应加强在发药时间、机构或人员及医生询问服药情况等方面的管理.

  • 缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析

    作者:陈璐;邓松华;曹洁;何俊;陈秋莉;蒋少华;廖文婷;潘卫

    目的 删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) HXB2株Tat蛋白(长度101个氨基酸)的半胱氨酸富集区(22~37位氨基酸)以提高其在大肠杆菌中的表达量和分子稳定性,并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat(△C)蛋白]免疫原性的改变.方法 应用PCR方法对Tat基因的半胱氨酸富集区(64~111位核苷酸)进行缺失突变,获得其突变体序列[Tat(△C)DNA] ,并构建其重组表达质粒pET-32a-Tat(△C).相同的条件下将pET-32a-Tat(△C)和pET-32a-Tat质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化.用pET-32a-Tat(△C)融合蛋白免疫家兔制备抗血清,ELISA和Western blot方法对抗血清进行免疫原性分析.结果 pET-32a-Tat(△C)蛋白在大肠杆菌中的表达水平(7.12 mg/ml)明显高于pET-32a-Tat蛋白(1.50 mg/ml);pET-32a-Tat蛋白在表达纯化后及25℃和4℃放置7 d后均有明显二聚体的产生,而pET-32a-Tat(△C)蛋白则未形成二聚体;pET-32a-Tat(△C)蛋白免疫家兔可诱导产生高滴度的抗体(1∶320 000),该抗体与Tat(△C)蛋白、Tat蛋白(1~101 AA)及化学合成Tat(1~86 AA)蛋白均呈特异性反应.结论 缺失HIV-1 Tat蛋白的半胱氨酸富集区可明显提高其原核表达水平和蛋白的稳定性并较好地保留其免疫原性,为HIV-1 Tat疫苗研究提供了一种新型免疫原.

  • HIV-1 C亚型调控蛋白Nef在大肠杆菌中的表达

    作者:戴青;孙明;周东霞;蒋国润;黄小琴;褚嘉祐

    目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径.方法通过PCR扩增,获得HIV-1 C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.结果表达产物是相对分子质量为50 000的GST融合蛋白,且能与p27单克隆抗体发生特异性反应.结论重组Nef蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达.

  • 近全长序列分析HIV-1独特型CRF01_AE/B'重组病毒基因

    作者:杨洋;周磊明;薛以乐;潘启超;康来仪;戚中田;钟平

    目的:对上海市发现的1例独特类型的CRF01_AE/B'重组病毒株进行近全长序列分析,以了解其DNA序列的特征.方法:应用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分段扩增HIV-1近全长基因组相应片段,进行克隆、测序,并分析其遗传进化树和序列断点位置.结果:近全长序列分析提示,该患者所感染的病毒由CRF01_AE和HIV-1B'亚型嵌合组成,两者各占约50%.其多聚酶蛋白基因(Pol)和外膜糖蛋白基因(Env)区均有HIV-1B'亚型片段和CRF01_AE片段嵌合组成.2种亚型病毒DNA片段嵌合点的位置与过去报道的重组病毒株(CRF15-AE/B、CRF33_AEfB和CRF34_AE/B)均不同.结论:在我国常见流行的HIV-1 CRF01_AE重组病毒与B'亚型已在HIV-1感染人群中发生重组,其可能是在我国散发流行的独特型重组病毒株.

  • 上海市男男性接触者人免疫缺陷病毒Ⅰ型和梅毒感染现状以及性行为特征

    作者:吴健;陈磊;范惠俐;阮圆

    目的:了解上海市部分男男性接触(MSM)人群人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)和梅毒感染现状及性行为特征.方法:访谈员在志愿者带领下,到MSM人群聚集场所,对符合条件的MSM进行一对一访谈.该人群在接受HIV、梅毒检测及调查性行为特征前签署知情同意书,并采集血液样本进行HIV-1抗体和梅毒检测.结果:在接受调查的203人中,HIV-1和梅毒的感染率分别为4.4%和10.3%;43.3%的调查对象与女性有性接触;其与男性偶然性伴安全套使用率高于与固定性伴;HIV-1和梅毒的感染情况与调查对象的文化程度和性伴数量有一定关系.结论:上海市MSM人群的HIV-1和梅毒感染率较高,需对其进行艾滋病防治强化教育和综合干预,以遏制HIV-1和梅毒在该人群中传播.

  • 中国HIV-1 BC亚型包膜蛋白gp120核酸疫苗诱导的细胞免疫反应

    作者:张璐;张春华;刘源;张冬月;金柯

    目的 探讨中国HIV-1 BC亚型包膜蛋白gp120(BC-gp120)诱导的细胞免疫反应.方法 使用前期构建的表达中国HIV-1BC-gp120共识序列的核酸疫苗和pSW3891空载体质粒,通过电转录方式对雌性BALB/c小鼠进行免疫实验,通过T细胞酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测小鼠脾脏分泌γ干扰素(IFN-γ)的T淋巴细胞的数量.结果 以第10号肽(NGTYMFTYMPN)为刺激肽,HIV-1 BC-gp120免疫组分泌IFN-γ的T淋巴细胞数高于空载体组(P<0.05).结论 表达中国HIV-1BC-gp120共识序列的核酸疫苗可以诱导特异性的细胞免疫反应.

  • 无锡市HIV-1毒株耐药基因突变的调查研究

    作者:袁瑞;成浩;陈璐斯;季亚勇;须凡帆;张轩;王蓓

    目的 了解无锡市人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus l,HIV-Ⅰ)/获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)人群耐药基因变异的流行情况.方法 收集2012年10月~2013年6月无锡市HIV-1/AIDS人群血标本343例,提取前病毒DNA,采用巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HIV-1 pol区基因片段并测定编码蛋白酶和部分逆转录酶的基因序列,将序列提交至美国斯坦福大学HIV耐药数据库,进行耐药基因突变分析.结果 终有279例成功扩增并获得了pol基因序列,共发现36例存在耐药基因突变,未用药人群的耐药率为1.8% (4/220),用药人群的耐药率为16.9%(10/59).耐药突变主要包括D30N、L90M、K65R、M184I/V、K103N和Y181C等点突变所引起的不同类型抗病毒药物的高度或中度耐药,而其他耐药突变则引起低度或潜在低度耐药.结论 该地区HIV-1耐药株的传播尚处于低流行态势,耐药突变主要由已有抗病毒药物的使用所诱发,然而药物间的交叉耐药及耐药株的传播警示该地区应加强HIV-1/AIDS人群的耐药监测.

  • HIV-1感染者及其密切接触者HIV-1抗性基因的研究

    作者:张静;于修平;李盛长;宋长芹;傅继华;尤向东

    目的:研究CCR2-64I、SDF1-3′A 2种HIV-1抗性基因在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中的分布,以及它们对艾滋病病程进展和人群易感性的影响.方法:利用体外扩增(PCR)和限制性片段长度多态性分析(RFLP)检测目标人群中的HIV-1抗性基因,用统计学方法分析基因分布频率与病程进展和易感性的关系.结果:CCR2-64I、SDF1-3′A的突变频率分别为23.64%、23.94%,含SDF1-3′A1的患者平均潜伏期为(8.33±1.16)年,含CCR2-64I患者平均潜伏期为(8.94±1.17)年,野生纯合子患者为(7.42±1.33)年.结论:本研究首次阐明了CCR2-64I、SDF1-3′A在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中分布的特点,并发现2种抗性基因的存在均可延缓感染者的病程.

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