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实时荧光定量RT-PCR法定量检测手足口病病原体的探讨
目的 了解北京市门头沟区手足口病患儿感染病毒的型别,探索用荧光定量RT-PCR法对手足口病患者咽拭子标本中肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16(CoxA16)型病毒载量进行定量检测的可行性.方法 采用实时荧光RT-PCR体外扩增法对81例手足口病患儿咽拭子标本提取的RNA进行检测.结果 28例手足口病患者体内CoxA16病毒载量＞103 copies· ml-1.实时荧光定量RT-PCR法构建的标准曲线显示,样本阈值环数(Ct)值与病毒拷贝数的对数(log10)之间的相关系数为0.9998,相关性良好.4例手足口病患者咽拭子标本中EV71型病毒载量＞103 copies· ml-1.实时荧光定量RT-PCR法标准曲线显示,Ct值与病毒拷贝数的对数之间的相关系数为0.9996,相关性较好.结论 门头沟区手足口病病原谱以CoxA 16型为主,34.6％的手足口病患儿CoxA 16型病毒载量＞ 103 copies· ml-1,4.9％的患儿EV71型＞103 copies· ml-1.实时荧光定量RT-PCR法对咽拭子标本中CoxA16、EV71核酸定量检测比较简便快速、结果直观、稳定性强,为进一步探讨患者体内病毒载量与临床症状的关系打下了良好的基础.
关键词： 手足口病 实时荧光定量RT-PCR 病毒载量 -
HOXA9 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 研究HOXA9 mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法 收集125例NSCLC标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测NSCLC组织及相应癌旁组织中HOXA9mRNA的表达情况.采用受试者工作特性曲线(ROC)分析HOXA9 mRNA对NSCLC诊断及疾病进展的预测价值,并分析HOXA9的临床病理意义.结果 HOXA9 mRNA在NSCLC表达量为1.059±0.591,明显低于相应的癌旁肺组织(P＜0.01).NSCLC中HOXA9mRNA表达量与临床TNM分期、淋巴结转移和EGFR蛋白表达均呈负相关(P＜0.01);而与患者吸烟状况呈正相关(P＜0.05).结论 HOXA9低表达可能与NSCLC的发生、发展相关,HOXA9 mRNA可能成为判断NSCLC进展潜在的评估指标.
关键词： HOXA9 非小细胞肺癌 实时荧光定量RT-PCR -
RSK4 mRNA在胰腺癌组织中的表达及临床病理意义
目的 检测RSK4 mRNA在人原发性胰腺癌组织中的表达情况,探讨其临床病理诊断及预后意义.方法 使用RT-PCR检测50例胰腺癌及30例癌旁组织中RSK4 mRNA的表达情况,并分析其表达与临床病理参数及术后生存时间的关系.结果 RSK4 mRNA在胰腺癌组织中相对表达量低于癌旁组织(P＜0.05),ROC曲线下面积为0.695(95％CI0.540-0.853,P=0.029);RSK4 mRNA在胰腺癌组织中的表达与远处转移情况有关(r=-0.364,P＜0.05),而与其他临床病理参数无关(P＞0.05);RSK4 mRNA阳性组中位生存时间19个月,阴性组中位生存时间8个月,阳性组预后明显优于阴性组(P＜0.05);RSK4 mRNA、肿瘤分化程度和TNM临床分期是影响胰腺癌患者预后的因素,且均是独立的预后因素.结论 RSK4 mRNA可影响患者术后生存时间,其在胰腺癌的预后判断中可能具有一定的参考价值.
关键词： 胰腺癌 RSK4 实时荧光定量RT-PCR 生存时间 -
双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA表达水平的影响
目的 分析双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)中心体蛋白(Centrin)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫的抑制作用. 方法 采用改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,培养基内分别加入浓度为100 μg/ml、200 μg/ml的双氢青蒿素,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2、4、8、12h后,收集各组虫体并提取总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Centrin基因mRNA表达水平的相对变化量. 结果 实时荧光定量RT-PCR检测显示,经双氢青蒿素作用虫体后Centrin基因mRNA表达水平显著降低,培养2、4、8、12 h后100 μg/ml药物组Centrin基因mRNA相对表达量分别为0.46、0.43、0.35和0.27,200 μg/ml药物组分别为0.42、0.38、0.29和0.25. 结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的损伤作用,可供蓝氏贾第鞭毛虫病防治参考.
关键词： C2株蓝氏贾第鞭毛虫 实时荧光定量RT-PCR 双氢青蒿素 中心体蛋白 -
实时荧光定量RT-PCR检测急性出血性结膜炎CoxA24v病毒
目的 对检测急性出血性结膜炎(AHC)病原CoxA24v的实时荧光定量RT-PCR方法 进行特异性、敏感性、稳定性等方面的评估.方法 利用实时荧光定量RT-PCR检测肠道病毒CoxA24v和其他几种肠道病毒,验证方法 的特异性;根据TCID50进行倍比稀释,验证该方法 的敏感性;将样品进行倍比稀释,做重复试验,验证方法 的准确性.利用实时荧光定量RT-PCR对疑似AHC患者眼拭子进行检测.结果 该方法 对CoxA24v病毒的检测具有高度的特异性,对柯萨奇病毒A16、肠道病毒71等其他肠道病毒均无交叉反应.检测的灵敏度达0.1TCID50.用该方法 对6个不同浓度的CoxA24 v进行5次检测,获得的结果 重复性好.采用该方法 检测疑似AHC患者标本,阳性者均测序,证明是CoxA24v,未出现假阳性.结论 实时荧光定量RT-PCR法是一种快速、敏感、特异、准确的方法,适用于急性出血性结膜炎的早期诊断和鉴别诊断.
关键词： 实时荧光定量RT-PCR CoxA24v 急性出血性结膜炎 -
实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓HB-1的表达
目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞HB-1基因的表达水平以及HB-1基因在监测ALL微小残留病(MRD)方面的意义.方法:建立实时荧光定量RT-PCR方法(Taqman探针),检测HB-1基因的表达水平,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测.应用此方法检测了急性淋巴细胞白血病183例次,急性髓系白血病(AML)70例,血液系统非恶性疾病52例和造血干细胞健康供者24例的骨髓细胞HB-1基因的表达水平,并分析33例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者HB-1基因的表达水平与疾病诊断、复发的相关性.结果:构建的实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平,批间变异系数为6.79％,批内变异系数为4.80％.检测到HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞:初发/复发B-ALL中HB-1基因表达的中位水平明显高于ALL完全缓解组、初发T-ALL、初发AML、血液系统非恶性病及健康骨髓供者(33.0％ vs 0.68％、0.07％、0.02％、0.58％、0,P＜0.01),而初发T-ALL、初发AML、血液系统非恶性疾病和健康供者HB-1基因的表达水平无统计学差异(P＞0.05).B-ALL患者血液学缓解时HB-1基因水平明显下降至0.68％(0-7.99％),疾病复发时HB-1表达水平再次升高(共3例,HB-1分别为7.69％、8.08％和484.0％),其检测结果与流式细胞学检测结果变化一致.结论:HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞,所建立的实时荧光定量RT-PCR法在检测骨髓细胞HB-1基因的表达水平方面具有很好的灵敏度、特异性和重复性.HB-1基因可作为B-ALL患者的临床检测、监测MRD和早期预测复发的分子学标志.
关键词： 急性白血病 HB-1基因 实时荧光定量RT-PCR -
儿童急性髓系白血病WT1基因的实时荧光定量RT-PCR检测及其临床意义
本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法检测儿童急性髓系白血病WT1基因(AML)mRNA的表达并探讨其临床意义.采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,检测30例初治AML患儿、12例缓解期患儿(30份)、18例复发患儿,30例细胞形态学正常人的骨髓标本中的WT1基因的表达水平,并动态检测20例初治患儿WT1基因的表达.以ABL为内参照,采用2(-△△ct)法计算其相对表达量.结果表明:①初治AML患儿WT1基因的表达高于正常对照组和缓解组(P<0.001);缓解AML患儿WT1基因的表达与正常对照组的差异无统计学意义(p>0.05);复发AML患儿WT1基因的表达与初治组的差异无统计学意义(p>0.05);②动态监测儿童AML 20例显示,初治时WT1高表达,完全缓解后WT1表达水平下降,复发时WT1表达水平明显升高.20例中5例在临床复发前3-7个月表达水平开始上升.③动态检测的20例患儿初治时WT1阳性组和阴性组完全缓解率(CR)、3年总生存率(OS)无显著差异(p>0.05),治疗后第22-30天的WT1阳性组3年OS显著低于阴性组(p<0.05).结论:SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效,灵敏度高,特异性好的方法.WT1基因在儿童急性AML中表现为促癌基因的作用,WT1基因表达水平的变化有助于疗效评价,微小残留病的检测和预后判断.
关键词： WT1基因 实时荧光定量RT-PCR 急性髓系白血病 -
不同黏膜上皮细胞中巨噬细胞炎性蛋白-3α转录水平的荧光定量RT-PCR比较分析
目的 定量比较分析不同黏膜上皮细胞中人巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)的转录水平.方法 体外转录制备MIP-3α RNA标准品,人工合成MIP-3α mRNA序列特异的引物及TaqMan探针.利用TaqMan EZ RT-PCR试剂盒的反应体系和ABI实时荧光定量PCR仪进行实时荧光定量RT-PCR.通过对RT-PCR产物测序、使用标准品和质控品进行多次独立测试等评估实时荧光定量RT-PCR方法的特异性、灵敏度和可重复性.随后对不同黏膜上皮细胞系Caco-2、T-84、HeLa和淋巴细胞系PM1中MIP-3α mRNA水平进行了定量检测.结果 建立了可用于MIP-3α mRNA水平定量检测的实时荧光定量RT-PCR方法,该方法特异性好(扩增片段测序结果与参考序列完全一致)、灵敏度高(25 μl反应体系中有5个拷贝就可以检出)、检测样品浓度范围广(103～1010拷贝/ml).对Caco-2、T-84、HeLa和PM1细胞中MIP-3α mRNA水平的定量分析表明,肠黏膜上皮细胞Caco-2和T-84的MIP-3α mRNA水平比HeLa和PM1细胞高.结论 黏膜上皮细胞能表达丰富的MIP-3α,不同黏膜上皮细胞MIP-3α的表达水平可能不同.
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实时荧光定量PCR技术快速评价恒河猴外周血SIV病毒储存库的方法学建立
目的：实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR)技术快速评估恒河猴外周血细胞中的猴免疫缺陷病毒( SIV)病毒储存库的方法学及初步应用。方法以SIVmac239毒株序列为标准,在gag保守区设计1对引物和TaqMan探针,用于实时定量PCR扩增。 EcoRⅠ和SpeⅠ酶切含有SIVmac239毒株5′端长片段(含SIV-gag区)的质粒p239SpSp5,得到长度为2090 bp的SIV-gag区保守片段,纯化后定量系列标准品以绘制标准曲线。测定SIVmac239毒株感染恒河猴急性期和慢性期的外周血单个核细胞中SIV DNA拷贝数以反映病毒储存库水平,并分析该水平在不同感染状态中的病毒学特征。结果标准品浓度在10~1010拷贝/μl之间与Ct值呈线性正相关。 SIV急性期感染14~22 d可测出高水平的SIV病毒DNA,急性期病毒DNA水平高于慢性期1~2个log水平。相同动物样本的每106个细胞中的病毒DNA水平较其血清中病毒载量低将近1个log左右。 SIV病毒DNA水平与病毒载量比值( DNA/RNA)在慢性感染期显著高于急性期。结论本研究制备的SIV病毒DNA荧光探针定量RT-PCR方法特异性、敏感性高,线性范围广,可用于评估猴免疫缺陷病毒潜伏的病毒储存库水平。higher than those in the acute phase. Conclusion The established TaqMan probe-based real-time fluores-cent quantitative PCR was a highly sensitive and specific assay for the detection of SIV DNA with an advan-tage of wide linear range. It could be used for the quantitative evaluation of latent reservoirs of SIV.
关键词： 猴免疫缺陷病毒 病毒储存库 实时荧光定量RT-PCR -
实时荧光定量RT-PCR检测食管癌Survivin mRNA的表达
目的建立实时荧光定量RT-PCR方法检测Survivin mRNA的表达.方法用Trizol方法提取食管癌组织总RNA后,将其逆转录为cDNA ,建立实时荧光定量RT-PCR 方法,检测人食管癌 Survivin mRNA的表达.结果 Survivin mRNA在癌组织中高度表达,与正常食管粘膜有显著性差异.结论所建立的实时荧光定量RT-PCR方法用于检测检测人食管癌Survivin mRNA的表达,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法.
关键词： 食管癌 实时荧光定量RT-PCR Survivin mRNA -
MAL基因在胃癌组织中的甲基化及其mRNA的表达
目的:研究MAL基因在胃癌和癌旁组织中的甲基化状态及其mRNA表达.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量RT-PCR法检测37例人胃癌组织及对应癌旁5 cm组织中MAL基因的甲基化状态和mRNA表达,并分别将其与各临床病理指标进行统计学分析.结果:37例胃癌组织中MAL基因甲基化率为78.4%.对应37例癌旁组织中MAL基因甲基化率为5.4%.癌组织与癌旁组织的甲基化率差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中MAL基因甲基化状态与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、胃癌分化程度、临床分期无统计学意义(P>0.05).在胃癌组织与对应癌旁组织中MAL基因mRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.05),胃癌组织中MAL基因mRNA定量表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、胃癌分化程度、有无淋巴结转移、有无神经束浸润及肿瘤TNM分期无相关(P>0.05).结论:胃癌组织中MAL基因表达缺失或低下,并且存在高甲基化率,MAL基因发生甲基化可能与胃癌发生有关.
关键词： 胃癌 MAL基因 甲基化 甲基化特异性PCR 实时荧光定量RT-PCR -
甲型H1N1流感病毒快速诊断核酸试纸条的研制及应用
目的 建立一种快速、灵敏度高、特异性强的核酸试纸条检测甲型H1N1流感病毒.方法 根据2009年公布新型甲型H1N1流感病毒基因组序列设计合理的引物建立环介导恒温扩增体系,并在体系中加入含生物素的标记探针;在恒温下扩增45 min后产物与醋酸纤维棉片结合进行胶体金免疫试纸条显色反应,利用该方法检测76例确诊甲型H1N1流感病毒感染患者的咽部分泌物,同时采用卫生部公布的合格试剂盒进行对比试验.结果 76例确诊患者咽部分泌物经核酸试纸条检测全阳性,经对比试剂盒检测103拷贝/ml的标本进行10倍稀释后采用核酸试纸条检测结果仍能测出.结论核酸试纸条法检测甲型H1N1流感病毒具有快速、灵敏度高、特异性强的特点更适合于临床快速诊断.
关键词： 流感病毒 H1N1亚型 等温扩增 实时荧光定量RT-PCR -
多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵基因表达的研究
目的 探讨鲍氏不动杆菌对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系.方法 琼脂两倍稀释法检测鲍氏不动杆菌对17种常用抗菌药物的低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA;实时荧光定量RT-PCR法检测adeA基因的mRNA表达水平.结果 药敏结果显示,耐药率高的是亚胺培南,其次是头孢哌酮/舒巴坦,耐药率分别为92.9%、78.8%,临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、氧氟沙星及环丙沙星耐药率均>50.0%;氨曲南、哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松等抗菌药耐药率相对较低;85株鲍氏不动杆菌中有多药耐药株52株,占61.2%;adeA基因的检出阳性率为81.2%,实时定量RT-PCR结果显示,多药耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平>20倍.结论 临床分离的鲍氏不动杆菌株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多药耐药性形成中起重要作用.
关键词： 鲍氏不动杆菌 主动外排系统 多药耐药 实时荧光定量RT-PCR -
结直肠癌患者外周血hTERT mRNA定量检测临床应用研究
目的 定量检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者外周血人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT) mRNA表达,并分析其与CRC侵袭转移及预后的相关性.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测湖北理工学院附属黄石市中心医院2009-01-01-2010-10-31 95例CRC患者和30例结直肠腺瘤息肉患者(癌前病变对照组)及30名健康者(正常对照组)外周血hTERT mRNA表达量,并与血清癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)检出率进行比较.术后随访3年,分析术前外周血hTERT mRNA表达量变化与CRC侵袭转移及预后的关系.结果 CRC组CEA含量为(21.42±19.51) μg/L,显著高于癌前病变对照组的(3.26±1.38) μg/L和正常对照组的(2.87±1.94) μg/L,差异有统计学意义,P＜0.005;癌前病变对照组与正常对照组均有微量hTERT mRNA表达,差异无统计学意义,t=0.533,P=0.726;CRC组外周血hTERT mRNA表达量为5.16±4.53,显著高于癌前病变对照组的0.48±0.15和正常对照组的0.45±0.27,差异有统计学意义,P＜0.01;CRC组外周血hTERT mRNA阳性表达率为78.9％(75/95),显著高于血清CEA的33.7％(22/95),P＜0.01,两者无明显相关性,r=0.242,P=0.084;复发转移组术前及术后外周血hTERT mRNA表达量均显著高于未复发转移组,P＜0.01.复发转移组术后hTERT mRNA表达量较术前显著下降,而复发转移确诊时hTERT mRNA表达量显著升高.术前外周血hTERT mRNA表达量与CRC分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及远处转移呈正相关,P＜0.05;与术后生存期呈负相关,P＜0.01.Cox多因素分析显示,术前外周血hTERT mRNA表达量是CRC预后的独立高危因素.结论 术前外周血hTERT mRNA高表达与CRC侵袭转移、不良预后密切相关,对术后复发转移有一定预测价值,可评价预后;术后外周血hTERT mRNA表达升高与术后复发转移密切相关.外周血hTERT mRNA诊断CRC血行转移较血清CEA更敏感.
关键词： 结直肠癌 hTERT mRNA 实时荧光定量RT-PCR 侵袭转移 预后 -
pN0期食管鳞癌血液微转移检测的临床意义
目的 探讨pN0期食管鳞癌的血液微转移临床意义及其对预后的影响.方法 提取血液标本总RNA,将mRNA反转录成cDNA,然后用实时荧光定量RT-PCR技术检测血液标本MMP-7 mRNA和hTERT mRNA表达,计算样本的△△Ct值,对40例N0期食管癌患者分别进行术后3、6、12个月跟踪随访复查.结果 血液微转移与年龄、性别、癌肿长度等因素无相关关系,但与组织分化等级和pTNM分期间存在相关关系.随访结果显示单纯观察肿瘤不同侵犯深度与肿瘤术后转移(复发)率无相关性;随访术后6个月及12个月,血液微转移与否与肿瘤转移(复发)率有相关性(P<0.05),其中血液微转移阳性患者术后12个月肿瘤转移(复发)概率是阴性患者的6.44倍(OR=6.440,95%CI为1.547～26.822).结论 食管鳞癌患者血液微转移检测对早期诊断及预后判断具有重要意义.
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大网膜在胃癌腹膜微转移检测中的价值
目的 探讨大网膜在胃癌腹膜微转移检测中的价值.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测36例胃癌患者和6例非肿瘤开腹手术患者大网膜及腹腔冲洗液CK20mRNA,大网膜取材分邻近网膜血管1、2级分支取材和无血管区取材两种方式,通过统计学方法分析大网膜在胃癌腹膜转移中的价值.结果 胃癌患者腹腔冲洗液检测CK20mRNA阳性率为55.5%(15/30),大网膜邻近血管取材检测阳性率为43.33%(13/30),无血管区取材检测阳性率为6.66%(2/30),大网膜检测阳性者,冲洗液检测均阳性;冲洗液检测阳性者,大网膜检测不一定阳性,非肿瘤开腹手术患者腹腔冲洗液及大网膜检测均为阴性.结论 利用大网膜检测胃癌腹膜转移阳性率与腹腔冲洗液相似,腹腔冲洗液检测是一种预测性指标,大网膜检测是一种确定性指标,邻近血管区是更好的取材方式.
关键词： 胃癌 大网膜 腹腔冲洗液 实时荧光定量RT-PCR 腹膜转移 -
CEMx174细胞中 SAMHD1蛋白表达与SIVmac239病毒水平的相关性研究
目的：研究SIV在感染CEMx174细胞过程中，SAMHD1在基因和蛋白水平的变化与病毒水平之间的相关性。方法 SIVmac239病毒感染CEMx174细胞后，每天收集上清和细胞，应用TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法，检测细胞内SAMHD1 mRNA的相对表达量的变化；用Western blot检测SAMHD1蛋白与SIVmac239 P27蛋白表达量的变化，并分析其相关性。结果 CEMx174细胞感染SIVmac239后，细胞中的SAMHD1 mRNA基于内参基因GAPDH的相对表达量逐渐增加，前3 d分别增加了14％，16％，42％，随后开始迅速增加，第4天达到了200％，第6天更是达到了890％；细胞中SAMHD1蛋白的表达量在感染后第1、2天时变化不大，随后逐渐降低，到第5、6天时，几乎检测不到，呈现逐渐下降的趋势。结论 CEMx174细胞感染SIVmac239后，SAMHD1基因表达上调，与上清中病毒载量水平正相关，细胞内SAMHD1蛋白水平与SIVmac239 P27蛋白水平呈负相关。
关键词： SAMHD1 HIV-1 SIV 实时荧光定量RT-PCR -
NASBA方法制备HIV/SHIV RNA定量测定标准品及其应用
目的 应用NASBA方法制备SIV/SHIV RNA定量测定标准品.方法 应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段,扩增的RNA产物(RS-NASBA)纯化后10倍系列稀释,测定定量曲线、标准曲线,测定该标准品的稳定性和重复性.结果 应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到2.033×10 copies/μL.结论 外标准品RS-NASBA纯度高,稳定性好,可用于定量测定SIV/SHIV RNA拷贝数.
关键词： 依赖核酸序列的扩增技术 病毒载量 实时荧光定量RT-PCR -
Sparc及Vcan基因在人脑动静脉畸形中表达的研究
目的：研究人脑动静脉畸形中富含半胱氨酸酸性分泌蛋白( Sparc )及 Vcan 基因的表达。方法收集手术切除的脑动静脉畸形患者7例,患者术前均无栓塞或放疗史,以4例顽固性癫痫患者行颞前脑叶切除术后显微分离的血管组织样本作为对照,提取标本中的总RNA,反转录为cDNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法比较Sparc及Vcan基因在人脑动静脉畸形和对照血管中的表达。结果 Sparc基因在脑动静脉畸形血管中的相对表达量是1.633,对照组相对表达量是1.000。 Vcan基因在脑动静脉畸形血管中的相对表达量是1.627,对照组相对表达量是1.000。结论 Sparc及Vcan基因在脑动静脉畸形中存在高表达,Sparc、Vcan基因可能分别参与了脑动静脉畸形的发生和发展。
关键词： 脑动静脉畸形 实时荧光定量RT-PCR 基因 -
哮喘患儿单个核细胞FOXP3mRNA表达应用实时荧光定量RT-PCR检测的临床意义
目的 探讨哮喘患儿单个核细胞FOXP3 mRNA 表达应用实时荧光定量RT-PCR 检测的临床意义.方法 选取来本院就诊的29 例哮喘患儿和24 例正常健康儿童作为对照,对两组病例应用流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Treg 的比例,并鉴定PCR 产物特异性.结果哮喘患儿组CD4+CD25+Treg 检测结果为(8.26±2.04)%,显著低于对照组(12.71±2.53)%,差异有统计学意义(P ＜ 0.01).哮喘患儿组FOXP3/β-actin的2- △ Ct 值为(0.49±0.15),对照组为(0.62±0.18),两者比较,有显著性差异(P ＜ 0.05).外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA 表达与淋巴细胞中CD4+CD25+Treg 比例呈正相关(r=0.679,P ＜ 0.05).经融解曲线分析显示FOXP3 和β-actin 均仅有单一扩增产物.结论对于哮喘患儿单个核细胞FOXP3 mRNA 表达水平应用实时荧光定量RT-PCR 检测,方法简便,结果稳定、可靠.
