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增强免疫组化检测方法的探讨
近,在宫颈癌病因多因素分析研究中,对1995~1999年收集的46例经病理学诊断的宫颈癌和38例慢性宫颈炎的活检标本,采用免疫组织化学方法做了PCNA、p53、C-erbB-2、RB、E6等指标的检测。在免疫组化技术的具体操作和运用中,如何增强其检测效果,减少非特异性染色,摸索出了一些经验,现介绍如下。1 材料与方法1.1 免疫生化试剂 SP试剂盒、DAB试剂盒、单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司(系美国ZYMED公司的产品)。1.2 标本 系病理科宫颈癌手术送检标本和部分活检标本。1.3 方法 经10%福尔马林固定,常规石蜡制片。切片厚度为5μm,采用SP法做多种抗体免疫组化染色,同时设阳性、阴性和空白对照。选取相应的阳性切片,分4组对影响免疫组化染色效果的部分因素作对比实验。①抗原修复的不同方法:酶消化、微波炉、压力煮沸;②一抗稀释度1∶30、1∶50、1∶100;③一抗孵育时间:4℃过夜、37℃1~2h;④二抗、三抗的孵育时间:37℃30min、37℃45min。基本步骤:切片常规脱蜡至水,H2O2处理10~15min,抗原修复,PBS冲洗5min×3次,加山羊血清10~15min,加一抗孵育。PBS洗,加二抗孵育,PBS洗,加三抗孵育,PBS冲洗,DAB显色,苏木素复染,脱水、透明、封固。
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三种固定液对冷冻组织切片固定效果的比较
快速冷冻制片质量的优劣对术中病理诊断至关重要.冷冻制片质量受多种因素影响,其中固定液配方的选择尤为重要.常规冷冻切片固定液造成的细胞核肿胀,会直接影响病理诊断.笔者对常用的三种冷冻切片固定液进行比较,观察对细胞核的固定效果.结果显示:苦味酸饱和95%酒精溶液、甲醛及冰醋酸混合固定液对细胞核的固定效果佳,染色质量接近常规石蜡制片.
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超声微波快速石蜡切片在微小组织中的应用
常规病理诊断由于制片程序复杂,需要数天方能出结果,故及时、准确、快速的制片技术就显得尤为重要.由于基层医院受技术、设备条件的限制,使快速冷冻切片难以普及.我们自1998年应用超声微波快速石蜡制片以来,经多年实践,收效良好,认为此方法是一种快速、简捷、诊断准确率高的技术.
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内耳组织石蜡制片技术的改进与应用
豚鼠内耳耳蜗石蜡制片技术是耳科组织形态学实验研究中常用的技术之一,它具有方便、快捷的特点,适用于组织化学、免疫组化等新技术.耳蜗制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.我们在豚鼠耳蜗毒性损伤的实验研究中,用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液,在微波辐射下进行脱钙,缩短了脱钙时间,做出了高质量的耳蜗组织切片.
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肾活检冷冻组织石蜡制片的方法
肾穿刺取出肾组织后,一般分为3部分,一部分制作成石蜡切片,一部分制作成冷冻组织切片,另一部分进行电镜检查.石蜡切片是肾活检病理诊断的重要部分,若因切片未见肾小球或因其他原因导致制片失败,则不能进行肾活检病理诊断.而冷冻肾组织经冻融后一般不能制备出满意的石蜡切片.下面介绍冷冻肾组织通过技术处理后,制作成石蜡切片的方法.
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应用PDCA循环法持续改进HE石蜡制片质量
HE石蜡制片技术是医学领域中经久不衰的技术之一,也是病理科基本与重要的技术[1]。我科病理技术室HE石蜡制片优良率虽然能够达到三级医院的标准且通过省、市级病理质控中心的评估,但在实际工作中,仍会遇到因切片质量不稳定影响病理诊断的情况。我院在2014年4月启动了国际医疗卫生机构认证联合委员会( Joint Commission of International,JCI)认证准备工作,通过18个月持续改进,在2015年8月通过了认证,并成为国内通过该认证的第48家医院。在此过程中,我们应用PDCA循环管理模式持续改进HE石蜡制片质量,稳定并提高了HE石蜡制片质量的优良率。 PDCA循环是管理学的一个通用工具模型,早由美国质量统计控制之父Waller Shewhart在1924年提出,在20世纪五十年代由美国质量管理专家戴明传播到日本,其中P、D、C、A 分别代表计划( plan )、执行( do )、检查( check)、行动( action)。初PDCA循环法主要用于企业产品质量的改进,随着社会经济的迅速发展,人们对产品和服务质量格外关注, PDCA 循环法逐渐应用年到了各行各业中[2]。 Vogel等[3]使用PDCA循环法降低手术伤口感染率,提高手术质量。我国医院对PDCA循环法的推广晚于国外,但近年来逐渐成为提升医疗质量、降低医疗成本、提高医疗服务效率、保障患者安全目标的重要管理工具,并在医疗废物、医学检验、病历管理等方面取得较好的管理成效[4-6]。
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一种简便的皮肤、肌肉石蜡制片方法
皮肤层次丰富,结构较复杂.由于皮肤各层致密度不同,其制片过程中常需特殊处理,才能获得较理想的切片.皮肤制片改进的方法有的操作繁琐,有的仍难以避免真皮(网状层)出现松散、分离或浅层出现较多裂隙等现象.另外常规方法制作骨骼肌切片,镜下也可见到肌间隙张裂.本改进方法能够较好地保存皮肤各层组织结构和使骨骼肌结构紧密.并且操作简便,易于掌握.
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品质管理圈在病理科HE石蜡制片标本审验中的应用
为提高HE切片诊断结果的可靠性,保证常规HE石蜡制片的高质量,病理科的工作实践需要进行全程规范化操作,并加强质量控制,标本收取是制片工作的第一步,在标本的收取环节进行有效的标本查验和识别送检信息尤为关键。我们应用品质管理圈模式,探讨如何改进HE石蜡制片的标本审验工作,取得了良好效果,现介绍给大家。
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大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较
骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一.它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的.适用组织化学、免疫组化等技术的染色.大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色.对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果.
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提高GLP实验室石蜡制片质量的技术要点
石蜡制片是病理学基础研究和疾病诊断中常用的技术,在国内外药物非临床安全性评价(GLP)的病理学研究中仍是主要的技术手段.
关键词: 毒性病理学 石蜡制片 药物非临床安全性评价 -
制作HE染色石蜡切片的关键技术
病理学是一门形态学科,侧重研究疾病不同发展时期的结构变化,辅助诊断疾病的主要手段.制作HE石蜡的质量优劣,可影响疾病诊断甚至导致误诊.作者根据经验介绍其关键技术如下:
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冰冻切片和石蜡切片对免疫组化染色效果的对比分析
目的 研究皮肤、肉芽组织采用石蜡切片以及冰冻切片免疫组化的染色效果.方法 2014年8月—2016年8月期间选取Wistar大鼠共60只,双盲法随机分为A、B两组各30只.实验前对60只大鼠进行背部切割伤,脱毛后在每只大鼠背部切割伤部位取1 cm×1 cm大小的皮肤块作为标本,A组大鼠皮肤块标本采用石蜡制片,B组大鼠皮肤块标本采用冰冻制片.对两组大鼠标本切片进行免疫组化染色,观察两组大鼠标本切片染色情况.结果 B组SP、EGF、EGFR以及FGF强阳性率分别为96.67%、100.00%、96.67%、93.33%,明显高于A组的0.00%(P<0.05).A1组抗原活性阳性率分别为93.33%、96.67%、93.33%、100.00%.明显高于A2组的13.33%、13.33%、3.33%、6.67%以及A3组的10.00%、16.67%、13.33%、3.33%(P<0.05).B1组EGF、FGF抗原活性强阳性率分别为100.00%、93.33%,高于B2组的6.67%、3.33%(P<0.05).结论 冰冻制片免疫组化染色效果更佳,值得临床应用及推广.
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泰山四叶参石蜡制片的实验研究
目的:研究泰山四叶参的石蜡制片方法,为其组织显微鉴定特征的研究奠定基础.方法:应用石蜡制片技术制作泰山四叶参的组织切片.结果:建立了泰山四叶参的石蜡制片方法.结论:泰山四叶参的石蜡制片方法可靠,为进一步的研究奠定了基础.
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简捷快速石蜡制片技术的探讨
病理诊断在临床实践中处于极其重要的位置,是指导临床治疗的重要手段。病理切片的质量关系到病理医师诊断的正确率,出片速度关系到临床医师能否及时确定治疗方案和患者的等候时间,进而影响到全局的医疗服务质量。常规石蜡切片,制作步骤多,用时长。本文对“简捷快速石蜡制片方法”的技术进行了实验与研究,该方法保证了病理切片的质量,从接收标本到发出报告,只需2.5h。“简捷快速石蜡制片方法”主要是从“固定、脱水、浸蜡”这三大步骤中进行探索,适合在基层医院推广应用。
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肝组织石蜡切片技术的改进
组织学是借助显微镜来研究机体正常的组织结构,因此制备良好的组织教学切片,对组织学的实验教学至关重要.组织学教学切片制备一般采用石蜡切片,石蜡切片的关键在脱水、透明及浸蜡步骤.在制作肝脏石蜡切片时,若按常规石蜡切片步骤,肝组织蜡块在切片时较脆易碎,染色后镜下结构常呈脱水过度的表现,影响了肝脏正常组织结构的观察.为做出较好的肝组织切片,我们进行了反复实践,摸索出了肝组织石蜡切片制作的较理想方法,现介绍如下.
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病理科新技术员浅谈常规石蜡制片体会
常规石蜡包埋切片技术是病理技术日常工作中基本也是技术员需要熟练掌握的重要技术,是病理诊断的技术支持。本人参加工作一年多,通过老师精心带教和不断实践,现能独立进行石蜡制片,并加以总结经验,体会如下。
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硬脂酸石蜡混合液代替二甲苯透明的体会
传统的石蜡切片制作过程大都是经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片.透明通常都采用二甲苯,而二甲苯很容易引起组织收缩、变脆和硬化并影响切片质量,且对人体有潜在危害.为了去掉有害毒剂二甲苯,减少对人体的毒害作用,我们在传统常规的石蜡制片基础上进行了改进.经过反复摸索实践,取得了满意效果.
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人胚胎大脑标本石蜡制片及免疫组织化学方法
免疫组织化学是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行定位,在组织原位显示抗原(或抗体),抗原、抗体反应具有较高的特异性,但其结合是不可见的,必须借助可见的组织化学手段显示其反应部位,因此,免疫组织化学是目前病理学、组织学、胚胎学等多学科领域研究的重要方法.但免疫组织化学是否成功?其关键因素之一就是制作标本石蜡制片.经查阅文献,目前有关人胚胎肠[1]组织石蜡制片有少数报道,但对人胚胎大脑标本石蜡制片过程及免疫组织化学方法的操作,未见报道.现就人胚胎大脑4个月标本为例,根据本实验室工作经验,对其流程及方法进行探讨.
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人胚胎肠标本石蜡制片方法的探讨
石蜡切片因操作简单,易保存等优点而成为现代组织学、胚胎学、病理学等医学科学研究领域常使用的一种方法.石蜡切片制作包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡等许多环节,每一环节都直接影响石蜡切片制作结果.目前动物标本[1]及成人组织[2]石蜡切片技术报道较多.
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快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨
在糖皮质激素快速有效地缓解哮喘症状的非基因组机制研究中,建立豚鼠哮喘模型十分重要.本实验采用肺动脉灌流方法对豚鼠的肺进行快速灌流固定,采用此法获得的标本比较接近肺的真实状况.