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冷冻切片制作体会
冷冻切片是借助在低温的条件下,使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法.冷冻切片技术距今已近有100多年的历史,主要在外科手术中确定病变性质,了解肿瘤的扩散情况,包括肿瘤是否浸润相邻组织,有无区域淋巴结转移等及手术切缘有无肿瘤组织残留.因此,制作一套高质量的冷冻切片对于确保病理诊断的科学性、可靠性是极其重要的.如今,绝大多数的医院都有国产或国外的冷冻切片机,冷冻切片已经成为病理科的日常工作,成为病理科不可缺少的一部分.
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微波快速石蜡切片的制备
病理活组织常规石蜡切片技术,需时2~3天,在病情危急时,常因时间长而未能配合临床诊治工作的需要,为此我们将微波技术应用于快速石蜡切片中,只需1.5~2h,大大地提高了工作效率,且制片质量近似于常规石蜡切片技术,完全符合病理诊断的要求.
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整体染色、装片技术在微小虫体寄生虫病病理诊断中的应用
随着生活水平和医疗条件的提高,人体寄生虫病的发病率日益降低。但是散发的寄生虫病病例还时有报道[1-2],临床医师通过手术活检或者在患者体表、连通体表的腔道中获取寄生虫标本之后,肉眼往往不能判断虫体种属,特别是微小的蠕虫标本,这就给寄生虫病的诊断、治疗、预防带来诸多困难。只有通过微观形态学技术才能对寄生虫标本进行制备以及鉴定诊断。病理科在标本的固定、染色、封裱等方面有着天然优势,然而寄生虫的鉴定主要是通过体表特征或者整体形态特征来完成的,所以常规的病理切片技术就不是很适用[3]。我们经过实践发现,采用整体染色、整体装片技术很好地解决了这个问题,现介绍如下。
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使用超声处理仪制备快速石蜡切片的体会
目前国内手术中快速病理诊断多用冷冻切片或传统加温快速石蜡切片技术,但冷冻切片中易出现细胞肿胀等人为假象,传统加温快速石蜡切片制备过程复杂,安全性差,且易造成组织收缩和硬变。为克服上述不足,我们应用超声处理仪制备快速石蜡切片,方便快捷,效果良好。 一、材料和方法 1.材料:手术切除及门诊活检标本120份,其中手术中快速诊断标本100份。根据病变范围常规取组织块。要求组织块尽可能薄,便于固定脱水。 2.仪器设备:PHT-400病理样品快速超声处理仪一台(上海震康医疗器材有限公司),具有两个换能器,可独立操作或同时启动。
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Tween-40软化剂在组织切片技术上的应用
在制备临床和科研组织标本时,我们常会遇到一种既韧又硬的组织,如病变的指甲和眼球中的晶状体.以前对该类组织没有相适宜的技术方法制备组织切片,病甲的切片只有放弃;全眼切片只能把晶状体从眼球中挑出后进行,破坏了眼球的完整结构.这对于该类组织的结构和病变的研究十分不利.笔者参考有关文献[1],配制了10%~20%的Tween-40软化剂,可以很好的软化该类组织并制备石蜡组织切片,然后进行HE染色和免疫组织化学染色,效果十分满意.
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冷冻切片原理及操作技术分析
冷冻切片是利用低温将组织冷冻后结冰、变硬,然后切成薄片,附贴于载玻片,再经染色、封片等步骤,便于进行显微镜下观察的切片技术.过程简单,制片快速,一般需10~20分钟便可制成切片,组织中的水分或专用包埋剂起着切片介质支持剂的作用,无需经脱水、透明、浸蜡等步骤.由于组织不经有机溶剂处理,甚至不需要固定,不受高温影响,故而组织没有明显收缩,保存了脂肪、类脂及各种酶的活性,组织细胞保持在生活时状态.
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骨骼肌疾病的临床病理诊断
骨骼肌的病理检查在众多肌肉病相关的辅助检查方法中有诊断价值.20世纪60年代开展的肌肉活检冰冻切片技术以及电生理检查技术促进了骨骼肌疾病的研究和诊断,此后的神经生化检查为代谢性肌肉病的诊断提供了更多的依据,影像学的应用为观察肌肉损害的全身分布和肌肉活检部位的选择提供了重要参考,基因和免疫细胞化学方法的应用促进了分子肌肉病理学的发展[1],使骨骼肌病理检查在鉴别疾病相关结构、为治疗策略提供形态学依据以及研究发病机制方面[2]更显重要.
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包涵体肌炎的诊断标准
散发性包涵体肌炎(sporadic inclusion body myositis, sIBM)是一种好发于中、老年人,以缓慢进行性肌无力和肌萎缩为主要临床特点的炎性肌肉疾病[1,2],常被误诊为激素不敏感的多发性肌炎.目前世界各国对包涵体肌炎有不同的诊断标准.与国外报道的大量病例相比,我国迄今为止仅见少数病例报道[3-5],其原因可能与对此病还缺乏足够的认识,以及肌肉活检的冰冻切片技术尚不普及有关.为了提高大家对包涵体肌炎的诊断水平,2001年5月10~15日中华医学会神经病学分会神经肌肉病学组在浙江省杭州市萧山区召开了神经肌肉病专题讨论会,会议重点议题之一是讨论和制订我国包涵体肌炎的诊断标准.现将会议后整理的包涵体肌炎诊断标准提供给大家.
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小鼠胚卵石蜡切片及免疫组织化学染色方法
石蜡切片法是科研与教学工作中的一种常用实验技术,在细胞生物学、组织胚胎学及病理学中应用甚广[1].对于一般肉眼可见的较大组织标本来说,此项技术操作简便 ,标本能够长期保存.胚卵标本是研究人与动物胚胎发生发育过程中必须观察的标本,尤其是植入前的早期胚卵,对研究胚体早期发育的影响因素至关重要.本文对原有的胚卵切片技术进行了改进,为进一步研究人与动物的早期胚卵发育及其影响等诸因素提供了新的技术方法.已有研究表明层粘连蛋白(laminin,LN)在胚胎粘附、着床过程中发挥重要作用[2,3].本实验利用植入前各阶段的早期胚卵,以单个胚卵石蜡包埋切片技术为手段 ,通过免疫组化染色研究LN在小鼠早期胚卵中的分布,摸索出一套特异性强的针对单个胚卵进行免疫组化染色的方法,为进一步研究LN在小鼠早期胚卵中的免疫定位及分布奠定了基础.
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组织芯片技术在消化道疾病研究中的应用
组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarrays,TMA),1998年由Kononen等[1]首次提出,近年来组织芯片技术得到了极大的发展.目前已运用该技术广泛开展了人类基因组学的研究、疾病相关基因的验证、新药物的开发与筛选、治疗过程的追踪和预后等方面的研究[2].传统的组织病理切片技术样本单一、效率低、不能胜任大样本的筛选工作,而组织芯片技术克服了这个缺点并在此基础上迅速发展[1].
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如何做好术中快速冰冻病理切片
病理术中快速冷冻切片的优劣,直接关系到疾病的取舍,对病人至关重要.如何做好术中快速病理冷冻切片,笔者通过较长时间的实践与探索认为除了送检标本要新鲜外还有"三"个直接处理;不同的组织调整不同的冷冻时间;更新冰冻切片机设备及配备切片技术熟练的技术员进行冰冻切片操作等方法,有效提高了冰冻切片质量和诊疗工作质量,从而得到临床医生的充分认可和信任.
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连续半薄切片技术在淋巴管学研究中的应用
70年代末森坚志[1],提出采用色素穿刺注射法、加墨汁的硝酸银溶液局部动脉注入法、加墨汁生理盐水灌流的环氧树脂半薄切片法,确认淋巴管后超薄切片电镜观察来综合研究器官内淋巴管.本文就连续半薄切片技术应用于淋巴管研究总结如下.
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快速冷冻切片技术的经验总结
冷冻诊断技术由Pieterde Riemer 于1818年首创,借助低温使手术中的新鲜标本快速冷冻,达到一定的硬度后进行切片.冷冻切片是病理科常用制片方法之一.随着现代医学的发展,这一技术越来越受到临床手术医师的青睐,尤其是肿瘤专科医院需要术中病理诊断以决定手术方式的病例逐年增加.在这一技术方面,笔者有以下几点经验与大家交流.
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病理诊断专业组织胚胎学教学模式的选择
随着医学教育改革的深入,各地医学院纷纷开设新专业,我校从2001年开始招收3年制的病理诊断专业高职生,其目标是为社会培养具有病理切片技术、诊断方面的实用型卫技人才.组织胚胎学作为该专业的主干课程,教学质量的好坏严重影响着后续课程病理解剖学、诊断病理学等的学习,因此在有效的教学时间里既要让学生掌握理论知识,又要具备扎实的观看正常组织切片的操作能力,教学模式的正确选择尤为重要,笔者从以下几方面来提高教学质量.
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超声波石蜡切片技术在病理科中的应用
传统的石蜡切片制作仍是当前病理诊断中可靠、准确的诊断方法,其制片操作较科学合理,质量也稳定可靠.做出一张合格的病理切片是临床病理诊断的依据,是病理研究的主要资料.但因为制片过程中组织固定、脱水时间较长、室温下需2天~3天,加温后处理仍需10小时以上,所以不适应现代临床医学快速诊断的要求.所以自1999年开始,我科应用超声波水浴快速制片技术,经过6年的实践,共完成各类活检组织快速诊断1 800例次,制片质量稳定,效果良好,诊断可靠.制片时间只需2小时左右,大大提高了工作效率.
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提高病理组织石蜡切片质量的体会
病理组织石蜡切片技术是病理工作的常规项目,它是临床诊断的重要辅助手段[1],合格的切片是病理诊断的基础。而病理切片的制作过程比较繁琐,每一细小的环节出问题,都会对后面的步骤造成不良影响。本文从标本处理过程中的每一步入手,结合工作实际,分析石蜡切片制作过程中易出现的问题和解决办法,谈一下提高石蜡切片质量的体会。
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病理科新技术员浅谈常规石蜡制片体会
常规石蜡包埋切片技术是病理技术日常工作中基本也是技术员需要熟练掌握的重要技术,是病理诊断的技术支持。本人参加工作一年多,通过老师精心带教和不断实践,现能独立进行石蜡制片,并加以总结经验,体会如下。
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小标本组织快速石蜡切片的应用
各种窥镜检查和活检技术已广泛应用于临床诊断与治疗,但取活检组织后还需要病理诊断结果才能决定治疗措施,常规石蜡切片技术耗时较长,需时2-3天,为了配合临床诊治工作及患者之需,我们开展了病理小标本组织,快速石蜡切片技术2小时左右,且制片质量近似于常规石蜡切片技术.
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乳腺微小癌10例冷冻切片病理诊断分析
术中冷冻切片技术已广泛应用于临床外科手术中,因其诊断结果快,可在较短时间内判定病变性质和决定手术方式而受到临床医生的欢迎.因冷冻切片的组织处理条件不同,其与常规石蜡切片相比仍有较大的差异,尤其对一些乳腺早期微小病变的定性诊断,有时比较困难.乳腺微小癌(minimal breast carcinoma,MBC)是指直径≤1.0 cm的乳腺癌[1].由于MBC病灶小、临床表现不典型,在临床和术中冷冻切片病理诊断中,极易发生漏诊和误诊.现将我们在术中冷冻切片诊断的10例MBC临床和病理特点分析如下.
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组织切片刀的使用体会
在组织切片技术中,无论是组织的固定还是切片的染色,都常被作为获得良好切片的关键来加以研究.但作者发现却少有人探讨在切片过程中发挥重要作用的切片刀的使用.即使在技术理论中对于切片刀的论述也多是一带而过.其实获得一把锋利的切片刀,并不容易.在此作者仅将多年关于切片刀的使用体会加以总结.