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弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-6基因重排的临床病理意义
研究弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)生发中心组(GCB)和非生发中心组(non-GCB)的bcl-6基因重排、Bcl-6蛋白表达之间无直接相关性,在DLBCL的发病机制中作用各异.
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应用组织微阵列技术研究EB病毒在鼻咽癌变中的作用
目的 探讨EB病毒感染、突变型p53和bcl-2蛋白表达在鼻咽癌(NPC)发生、发展中的作用.方法 组织微阵列技术结合原位杂交检测EBER-1和免疫组化检测p53和bcl-2蛋白在鼻咽癌变过程中不同病理形态组织的表达.结果 ①NPC组织中EBER-1阳性杂交信号、突变型p53蛋白和bcl-2蛋白阳性表达率显著高于增生鼻咽上皮、正常鼻咽上皮和异型增生鼻咽上皮(P<0.01);后者又显著高于前两者(P<0.01);异型增生鼻咽上皮和增生鼻咽上皮中p53蛋白阳性表达率也显著高于正常鼻咽上皮(P<0.05).②临床Ⅲ、Ⅳ期NPC组织中p53和bcl-2蛋白阳性表达率显著高于临床Ⅰ、Ⅱ期(P=0.005,P=0.023).NPC组织中EBER-1、p53和bcl-2蛋白表达间呈显著正相关(P<0.01).③p53与EBER-1联合应用区分NPC与非癌鼻咽组织的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和符合率优于其他组合.结论 鼻咽癌变的早期p53基因异常表达,随后继发EB病毒感染和bcl-2基因的激活,导致鼻咽上皮凋亡受阻、持续过度增殖,这在终发展为NPC的过程中起着非常关键的作用.EBER-1和p53蛋白联合应用是区别NPC与非癌病变的较好分子标记.
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胃肠道间质瘤多因素预后分析
目的探讨胃肠道间质瘤的生物学行为并对多因素进行预后分析.方法对194例胃肠道间质瘤构建组织微阵列,采用免疫组织化学EnVision法检测胃肠道间质瘤组织中CD117、CD34、a-SMA、desmin、S-100、p53、Ki-67、PCNA的表达,结合随访资料,对其生物学行为进行分析.结果全组1年、3年、5年生存率分别为93.5%、72.1%、63.2%.单因素分析,患者的预后与肿瘤部位、肿瘤大小、核分裂数、肿瘤有无坏死、出血、细胞密集程度、肿瘤细胞类型、核异型性、Ki-67标记指数、p53、性别等因素有关(P＜0.05).初治患者预后同时与手术方式、周围脏器组织有无侵犯及黏膜有无受侵等因素有关.多因素分析显示肿瘤大小、核分裂数、坏死、周围组织侵犯、性别是影响预后的重要因素.结论影响胃肠道间质瘤的预后因素较多,胃间质瘤肿瘤直径＞10 cm,核分裂数＞10个/50 HPF,肿瘤有坏死,黏膜受侵提示肿瘤恶性度较高,Ki-67标记指数≥5%及p53蛋白(+)有助于预测胃间质瘤侵袭行为;小肠间质瘤肿瘤直径＞5 cm,均应高度警惕肿瘤的复发转移.CD34、SMA、desmin、PCNA、S-100蛋白阳性表达与预后无关.
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组织微阵列检测结直肠癌组织中MMP-2、MMP-9 和TIMP-2蛋白的表达
目的 探讨MMP-2、MMP-9 和TIMP-2蛋白表达与结直肠癌侵袭转移的关系,寻找用于预测结直肠癌侵袭转移的分子标记物.方法 组织微阵列结合免疫组化技术检测结直肠癌及其癌旁正常肠黏膜上皮中的MMP-2、MMP-9 和TIMP-2蛋白表达.结果 结直肠癌组织中,MMP-9蛋白阳性表达率显著高于癌旁肠黏膜组织(P<0.001),TIMP-2蛋白阳性表达率显著低于癌旁黏膜组织(P<0.05).浸润至肠壁浆膜层的结直肠癌和Dukes'C、D期癌组织的MMP-2蛋白阳性表达率显著高于浸润肠壁浅、深平滑肌层和Dukes'A、 B期结直肠癌(P<0.05);肠壁局部淋巴结转移的结直肠癌中MMP-2、MMP-9 蛋白阳性表达率显著高于无淋巴结转移癌(P<0.05);Dukes'A、B期结直肠癌TIMP2蛋白阳性表达率显著高于Dukes'C、D期(P<0.05).TIMP2蛋白阳性的结直肠癌生存时间显著长于TIMP2阴性的结直肠癌(P<0.05).结直肠癌中MMP-2蛋白阳性表达与MMP-9表达呈正相关(P＜0.001),但TIMP-2蛋白阳性表达与MMP-2表达呈显著负相关(P<0.05).二变量多因素回归分析显示,MMP-2蛋白表达、癌组织的浸润深度和Dukes分期可作为预测结直肠癌淋巴结转移的独立指标.结论 结直肠癌MMP-9和TIMP-2蛋白共同高表达及MMP-2与TIMP-2蛋白的表达失衡在结直肠癌侵袭、转移中起重要作用.MMP-2蛋白表达可作为结直肠癌淋巴结转移的独立预测指标.
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自制组织微阵列蜡块的简易方法
组织微阵列(tissue microarray,TMA)又称微缩组织切片,是将数十个乃至上百个小组织整齐排列在一个石蜡块里,然后再切片、裱片制成组织芯片.它可做免疫组化、原位杂交和荧光原位杂交,用于组织中DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测,具有信息含量高、高效、快速、低消耗、组内或批间差异小等优点,并可根据需要进行不同组合和设计.
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一种制作高密度鼻咽癌组织微阵列的新方法
组织微阵列(tissue microarrays,TMAs)自从Kononen等 [1] 首次报道以来,虽然使用的材料、制作工具和铺片技术不同,但其制作方法过程基本一致.我们研究了一种简便制作高密度鼻咽癌组织的微阵列方法,现介绍如下.
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介绍一种组织芯片的制作方法
组织芯片又称组织微阵列(tissue microarray)是将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而成的微缩组织切片[1].此技术具有高产出,实验误差小和省时、省力、节约经费等优点,并能应用于科研、教学、生物试剂测试、质量监控及标准化等领域[2].因此它是目前很热门的一种技术方法.我们在尝试此项技术的同时,摸索出一种制作组织芯片的方法,现介绍如下.
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组织芯片技术及其在病理学研究中的初步应用
组织芯片又称组织微阵列(tissue microarray)是将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而成的微缩组织切片.组织芯片的特点有 :(1)体积小、信息含量高、可根据不同的需要进行组合和设计;(2)不仅适用于形态学观察,还能用于免疫组织化学染色、原位杂交和各种原位组织、细胞学的观察和研究;(3 ) 高效、快速、低消耗、自身内对照和可比性强.
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细胞和细胞核微阵列的制作及其应用
组织微阵列(TMA)又称组织芯片(tissue chip) 技术[1].基于其优点,新近学者们考虑能否将细胞也同样制成相似的阵列进行研究.我们利用打过孔的石蜡为模具,将培养悬浮的细胞和从石蜡包埋组织中提取的细胞核制成细胞和细胞核的微阵列,并将其用于荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、mRNA原位杂交、免疫细胞化学基因蛋白的检测,证明其效果良好,具有组织微阵列的优点.
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提高组织芯片切片成功率的方法和体会
Kononen等[1]于1998年创立了真正意义的组织芯片或称组织微阵列(tissue microarry,TMA)技术,将直径0.6 mm的乳腺癌小组织样本,以阵列方式包埋于同一块20 mm×45 mm的石蜡块中,然后进行切片,用于同一实验指标的研究.而由此产生的蜡块切片可同时用于DNA、RNA或蛋白水平的原位组织学研究,使基因、蛋白水平的研究与组织形态学特征相结合.目前已应用到肿瘤的进展、预后、早期诊断以及与cDNA基因芯片相结合,进行高表达基因的定位研究,研究报道的有乳腺癌[1-3]、前列腺癌[4-6]、脑肿瘤[7]、肾癌[8]以及膀胱癌[9].我们教研室已成功构建肝细胞癌、胰腺癌和各种混合性肿瘤的芯片,并进行HE和免疫组织化学十几种抗体的检测.我们在本文将重点介绍组织芯片构建的原则,怎样提高TMA的切片成功率,包括切片石蜡的改进、切片过程中应注意的问题等.
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组织芯片
组织芯片(tissue chip)是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.它分为多组织片[1](multi-tissue section),组织阵列(tissue array,MTA,多可含60个直径2 mm的组织)和组织微阵列[2](microtissue array, 多可含1 000个直径0.6 mm的组织)(图1,2).组织芯片的特点是:体积小,信息含量大,一次性实验即可获大量结果(high-throughput).组织芯片可用于组织中的DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测.像普通组织切片一样,可做HE染色、特殊染色、免疫组织化学染色、DNA和RNA原位杂交、荧光原位杂交.组织芯片蜡块可做100～200张连续切片.这样用同一套组织芯片即可迅速的对上百种生物分子标记(如抗原,DNA和RNA)进行分析、检测.因此组织芯片技术是建立疾病,特别是肿瘤的生物分子文库的强有力的工具[3].
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组织微阵列及其在肿瘤病理研究中的应用
2000年6月底公布人类基因组工作草图后,基因研究的重点已从结构转向功能,即后基因组时代.今年2月公布的整理后的基因草图序列[1],初步认定人类约有3万个左右的基因,大大少于原来约有10万个基因的估计.由于一个基因可以编码不同的蛋白,所以基因编码产物数量要多于基因数.对于数万个基因的功能研究,分析其复杂的表达方式以及基因间相互作用、相互调节的关系,其艰巨性和对阐明生命活动过程的重要意义将超过人类基因组计划.面对如此艰巨、复杂的工作,传统的基因功能研究方法已无法满足,由此出现了一系列的新技术、新方法,微阵列技术(microarray technology)便是这些革命性新技术之一.微阵列技术是在一小片固相载体上储存大量的生物信息,含有大量生物信息的固相基质称之为微阵列,又称生物芯片(biochip),根据储存生物信息的类型,可分为寡核苷酸微阵列(DNA芯片),cDNA微阵列(cDNA芯片),蛋白质微阵列(蛋白质芯片)和组织微阵列(tissue microarray,组织芯片).在此就组织微阵列研究进展和应用作一介绍.
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组织芯片制作技术
组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissuemicroarray,TMA),是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.1998年,Kononen等[1]首先制作了乳腺癌的组织微阵列,并应用荧光原位杂交、免疫组织化学和mRNA原位杂交技术研究了6种基因及其表达产物的表达状态.
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组织微阵列技术对胃癌组织p53和MDM2蛋白表达的同步检测与对应分析
目的:探讨胃癌组织中p53和MDM2蛋白表达的相互关系.方法:47例石蜡包埋胃癌组织制成组织阵列,应用免疫组织化学方法检测其p53和MDM2蛋白表达,并运用统计软件SPSS11.5对两个蛋白之间的相互关系进行对应分析.结果:p53与MDM2蛋白阳性表达率分别为34.0%(16/47)和42.5%(20/47).p53蛋白与MDM2蛋白表达呈负相关(P=0.012).结论:p53突变是胃癌发生发展中重要的一步,MDM2可能在胃癌的恶性增生过程中起重要作用.
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应用组织微阵列技术检测胃癌组织肿瘤坏死因子受体6的表达及意义
目的:探讨胃癌(gastric carcinoma,GC)组织肿瘤坏死因子受体6(tumor necrosis factor receptor 6,TR6)蛋白过度表达的临床意义.方法:2001/2005年手术切除或内镜活检的胃黏膜标本151例,包括慢性浅表性胃炎(CSG)42例,胃黏膜肠上皮化生(IM)37例,异型增生(Dys)454例,GC27例,另外,GC52例为组织微阵列产品.所有病例每例取2处,作成组织微阵列6组:GC24例、GC27例、GC28例、Dys45例、IM37例、CSG42例.应用免疫组织化学检测TR6蛋白的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系.结果:GC组织TR6阳性率明显高于Dys、IM及CSG组织(x2=2.288,P=0.022;x2=2.639,P=0.008;x2=3.593,P=0.000).GC高分化组TR6Ira性率明显低于低分化组(x2=2.183,P=0.029);TNM Ⅰ、Ⅱ期阳性率明显低于Ⅲ、IV期(x2=2.194,P=0.028);无淋巴结转移组阳性率明显低于淋巴结转移组(x2=2.891,P=0.004);无远处转移组阳性率明显低于远处转移组(x2=5.021,P=0.000);TR6表达与年龄、性别及肿瘤浸润深度无关.结论:TR6高表达在GC的发生发展及转移中起重要作用;检测TR6蛋白指标有助于GC诊断和判断患者预后.
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利用量子点技术检测窖蛋白-1在人肺癌侵袭转移中的意义
目的 利用量子点免疫荧光标记技术检测窖蛋白-1(Cav-1)在人肺癌组织芯片中的表达,探讨Cav-1与细胞外基质金属蛋白酶诱导物(CD_(147)/EMMPRIN)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的关系.方法 利用量子点免疫荧光组织化学结合组织芯片技术检测Cav-l、CD_(147)和MMP-2在70例肺癌和5例非癌变肺组织中的表达.结果 肺癌组Cav-1平均荧光强度为55 ±23,低于对照组的80±4(t=2.461,P=0.016);Cav-1表达与肺癌患者的性别、年龄和组织学类型无关,但与TNM分期(t=2.466,P=0.016)和淋巴结转移(t=2.972,P=0.004)均显著相关;Cav-1与CD_(147)表达呈显著负相关(r=-0.331,P=0.005),与MMP-2表达无关.结论 量子点免疫荧光组织化学技术可精确定量检测肺癌组织芯片上的不同蛋白表达.Cav-1与肺癌的发生密切相关,其高表达可促进肺癌细胞的侵袭转移,其机制可能与调节CD_(147)而不是MMP-2的活性有关.
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肾透明细胞癌组织中CMTM家族的表达及意义
目的 探讨CMTM家族(CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing family)成员CMTM3和CMTM5在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织中的表达及意义.方法 ccRCC标本75例,男50例,女25例.年龄(59±10)岁.2009 AJCC分期Ⅰ期34例,Ⅱ期23例,Ⅲ期14例,Ⅳ期4例.Fuhrman核分级Ⅰ级3例,Ⅰ～Ⅱ级1例,Ⅱ级35例,Ⅱ～Ⅲ级10例,Ⅲ级18例,Ⅲ～Ⅳ级3例,Ⅳ级5例.应用免疫组织化学方法结合组织微阵列技术检测ccRCC组织及相应正常肾组织中CMTM3、CMTM5蛋白的表达情况,综合临床资料进行分析. 结果 正常肾组织中CMTM3、CMTM5蛋白阳性表达率分别为98.7％和97.3％,ccRCC组织的阳性表达率分别为44.0％和68.0％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).ccRCC组织中CMTM3、CMTM5蛋白表达程度与性别、年龄、分期、病理分级无明显相关(P＞0.05). 结论 CMTM3和CMTM5是ccRCC抑癌基因,其突变或异常甲基化可能在肾癌的发生过程中起重要作用,有望成为肾癌的早期诊断指标.
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微阵列技术研究p53,VEGF,E-cad,CK20蛋白在膀胱癌组织中的表达
目的探讨p53,VEGF,E-cadherin(E-cad),Cytokeratin 20(CK20)在膀胱移行细胞癌组织中的表达和意义.方法采用组织微阵列技术和免疫组织化学方法,对45例膀胱癌组织标本上述蛋白表达进行研究,并以8例正常膀胱黏膜组织标本作为对照.结果45例癌组织标本中p53,E-cad,CK20异常表达率分别为100.0%,55.6%,55.6%,正常黏膜组织无异常表达,组间比较差异有统计学意义(P＜0.001);正常黏膜VEGF表达率87.5%,癌组织为86.7%,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).p53异常表达强度、E-cad异常表达率与癌组织分级分期呈正相关,CK20异常表达率与分期呈正相关而与分级无相关性,VEGF与癌组织分期分级无相关性.结论p53,E-cad,CK20在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用,肿瘤组织VEGF蛋白水平无明显增加.组织微阵列技术适用于大样本多指标的检测,是一种高效的研究方法.
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结直肠癌血管生成与抑制的相关性研究
目的探讨结直肠癌血管内皮生成因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)、内皮抑素(endostatin,ES)、微血管密度(microvascular density,MVD)的相关性以及与临床病理因素的关系.方法构建结直肠癌与正常结直肠组织微阵列,免疫组织化学检测VEGF-D、ES以及MVD.结果与正常肠组织相比,结直肠癌ES与VEGF-D表达均上调,相应MVD增加.浸润深度浅、淋巴结转移、远处转移以及早期结直肠癌ES呈低表达;VEGF-D表达则相反;MVD随浸润深度增加、淋巴结转移、远处转移以及Dukes分期增加而增加.结论VEGF-D与ES相互协调而促进结直肠癌血管生成以及病期进展.
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采用组织芯片技术检测乳腺癌中泛素、S期激酶相关蛋白2、细胞周期调控因子p27的表达
组织芯片(组织微阵列)一般是指将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.我们采用组织芯片技术制作乳腺癌的组织芯片,并用免疫组织化学技术进行泛素(Ubiquitin)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2, Skp2)、细胞周期调控因子p27的检测,探讨乳腺癌组织中Ubiquitin、Skp2和p27表达的意义.
