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叉头框C2在人胚淋巴管发生过程中的表达
目的 探讨人淋巴管胚胎期的发生和发育及叉头框c2(FOXC2)的表达. 方法 用淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)作为淋巴管的标记物,应用免疫组织化学SP染色及免疫荧光双标染色的方法 ,检测FOXC2和LYVE-1在妊娠5～11周的85例人胚胎标本淋巴管的表达及淋巴管的发生发育情况. 结果 妊娠7周后的胎儿颈部及胸部的淋巴管出现LYVE.1表达.在妊娠大约10周时,胎儿肠系膜间淋巴管内皮细胞开始出现LYVE-1表达.FOXC2的表达早于LYVE-1,于妊娠第6周开始在中胚层间充质明显表达.FOXC2不仅表达于淋巴管,并广泛分布于椎体、心血管等部位.妊娠11周后的胎儿淋巴管内皮细胞中仍能见到FOXC2和LYVE-1的表达. 结论 在妊娠7～8周间(人胚胎发育35～42d),淋巴管开始形成,FOXC2和LYVE-1与淋巴管的发生和发育相关.
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叉头框C2在鼻咽癌侵袭转移中的作用
目的：检测叉头框C2（FOXC2）在不同鼻咽癌细胞株中的表达情况，并探讨FOXC2能否通过调控某些上皮标志物或间质标志物的表达诱导上皮间质转分化（EMT），进而参与鼻咽癌细胞侵袭转移。方法以体外培养的人鼻咽癌细胞株（5?8F、CNE2）和永生化鼻咽上皮细胞NP69为研究对象，分别应用Western免疫印迹、实时荧光定量PCR（RT?QPCR）检测3种细胞FOXC2的表达情况。选择低侵袭潜能的鼻咽癌细胞株CNE2，应用瞬时转染FOXC2的表达质粒过表达FOXC2基因，镜下观察转染前后CNE2细胞形态学改变；Transwell迁移与侵袭实验比较转染前后CNE2细胞侵袭转移能力；并采用Western免疫印迹检测EMT相关标志物E?钙黏蛋白、波形蛋白、N?钙黏蛋白的表达情况。结果 FOXC2 mRNA及蛋白在鼻咽癌细胞株5?8F、CNE2及永生化鼻咽上皮细胞NP69中均有表达，且发现其表达量在NP69细胞中低，在CNE2细胞中较高，而在5?8F细胞中高（mRNA：0.07±0.05比0.55±0.05比0.81±0.06，蛋白：0.17±0.05比0.56±0.03比0.84±0.06，均P<0.05）。鼻咽癌细胞株中， FOXC2 mRNA和蛋白在5?8F细胞中的表达高于在CNE2细胞中的表达（mRNA：0.81±0.06比0.55±0.05，蛋白：0.84±0.06比0.56±0.05，均P<0.05）。FOXC2过表达可诱导CNE2细胞形态由鹅卵石形变为纺锤形样梭形。FOXC2过表达组CNE2细胞运动迁移和侵袭转移能力较空载组增强（迁移细胞数：310±10比80±9，侵袭细胞数：170±10比112±8，均P<0.05）。与空载组比较，间质标志物波形蛋白和N?钙黏蛋白表达上调（均P<0.05），上皮标志物E?钙黏蛋白无明显变化。结论 FOXC2可能通过调控间质标志物波形蛋白和N?钙黏蛋白的表达，诱导鼻咽癌发生EMT，从而促进鼻咽癌侵袭转移。
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FOXC2基因C-512T和G-350T多态性与2型糖尿病相关性的初步分析
目的:探讨叉头框C2(FOXC2)基因5'非翻译区C-512T和G-350T多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法:选择云南省汉族人群280例,其中T2DM患者159例为T2DM组,无糖尿病家族史的健康对照121名为对照(NC)组.应用PCR-RFLP检测FOXC2基因5'非翻译区C-512T和G-350T多态性.结果:T2DM组和NC组组间,FOXC2基因C-512T和G-350T的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义,且与性别无关.T2DM组-512C/C基因型携带者具有更高的WHR(P<0.05),该人群患脂肪肝的比例明显升高(P<0.05).-350G/G基因型携带者具有更高的HDL-C(P<0.05),该人群患脂肪肝的比例明显降低(P<0.01).结论:T2DM患者FOXC2基因C-512T多态性与WHR、脂肪肝相关;G-350T多态性与HDL-C、脂肪肝相关.
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叉头框C2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及临床意义
目的 研究叉头框C2蛋白(FOXC2)在肾细胞癌组织及癌旁组织中的表达差异及临床意义.方法 收集2013年3月～2016年1月华北石油管理局总医院40例肾细胞癌患者术后肾细胞癌组织及癌旁组织,采用qRT-PCR、免疫组织化学染色及Western blot方法检测各组织中FOXC2的表达水平,分析FOXC2的表达与肾细胞癌临床病理的关系.结果 qRT-PCR结果显示,FOXC2 mRNA在肾细胞癌组织中表达较癌旁组织明显降低(P＜0.05);免疫组化结果和Western blot结果显示,肾细胞癌组织中FOXC2蛋白表达较癌旁组织明显下调(P＜0.05).FOXC2在肾细胞癌组织中的低表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜、病理分期无关(P＞0.05),但与肾细胞癌的病理分型有关(P＜0.05).结论 FOXC2在肾细胞癌组织中异常低表达,可能与肾细胞癌的发生发展相关,可以作为肾细胞癌潜在的分子靶点进行研究.
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大鼠抗小鼠重组Foxc2单克隆抗体的制备与检测应用
目的:为了研究叉头框c2(Foxc2)在骨骼和主动脉发育上的作用.方法:利用基因重组融合蛋白制作大鼠抗小鼠Foxc2单克隆抗体(抗-Foxc2 mAb),并利用蛋白质印迹和免疫荧光分析了Foxc2蛋白在小鼠肌胚细胞C2C12的表达和在小鼠胚胎的表达部位.结果:用小鼠GST-Foxc2融合蛋白免疫大鼠制得的抗-Foxc2 mAb效价为1∶5 000,并特异地与转染了CX-Foxc2质粒的小鼠L细胞和人膀胱癌HTB9细胞产生的Foxc2蛋白结合.在骨成形蛋白-2(BMP-2)的诱导下,Foxc2蛋白在C2C12细胞中显著地增加,用反义Foxc2序列转染C2C12细胞可以明显地抑制Foxc2蛋白在这个细胞系中的表达.Foxc2蛋白表达主要定位于11.5-dpc小鼠胚胎的生骨节和主动脉周围的间充质组织.结论:应用大鼠抗小鼠基因重组Foxc2单克隆抗体研究Foxc2的作用,结果表明Foxc2蛋白在BMP-2的诱导下,在调节C2C12细胞向成骨细胞分化以及在胚胎中轴骨骼和心血管的形成过程中起重要作用.
关键词： 叉头框C2 基因重组融合蛋白 大鼠抗小鼠Foxc2单克隆抗体 -
小鼠叉头框C2基因变异致室间隔缺损
目的:探讨叉头框C2基因在心血管发生和发育中的作用.方法:通过敲除小鼠叉头框C2基因,解析敲除叉头框C2基因小鼠的心脏发育情况.结果:在98只新生鼠中仅有15只纯合子型叉头框C2基因突变鼠;这些纯合子型动物心脏的室间隔有细小的缝隙连通左右心室;原位杂交显示在10.5 d的胚胎心室内膜有Fox C2mRNA的表达.结论:敲除叉头框C2基因可使小鼠室间隔发育缺损.
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靶向抑制FOXC2对舌鳞癌细胞移植瘤血管形成的影响
目的:研究靶向抑制叉头框C2(FOXC2)的表达对舌鳞癌细胞系Tca8113移植瘤血管形成的影响.方法:将舌癌Tca8113细胞系接种40只裸鼠皮下建立移植瘤模型,并随机分为空白对照组、空载体组、无关片段组、干扰质粒组.用脂质体法对空载体组、无关片段组、干扰质粒组进行瘤内及瘤周注射转染,RNA干扰抑制FOXC2的表达,处死裸鼠后取瘤体测量体质量及体积,免疫印迹法检测FOXC2蛋白表达,免疫组织化学法检测移植瘤微血管参数.结果:干扰质粒组的瘤体体积、体质量、FOXC2蛋白表达、微血管参数均小于其他各组(P<0.05).结论:通过RNA干扰靶向抑制FOXC2的表达,能抑制舌鳞癌细胞移植瘤的血管形成.
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胰腺癌组织FOXC2的表达及其与预后的关系
目的:探讨叉头框C2(forkhead box C2,FOXC2)在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌患者预后的相关性.方法:利用Oncomine数据库分析FOXC2 mRNA在胰腺癌及癌旁组织中的表达;收集112例胰腺患者癌组织及相应癌旁组织,采用qRT-PCR和免疫组织化学染色检测FOXC2的表达,并分析其与临床病理参数的关系.应用Kap-lan-meier法分析FOXC2表达对患者生存时间的影响.结果:Oncomine数据库中FOXC2 mRNA在胰腺癌癌组织中表达明显高于癌旁组织(tBadea=4.074,tPei=3.741,P均<0.05);FOXC2蛋白主要表达于胰腺癌细胞胞核,且癌组织免疫组化评分明显高于癌旁组织(t=7.571,P<0.05);FOXC2 mRNA在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织(t=13.79,P<0.05);有淋巴结转移的癌组织中FOXC2阳性表达率高于无淋巴结转移的癌组织(χ2=16.998,P<0.01),胰腺癌Ⅲ期FOXC2阳性表达率高于Ⅰ期(χ2=15.688,P<0.001)和Ⅱ期(χ2=10.678,P=0.001).FOXC2阳性组胰腺癌患者的中位生存时间显著短于阴性组(χ2=10.32,P=0.0013),FOXC2阳性表达(HR=2.569,P=0.003)可作为预测胰腺癌预后的独立因素.结论:FOXC2在胰腺癌组织中呈高表达,且与胰腺癌患者的预后高度相关.
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环氧合酶2对肺癌细胞FOXC2的表达及侵袭能力的影响
目的 探讨环氧合酶2(COX-2)对肺癌细胞叉头框C2(FOXC2)的表达及侵袭能力的影响.方法 采用COX-2过表达质粒 、EP1受体过表达质粒及si-FOXC2转染人肺癌A549细胞,用前列腺素E2(PGE2)及EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理细胞,检测FOXC2蛋白表达水平及细胞侵袭能力的变化.结果 过表达COX-2后,FOXC2蛋白表达升高(P<0.05).用不同浓度PGE2处理细胞,FOXC2蛋白表达上调;其中,2.5μmol/L处理时上调明显(P<0.01).PGE22.5μmol/L处理细胞后,细胞侵袭率升高(P<0.05),同时干扰FOXC2,细胞侵袭率下降(P<0.05).用不同浓度17-PT-PGE2处理细胞,FOXC2蛋白表达水平升高,其中5.0μmol/L处理时升高明显(P<0.01).过表达EP1受体后,FOXC2蛋白表达增加(P<0.05).结论 COX-2能够通过激活EP1受体来促进FOXC2的表达,进而促进肺癌细胞的侵袭能力.
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siRNA干扰叉头框C2对乳腺癌中肿瘤干细胞标志物CD44的影响
目的:探讨siRNA干扰叉头框C2(FOXC2)对乳腺癌中肿瘤干细胞(CSC)标志物CD44 mRNA及蛋白表达的影响.方法:常规培养乳腺癌MCF-7细胞株,再通过乳腺球形成实验培养、筛选乳腺癌CSC;将FOXC2-siRNA或阴性对照siRNA慢病毒载体转染至乳腺癌CSC,同时将转染载体的CSC作为空白对照.通过real time RT-PCR和Western blot检测FOXC2-siRNA对FOXC2的干扰效应,再通过real time RT-PCR和Western blot分别检测CD44 mRNA和蛋白在各组细胞中的表达,结果均以空白对照的表达量作为参照进行分析.结果:从MCF-7细胞株中成功培养出乳腺癌CSC.与转染阴性对照siRNA的乳腺癌CSC比较,转染FOXC2-siRNA的乳腺癌CSC中FOXC2 mRNA和蛋白表达均明显降低(P=0.00509;p=0.00001),同时CD44 mRNA及蛋白的表达也均明显降低(P=0.00848;P=0.00218).结论:干扰乳腺癌CSC中FOXC2基因的表达能够抑制乳腺癌CSC中CD44 mRNA及蛋白的表达,FOXC2信号转导通路可能通过调控CD44来介导乳腺癌CSC的增殖、分化.
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FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响
目的：明确叉头框C2（FOXC2）在结直肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法采用逆转录病毒感染的方法建立FOXC2稳定过表达的结直肠癌细胞株（SW480／FOXC2）及空载体对照细胞株（SW480／pBabe），显微镜下观察结直肠癌细胞形态改变。Western blot及免疫荧光法检测FOXC2过表达细胞株及对照细胞株中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin的表达情况；Tr‐answ ell侵袭小室实验检测结直肠癌细胞迁移能力的改变。结果过表达后SW480细胞的形态发生了明显的变化，从原来典型的上皮细胞形状变成长梭形，类似于成纤维细胞的形态；Western Blot及免疫荧光检测结果显示，FOXC2过表达后上皮分子标志物E‐cadherin表达明显下调，而间质分子标志物Vimentin及N‐cadherin表达显著上调；Transwell侵袭实验结果显示，FOXC2过表达后结直肠癌细胞侵袭潜能明显增强。结论 FOXC2过表达能诱导结直肠癌细胞SW480发生上皮‐间质转化并增强其侵袭能力。
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云南纳西族2型糖尿病FOXC2基因C-512T与G-350T多态性分布
目的 探讨云南地区纳西族2型糖尿病(T2DM)中FOXC2基因C-521T和G-350T多态性与2型糖尿病的相关性.方法 选取从2012年2月至2013年12月丽江市人民医院住院的纳西族2型糖尿病人群(T2DM组)和同期健康体检、无糖尿病家族史且糖耐量正常人群为对照组(NC组)各300例,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法检测外周血FOXC2基因C-512T和G-350T的多态性分布情况.结果 (1)纳西族2型糖尿病患者中FOXC2基因C-512T多态性的CC、CT及TT分布频率分别为18.8％、54％、27.9％.G-350T多态性GG、GT及TT的分布频率分别为68.4％、27.9％、3.7％.所有基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).与对照组相比,纳西族2型糖尿病组C-512T基因型及等位基因频率差异无统计学意义(P＞0.05);G-350T基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05),而G和T等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)纳西族2型糖尿病FOXC2基因C-512T各基因型与代谢指标未发现差异无统计学意义(P＞0.05);G-350T多态性T等位基因型携带者具有更高的TC和HDL-C (P＜0.05);(3) Logistic回归分析显示,FOXC2基因C-512T和G-350T多态性与云南纳西族2型糖尿病无相关性(P＞0.05);与2型糖尿病发生相关的因素为腰围(P＜0.05).结论 (1) FOXC2 C-512T和G-350T基因多态性在云南省纳西族人群中存在种族差异;(2)纳西族2型糖尿病其胆固醇、高密度脂蛋白水平与FOXC2基因G-350T多态性有相关性;(3) FOXC2基因C-512T和G-350T多态性与云南省纳西族2型糖尿病发生无相关性.
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卵巢子宫内膜异位症组织FOXC2表达及临床意义
目的 探讨叉头框C2(FOXC2)在卵巢子宫内膜异位症(内异症)在位内膜及异位病灶中的表达及其与内异症病人临床因素之间的关系,内异症病人血清中FOXC2蛋白表达水平及其对内异症诊断的意义.方法 应用荧光定量PCR、免疫组织化学染色、酶联免疫吸附试验方法,分别检测80例内异症病人在位、异位内膜组织及血清中FOXC2的表达水平,以正常子宫内膜66例作为正常对照组,育龄期健康女性血清样本80例作为血清对照组.结果 内异症病人在位内膜及异位病灶中FOXC2的mRNA及蛋白表达均显著高于正常子宫内膜组织,差异有显著性(F=22.69,Hc=118.737,P＜0.01).内异症病人血清FOXC2水平显著高于血清对照组(t=4.003,P＜0.01).结论 FOXC2与内异症发生发展密切相关,可能成为内异症早期诊断及预后评估的潜在标志物.
