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不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响
目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响.方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10%应变,频率分别为0.5 Hz、1 Hz和2 Hz,加载时间12 h和24 h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的alpha-肌动蛋白(α-actin)的表达变化.以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组.结果血管平滑肌细胞的α-actin的蛋白和RNA表达量在1Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高.结论不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞α-actin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节.
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P咀嚼运动各阶段中上颌总义齿基托应变的比较研究
目的:对咀嚼运动各阶段中平衡与非平衡时上颌总义齿基托的张应变与压应变进行讲究.对数据处理分析方法进行改进,对基托折断原因进行进一步的了解.方法:采用微机化动态电阻应变仪,测定应变值.并获取时间-应变曲线.结果:无论平衡与非平衡 ,咀嚼的前期阶段的应变均大于后期阶段(P<0.01).在平衡时左右侧腭斜坡的张、压应变基本相等(P<0.05).在左侧第一磨牙造成干扰时,右侧腭斜坡为张应变.而左侧腭斜坡为压应变,腭基托中线前部的应变大于其他各部(P<0.01或0.05).结论:在义齿修复中平衡是一个重要问题,是上颌总义齿基托折断重要的原因之一.非平衡时咀嚼花生米前期阶段腭中线前部为应变集中区.该区易发生折断.
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血管张应力体外加载装置的研制
背景：国内外已经研制出多种体外细胞张应力加载装置，主要拉伸方法有矩形基底拉伸法、圆形基底变形法和4点弯曲梁加载法3种，其中圆形基底变形法虽能够很好的反映体内如肺泡的扩张、血管的脉动等真实情况，但该种加载过程中膜的应变是辐射对称的；4点弯曲梁加载法能够提供的应变范围很小，加载时间有限，应变调节比较困难。
目的：采用矩形基底拉伸法研制血管张应力体外加载装置。
方法：采用机电一体化设计研制血管张应力体外加载装置，由电源模块、控制模块、传动模块和数据采集模块4个部分组成，以硅胶片为基底材料，通过对电机旋转角度和转动速度的高精度控制，实现对硅胶膜片上的拉伸控制。
结果与结论：通过测试和试验，该装置可以满足试验所需的参数范围，能够在体外模拟出人体张应力环境，初步认为该张应力加载装置的研制是成功的，实现了：①装置有两种工作模式：应力模式和应变模式，解决了基底加载装置的硅胶片材还没有实现标准化的问题。②能实现张应力在0-5×105 Pa范围内的调节。③能实现张应变在0-40%范围内的调节。④能实现0-80次/min的拉伸频率的变化，并能控制拉伸时间。 -
ROCK1及其相关信号分子参与张应变调控的血管平滑肌细胞增殖
目的 探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用.方法 应用张应变加载系统对体外培养VSMCs施加牵张幅度10％、频率1.25 Hz生理性周向张应变;Brdu检测VSMCs增殖水平;Western blotting检测力学加载后VSMCs的ROCK1表达水平以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC) α/β Ⅱ、蛋白激酶D(protein kinase D,PKD)、胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化水平;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)检测ROCK1对VSMC增殖和PKCα/βⅡ、PKD、ERK磷酸化的调控作用.结果 10％生理性张应变加载12、24 h显著抑制VSMCs的ROCK1表达,并显著抑制PKD和ERK的磷酸化;10％生理性张应变加载12h显著抑制PKCα/βⅡ的磷酸化,但加载24 h PKCα/βⅡ的磷酸化与静止对照组相比无显著差异.RNAi抑制VSMCs的ROCK1表达后,VSMCs增殖水平显著降低,同时PKCα/βⅡ和PKD磷酸化水平显著降低,但ERK磷酸化无明显变化.结论 10％生理性张应变可能通过抑制ROCK1表达调控PKC∥BⅡ和PKD的磷酸化水平,从而影响VSMCs增殖,维持血管稳定性.探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络,对心血管生理和疾病病理机制研究具有一定意义.
关键词： 血管平滑肌细胞 张应变 Rho相关卷曲蛋白激酶 蛋白激酶 -
不同频率张应变作用下血管磷酸化HSP27的表达及其在血管平滑肌细胞迁移中的作用
目的 研究血管和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)磷酸化热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在不同频率张应变条件下的表达变化及其对VSMCs迁移的影响.方法 应用血管体外应力培养系统,在频率为0.5 Hz和1.25 Hz、平均压力15.996 kPa(120 mmHg)和甲均流量50 mL/min的条件下培养猪颈总动脉,培养时间为24 h:又用Flexercell细胞应变加载系统,对人VSMCs施加0.5 Hz和1.25 Hz频率的10%张应变,加载时间为12 h.然后,Western blot检测不同频率张应变作用下血管和VSMCs的磷酸化HSP27的表达变化.应用RNA干扰技术,分别观察抑制HSP27表达前后的VSMCs迁移能力变化.结果 与频率为0.5Hz作用相比,1.25 Hz张应变可以激活血管和VSMCs的HSP27表达,抑制VSMCs迁移.RNA干扰HSP27后,VSMCs迁移数量明显增多.结论正常生理频率张应变可能通过激活血管HSP27抑制VSMCs迁移,以维持血管正常的结构和功能.
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不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞外基质的影响
为研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞(VSMC)细胞外基质(ECM)的影响,探讨不同频率张应变与血管重建(remodeling)的关系,本文应用 FX-4000TTM细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMC施加10%张应变,频率分别为0.5、1和2 Hz,加载时间为24 h,以未加载张应变的VSMC为对照组.采用Real-time RT-PCR、western blot等技术检测不同频率张应变对fibronectin、collagen I和collagen III表达的影响,以及可能参与调节的蛋白激酶p38的活性变化.结果显示:①张应变频率可以明显影响细胞外基质Fibronectin、collagen I和collagen III的mRNA的表达,其影响效果与频率大小是一种非线性关系;②蛋白激酶p38参与调节了一定频率张应变诱导的ECM的表达变化.结果表明不同频率的张应变可以影响VSMC细胞外基质表达的变化,提示频率的改变可能参与调节细胞外基质的合成与分泌;在应力引起的血管重建中频率的改变可能起着重要的作用.
