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糖尿病足神经及动脉组织中α-肌动蛋白表达与中医辨证分型的相关性研究
目的 研究糖尿病足截肢标本神经及动脉组织中α-肌动蛋白(α-actin)的表达与糖尿病足中医辨证分型的相关性.方法 对100例糖尿病足准备截肢患者按照中医辨证分为气血两虚瘀阻证、气阴两虚瘀阻证、脉络热毒证3型,对这些糖尿病足截肢标本进行神经及动脉组织的α-actin免疫组化研究.结果 在神经及动脉组织中脉络热毒证表达强,气血两虚瘀阻证表达弱.各证型之间α-actin表达具有显著性差异(P<0.01).结论 糖尿病足中医辨证分型与α-actin的表达具有较高的相关性.
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五味子藤茎提取物抗大鼠肝纤维化作用及机制探讨
目的:观察五味子藤茎提取物抗四氯化碳(CCl4)及乙醇所致肝纤维化的作用及机制.方法:50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、五味子藤茎提取物高、中、低剂量组,采用ip CC14,并饮用乙醇、饲用高脂饲料等复合因素制造肝纤维化模型,造模后,给药组分别ig高、中、低不同剂量(5.0,2.5,1.25 g·kg-1)五味子藤茎提取物,正常组和模型组灌服等量的生理盐水.末次给药后,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)活性,层粘蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平,同时取大鼠肝组织,分别用于苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清AST,ALT活性及HA,LN,PCⅢ水平均显著升高,肝组织TGF-β1,α-SMA蛋白表达水平显著增高(P＜0.01);与模型组比较,五味子藤茎提取物能显著降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST活性及HA,LN,PCⅢ水平,病理组织学检查结果显示,五味子藤茎提取物各剂量组大鼠肝组织结构明显改善,肝纤维化程度减轻,五味子藤茎提取物各剂量组均可显著降低肝组织TGF-β1,α-SMA蛋白表达水平(P＜0.01).结论:五味子藤茎提取物对CCl4及乙醇所致肝损伤有明显保护作用,其机制可能与降低肝组织TGF-β1,α-SMA蛋白表达、抑制肝星状细胞活化有关.
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养阴清肺方含药血清对60Co照射后肺成纤维细胞转化生长因子β1及α-肌动蛋白表达的影响
目的 探讨养阴清肺方治疗放射性肺纤维化的可能作用机制. 方法 将20只大鼠随机分为养阴清肺组[予养阴清肺方浓缩液(浓度0.97 g/ml)1 ml/100 g]、激素组[予醋酸泼尼松龙片水溶液(浓度0.125g/ml)1 ml/100g]、养阴清肺加激素组(养阴清肺方浓缩液、醋酸泼尼松龙片水溶液各0.5ml/100g)、模型组和未照射对照组(均给予生理盐水1 ml/100 g),每天早晚各灌胃1次,连续3天,第4天早上给药1h后经腹主动脉取血制备含药血清.取人胚肺成纤维细胞接种于6孔板内,分为未照射对照组、模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组,除未照射对照组外其余各组用钴60射线照射,剂量为8Gy.照射后将各组上清液吸弃,并分别换上相应的含药血清培养液,于24、48、72h检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量.细胞培养同前,于照射后24h检测肺成纤维细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的表达. 结果 模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组在各个时间点比较TGF-β1表达水平均较未照射对照组显著升高(P＜0.05).在24h时激素组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,在48h时养阴清肺组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,72 h时养阴清肺组、激素组TGF-β1表达水平较模型组降低(P＜0.05).与模型组比较,激素组、养阴清肺组、养阴清肺加激素组α-SMA表达均明显降低(P＜0.05);并且养阴清肺加激素组α-SMA表达明显低于养阴清肺组和激素组(P＜0.05). 结论 养阴清肺方能抑制照射后肺成纤维细胞分泌TGF-β1和α-SMA表达,可能是其治疗放射性肺纤维化的作用机制之一.
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低切应力对动脉粥样硬化形成及血管平滑肌细胞α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的影响
目的为探讨低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞增殖的影响,建立了低切应力颈总动脉粥样硬化模型;并观察了血管平滑肌细胞的α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的变化.方法手术结扎家兔左颈外动脉,术后高脂饲料喂养.组织学和免疫组织化学方法观察粥样斑块的形成和α-肌动蛋白及c-Myc蛋白表达的变化.结果在低切应力颈总动脉粥样硬化模型中,颈总动脉较早出现明显粥样斑块,管壁增厚,管腔内径变小;颈总动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的α-actin含量减少、c-Myc表达增高. 结论低切应力促进了动脉粥样硬化斑块的形成,促使粥样硬化动脉VSMC增殖能力增强.
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不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响
目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响.方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10%应变,频率分别为0.5 Hz、1 Hz和2 Hz,加载时间12 h和24 h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的alpha-肌动蛋白(α-actin)的表达变化.以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组.结果血管平滑肌细胞的α-actin的蛋白和RNA表达量在1Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高.结论不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞α-actin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节.
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胰岛素样生长因子-1对大鼠肝纤维化形成的影响
目的:探讨胰岛素样生长因子-1对大鼠肝纤维化形成的影响.方法:50只SD大鼠随机编入4组,正常组和橄榄油组各10只,模型组15只,IGF-1干预组15只.40%CCL4橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型,4 wk后,以IGF-1 2 ug/kg干预,共2 wk.观察大鼠存活率、体重变化及纤维化形成率;光镜下观察大鼠肝组织病理及胶原纤维变化;采用Western-blot法检测肝组织中α-肌动蛋白(α-SMA)含量.结果:IGF-1干预组大鼠存活率高于模型组,体重(301.5±32.4 g)明显高于模型组(252.1±24.1 g,P＜0.05),肝纤维化形成率较模型组低,光镜下肝组织纤维化程度明显改善,胶原含量明显下降.IGF-1干预组中肝组织α-SMA含量明显低于模型组.结论:IGF-1具有抗大鼠肝纤维化作用,这可能与其改善肝功能、抑制HSC活化等有关.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 肝纤维化 α-肌动蛋白 胶原纤维 -
2周耐力训练对大鼠骨骼肌肌动蛋白和肌球蛋白重链基因表达的影响
目的:研究2周跑台训练对雄性SD大鼠骨骼肌肌动蛋白(α-actin)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响.方法:实验以20只雄性SD大鼠为研究对象,将其随机分为对照组和训练组.运动训练组大鼠进行连续2周强度约为75%VO2max(18.5～24米/分钟,坡度为0°,每次运动50分钟,每天2次)的跑台训练,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定股四头肌深层肌α-actin和MHC mRNA含量.结果:(1)连续2周跑台训练后,股四头肌α-actin mRNA表达增加了22%(P<0.01).(2)连续2周跑台训练后,股四头肌MHCIIx、MHCIIb mRNA含量分别是安静对照组的109%(P<0.05)和108%(P<0.001),MHCIIb和MHCI mRNA变化不明显,结论:(1)短期耐力训练能够提高骨骼肌α-actin基因表达;(2)短期耐力训练后,快型MHC中的两种慢型MHC异形体--MHCIIx、MHCIIa基因表达增加,但未引起快型MHCIIb和慢型MHCI基因表达的变化.
关键词： 肌球蛋白重链 α-肌动蛋白 信使核糖核酸(mRNA) 跑台训练 -
1周跑台训练对大鼠骨骼肌α-actin基因表达的影响
离心运动可造成骨骼肌损伤，但缺乏对连续离心运动的适应性研究。本研究观察1次（B组）和1周（C组）下坡跑训练对大鼠腓肠肌肌动蛋白基因表达的影响及血清CK、LDH的变化。结果显示：1次和1周训练后大鼠腓肠肌肌动蛋白基因表达都出现明显升高，B组大鼠血清CK、LDH运动后7天仍显著高于对照组，C组已恢复正常。结果提示：连续离心运动可加速一次离心运动后肌肉损伤的恢复，机体对运动逐渐产生适应。
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脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达
目的探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与动脉粥样硬化的关系.方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析,检测人类高血压脑出血脑小动脉内α-SMA的表达程度.结果在脑出血组脑小动脉内α-SMA的表达明显增加.结论α-SMA的表达可作为血管平滑肌细胞(VSMC)激活的标志,它的出现标志着VSMC被激活并处于增殖/分泌表型.
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骨化三醇对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 骨化三醇在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化中的作用.方法 体外传代培养NRK52E后按以下分组加入不同干预因素,骨化三醇终浓度为10-6mmol/L,AngⅡ终浓度为10-6mmol/L,①对照组:NRK52E培养液中不加入干预因素;②AngⅡ组:NRK52E培养液中加入AngⅡ;③骨化三醇组:NRK52E培养液中加入骨化三醇;④AngⅡ+骨化三醇组:NRK52E培养液中加入AngⅡ和骨化三醇.经AngⅡ和骨化三醇干预12、24、48h后,应用细胞免疫化学染色法检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)的表达,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤维粘连蛋白(FN)的表达.结果 ①与对照组比较,AngⅡ作用48h后,E-cadherin的表达减弱(P<0.05),α-SMA的表达显著增强(P<0.05),同时加入AngⅡ和骨化三醇后,与AngⅡ组比较,E-cadherin的表达增强(P<0.05),α-SMA的表达减弱(P<0.05);②AngⅡ作用48h后,细胞上清液细胞外基质成分FN、ColⅠ含量在Ang Ⅱ组较对照组明显升高(P<0.05),同时加入骨化三醇和AngⅡ后,与AngⅡ组比较,FN、ColⅠ分泌有明显减少(P<0.05).结论 ①骨化三醇能抑制AngⅡ诱导的NRK52E细胞的表型的转化;②骨化三醇能减少血管紧张素Ⅱ诱导的NRK52E细胞外基质FN、ColⅠ的分泌.
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急性一氧化碳中毒对大鼠脑血管α-肌动蛋白和β-淀粉样蛋白的影响
目的：通过对一氧化碳中毒大鼠脑内小血管壁结构变化的研究，探讨一氧化碳中毒后脑组织的血管壁结构的变化规律，可能为阐明迟发性脑病的发病机制提供线索。方法免疫组化和图像分析法，动态观察一氧化碳中毒大鼠脑内小血管壁α-肌动蛋白和β-淀粉样蛋白。结果与对照组相比，急性一氧化碳中毒大鼠的小血管壁中α-肌动蛋白、β-淀粉样蛋白均有显著改变（ P ＜0?．05）。结论α-肌动蛋白、β-淀粉样蛋白在一氧化碳中毒大鼠脑组织的血管壁结构变化中起着重要的作用。
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积雪草颗粒对UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、HGF、MCP-1表达的影响
目的:探讨积雪草对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、α-肌动蛋白(α-SMA)、肝细胞生长因子(HGF)、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)-1表达的影响,为临床上应用积雪草延缓肾衰竭提供依据.方法:50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、积雪草大剂量组、积雪草小剂量组、对照(福辛普利)组.每组10只,除假手术组外均成功建立UUO大鼠模型,术后21 d腹主动脉采血,检测肝、肾功能的变化；免疫组化检测CTGF、α-SMA、HGF、MCP-l的表达部位及含量.结果:模型组CTGF、α-SMA、MCP-1的表达高于假手术组(P＜0.01),药物干预组指标低于模型组(P＜0.01)；药物干预组HGF含量显著高于模型组(P＜0.01)；其中积雪草大剂量组的表达高于小剂量组(P＜0.01),但与福辛普利组相似(P＞0.05).药物干预组BUN水平下降,Scr、ALT、AST变化不明显.结论:积雪草可通过上调UUO大鼠肾组织HGF的表达,抑制UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、MCP-1表达而实现其抗肾小管间质纤维化(TIF)的作用,大剂量组与福辛普利组作用相似,且没有明显的肝肾毒性.
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人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控
背景:目前肝纤维化尚没有公认的特效疗法,近年来骨髓间质干细胞应用于肝纤维化的治疗已取得一定效果,但具体机制仍不明确.目的:体外探讨人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的调控作用.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在中山大学干细胞与组织工程研究中心、中山大学第三附属医院中心实验室完成.材料:骨髓来源于青年健康志愿者髂骨,入肝星状细胞购自中山大学实验动物中心,人正常肝细胞系L-02购自中山大学实验动物中心.方法:将分离提纯的人骨髓间质干细胞与肝星状细胞在β孔Transwell板上建立上下共培养体系.接种密度均为2×104cells/well.另设L-02代替人骨髓间质干细胞作为阴性对照,单纯培养的肝星状细胞为空白对照,培养72 h.主要观察指标:肝星状细胞形态及免疫细胞化学染色结果,流式细胞仪检测肝星状细胞凋亡情况,Western blot法检测肝星状细胞活化标志α-肌动蛋白的表达.结果:倒置显微镜下活化的肝星状细胞呈扁平状,胞浆内缺乏脂肪滴,α-肌动蛋白位于肝星状细胞胞质内,呈高张力纤维状分布.与L-02+肝星状细胞组、单纯肝星状细胞组比较,骨髓间质干细胞+肝星状细胞共培养组的肝星状细胞凋亡率明显升高(P<0.05),α-肌动蛋白表达水平明显下调.结论:人骨髓间质干细胞可抑制肝星状细胞活化,促进其凋亡,这可能是骨髓间质干细胞抗肝纤维化的作用机制.
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自体骨髓间充质干细胞心肌移植后的分化及存活
背景:骨髓间充质干细胞移植入急性心肌梗死组织后是否能迁移、分化及存活,目前尚不清楚.目的:观察兔骨髓间充质干细胞移植入急性心肌梗死组织后,在体内的迁移、分化及其存活.方法:分离培养兔骨髓间充质干细胞,体外DAPI标记细胞.结扎兔左前降支制作急性心肌梗死模型,造模成功后30只新西兰大耳兔抽签法分为骨髓间充质干细胞组和对照组,每组15只.骨髓间充质干细胞组于冠状动脉结扎后1 h在梗死周边区用微量注射器分4点注射自体骨髓间充质干细胞.对照组于相同部位注射等量生理盐水.每点注射体积30 μL.分别于移植后10 min,3 d,4周时各组各处死5只动物.取心脏行冰冻切片,荧光显微镜观察DAPI标记骨髓间充质干细胞的分布情况;免疫荧光法检测标记细胞是否表达心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ和α-肌动蛋白.结果与结论:DAPI标记的骨髓间充质干细胞在兔急性心肌梗死模型心脏微环境中,蓝色细胞核分布广泛,呈椭圆形,似心肌细胞核,其排列方向与宿主心肌纤维方向一致,间接免疫荧光法检测胞浆心肌特异性蛋白肌钙蛋白Ⅰ、α-肌动蛋白均为阳性.说明缺血心肌内移植入骨髓间充质干细胞,可在局部微环境的刺激下向心肌细胞定向分化.
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颈性心绞痛家兔模型颈肌组织α-肌动蛋白变化的观察
目的:观察颈性心绞痛家兔模型肌组织内α-肌动蛋白变化.方法:选用大耳白兔,采用低头干预并注射瘀血,建立颈性心绞痛动物模型,运用免疫组化法观察α-肌动蛋白变化.结果:对照组可见阳性胞浆染色均一,呈淡棕黄色或深棕黄色,肌纤维平直,横纹可见.模型组大部分肌纤维呈波浪状.胞浆染色不均一,有淡染、缺染现象.结论:颈性心绞痛颈肌细胞发生了早期退变.
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肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响
目的:通过建立IgA肾病大鼠模型,观察肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响.方法:通过建立大鼠IgA肾病模型,同时给予肾络宁治疗,16周后检测α-肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在肾小球系膜的表达.结果:正常组均有基础表达,模型组明显增高,治疗后明显下降.结论:肾络宁既能降低IgA肾病大鼠系膜细胞α-SMA的表达,又能降低FN、ICAM-1的表达,表明肾络宁对IgA肾病的系膜细胞损伤及细胞外基质增生有一定的治疗作用.
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红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响
目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响. 方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21％ 02浓度)、低氧组(1％02浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1) 0.4 μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量. 结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P＜0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P＜0.01),与PGE1作用相当(P＞0.05). 结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化.红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当.
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酶消化法急性分离大鼠主动脉平滑肌细胞及其鉴定
目的 探讨采用酶消化法快速分离SD大鼠胸、腹主动脉平滑肌细胞的方法,为膜片钳实验提供大量原代平滑肌细胞.方法 取SD大鼠胸、腹主动脉,用酶液Ⅰ(木瓜蛋白酶等)、酶液Ⅱ(胶原酶和透明质酸酶等)酶解分离平滑肌细胞,酶液Ⅰ、Ⅱ的消化时间分别选取10、15、20、25、30 min,并两两组合以确定佳消化时间.分离的细胞经台盼蓝染色测定其活性并通过平滑肌特异性α-肌动蛋白(α-actin)免疫组化染色鉴定.结果 分离的平滑肌细胞在倒置显微镜下计数,酶液Ⅰ、Ⅱ的消化时间分别在30、15 min时平滑肌细胞数量多为(18.3+1.5)个/低倍视野,与其他各时间点组合相比,差异有统计学意义(P＜0.05).镜下观察典型的平滑肌细胞呈长梭形,细胞膜完整,边缘光滑;台盼蓝染色,90%以上的细胞为活细胞;免疫组化染色鉴定为平滑肌细胞.结论 酶消化法分离获取SD大鼠平滑肌细胞方法简单、成本低,采用本法可获得较大量的平滑肌细胞供实验使用.
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水飞蓟素对肝纤维化小鼠的保护作用及机制探讨
目的 探讨水飞蓟素抗CCl4和酒精所致肝纤维化的作用和机制.方法 50只♂昆明小鼠随机分为5组,模型组小鼠皮下注射CCl4并饮用酒精制造肝纤维化模型,治疗组以低、中、高3种不同浓度(50、100、200 mg*kg-1)的水飞蓟素灌胃进行干预,正常组小鼠皮下注射等量植物油并用生理盐水灌胃.通过检测血清AST、ALT水平、肝脏病理组织学变化、肝脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ) mRNA表达水平观察水飞蓟素的疗效.结果成功建立肝纤维化模型,模型组小鼠血清AST、ALT,肝脏组织TGF-β1、α-SMA及 collagen-Ⅰ mRNA表达水平增高,水飞蓟素可降低血清AST、ALT水平,降低肝组织TGF-β1、α-SMA及collagen-Ⅰ mRNA的表达,减轻肝纤维化程度,中剂量(100 mg*kg-1)疗效好.结论水飞蓟素对酒精和CCl4所致的肝脏损伤有明显保护作用,其机制可能与降低TGF-β1 mRNA的表达、抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化有关.
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下肢静脉曲张患者血管平滑肌细胞结构及α-肌动蛋白表达变化
目的 进一步探讨下肢静脉曲张的发生机制.方法 选用17份曲张大隐静脉和3份正常静脉,应用间苯二酚品红法染色观察血管平滑肌细胞(VSMC)结构,免疫组织化学染色观察其α-肌动蛋白表达情况.结果 代偿期曲张静脉中膜内VSMC大量聚集成团,失代偿期静脉管壁中膜内大VSMC极少见,呈"空泡"样改变;与正常静脉相比,代偿期曲张静脉VSMC内α-肌动蛋白表达明显增高(P<0.05),而失代偿期曲张静脉VSMC内α-肌动蛋白表达则明显降低(P<0.05).结论 曲张静脉VSMC有明显向内膜增殖"迁移"现象,失代偿期α-肌动蛋白数量明显减少;此可能为静脉曲张发生、发展的机制之一.
