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人体外受精低质量胚胎单卵裂球发育潜能研究
目的 探讨人低质量胚胎来源的单个卵裂球继续发育能力,并尝试建立人胚胎干细胞系.方法 采用透明带溶解法将人低质量胚胎分离成单个卵裂球,再行体外培养,观察卵裂球的生长发育情况.结果 62 个正常受精的人低质量胚胎经分离后共获取252 个单卵裂球.卵裂球经体外培养继续卵裂率为47.6%,致密化率为28.6%,早期囊胚形成率为20.2%,晚期囊胚形成率为13.1%,滋养层细胞样生长物形成率为9.1%,无人胚胎干细胞系建立.结论 人低质量胚胎的单个卵裂球通过体外培养可发育到囊胚阶段,而建立人胚胎干细胞系的方法 需进一步改进.该研究提示需根据不同的培养条件来审视卵裂球全能性,为建立低质量胚胎单个卵裂球来源的人胚胎干细胞系提供了新的思路.
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植入前遗传学诊断四例临床分析
目的探讨对遗传病高危夫妇采用单细胞荧光原位杂交(FISH)进行胚胎植入前遗传学诊断(PGD)的临床价值.方法对曾生育过遗传病患儿的4对夫妇通过超排卵获得卵子,体外受精,体外培养至6～8细胞胚胎,每个胚胎取1～2个细胞,采用FISH进行遗传学分析、筛选无遗传病发病风险的胚胎移植入子宫.结果 4例患者共进行4个治疗周期,获得可供活检的胚胎12个,活检细胞20个,固定后有核细胞17个,FISH后除2个细胞无杂交信号外,其余杂交信号清楚,结果明确.活检后的12个胚胎继续发育,结合遗传学诊断,8个胚胎可供移植,其中1例妊娠,于2001年9月14日足月剖宫产分娩一女婴,发育正常,体重4 270 g,出生后染色体检查为正常女性核型.结论对遗传病高危夫妇采用FISH技术进行PGD具有临床应用价值.
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4-细胞胚胎卵裂球全能性的体外实验研究
目的对体外培养的4-细胞人类胚胎卵裂球发育及分化情况进行观察和研究.方法采用控制性促超排卵获取人类卵子,体外受精获得早期胚胎,待发育到4-细胞阶段时将透明带去除,分散成为单个卵裂球进行培养,观察卵裂球发育及分化的情况.结果 20个4-细胞、2个3-细胞人类早期胚胎分散后获得单个卵裂球83个,经体外培养后有35个发育成为扩张囊胚.结论 4-细胞人类胚胎卵裂球具有发育成为完整囊胚的能力.
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不同扩增方法和探针长度对植入前单个卵裂球比较基因组杂交检测结果的影响
目的 探讨不同扩增方法和探针长度对植入前单个卵裂球比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)检测结果的影响,为植入前产前诊断奠定基础.方法 随机将20枚植入前6～8细胞期胚胎卵裂球分为A和B组(各10枚),取1名正常男性外周血20枚淋巴细胞,分为C和D组(各10枚)作为对照.A和C组经简并寡聚核苷酸聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed polymerase chain reaction,DOP-PCR)、B和D组经多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)分别进行全基因组扩增(whole genome amplification,WGA),用上述全基因组扩增产物进行PCR扩增TBX1基因2号外显子,验证其特异性.将获得的WGA产物制备成250～750 bp和750～2000 bp 2种不同长度的探针与正常男性中期染色体核型进行杂交,Y染色体性别决定区(sex-determining region of Y,SRY)基因验证CGH检测结果.结果 (1)用DOP-PCR扩增时,A组10枚卵裂球中有9枚WGA成功,C组10枚淋巴细胞WGA均成功;但其扩增产物进一步扩增TBX1基因2号外显子时,出现较多非特异性条带.CGH检测中.5例卵裂球用长度250～750 bp的探针检测时,1例失败,1例CGH软件核型分析结果与SRY结果不一致.(2)经MDA的B和D组,均WGA成功;其产物进一步扩增TBX1基因2号外显子时,非特异性条带少.CGH检测中,探针长度为250～750 bp的5例卵裂球均检测成功,且与SRY验证结果一致.(3)用长度为750～2000 bp探针检测时,杂交效果不好.结论 单卵裂球全基因组扩增,MDA较DOP-PCR方法稳定,特异性强,CGH检测中,扩增产物酶切至250～750 bp制备的探针杂交图像均匀、清晰,软件分析核型结果稳定、准确.
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X、Y、18三色探针同时检测植入前人胚的实验研究
目的:探讨X、Y、18 三色探针同时检测植入前人胚,以鉴定其性别及倍体的可行性 .方法:对体外受精(in vitro fertilizatio n, IVF)所获18个剩余胚104个卵裂球,采用X、Y、18三色着丝粒探针进行FISH分析. 结果:FISH分析成功率97.5%(77/79), 9例(9/11,81.9%)单精受精胚胎为二倍体, 性染色体嵌合未影响胚胎性别的诊断, 7例双精受精胚胎呈多种倍体异常. 结论: 采用X 、Y、18三色探针FISH法同时检测植入前人胚准确、有效,每胚分析2 个卵裂球具有代表性.
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试管婴儿早孕孕妇的心理特征及护理对策
体外授精-胚胎移植(IVF2ET)技术,俗称试管婴儿,是指从活体内取出卵子和精子经体外受精、培养,分裂成2～8个分裂球或胚泡期时,再移植到女性子宫内着床,发育成胎儿,分娩.
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中医治疗在辅助生育的应用
体外授精-胚胎移值(IVF-ET)技术,俗称试管婴儿,是指从活体内取出卵子和精子经体外授精、培养,分裂成2～8个分裂球或胚泡期时,再移植到女性子宫内着床,发育成胎儿、分娩.它不仅是不孕症治疗史上的里程碑,而且对生殖医学、早期胚胎学、遗传学、分子生物学等基础研究具有广阔的前景,对计划生育和优生具有重要意义.
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PGD周期中机械法和激光法活检对胚胎发育及妊娠结局的影响
目的:比较机械法和激光法进行卵裂球和极体活检对胚胎发育及着床前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)周期妊娠结局的影响.方法:本研究包括20对夫妇的21个PGD周期,其中18个周期分别用机械法或激光法于受精后第3天进行卵裂球活检,并用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析检出的卵裂球,于受精后第5或第6天移植信号正常的胚胎;2个周期分别用机械法和激光法在取卵后行极体活检,后行胞浆内单精子注射(introcytoplasmic sperm injection,ICSI).同时将活检取出的极体进行FISH分析,于取卵后第3天移植经FISH检查正常的卵发育而来的胚胎.另外一个周期先用激光法实行了极体活检,由于FISH检查均无信号,后又用激光法对胚胎行卵裂球活检.结果:共活检胚胎145枚,其中109枚用机械法,36枚用激光法.活检后胚胎的继续发育率分别为72.48%和83.33%,囊胚形成率为33.94%和44.44%,临床妊娠率为38.46%和16.67%,着床率为21.43%和8.33%,两种方法无显著差异.对27枚卵行极体活检,其中12枚用机械法,15枚用激光法.活检后2PN受精率分别为58.33%和46.66%,继续发育率为66.67%和60.00%,亦无显著差异.对活检出的极体进行FISH分析,用机械法活检的极体信号阳性率为90.00%,显著高于激光法的28.57%.结论:用机械法和激光法行极体或卵裂球活检对胚胎发育的影响差异无统计学意义.但使用机械法活检卵裂球能获得较高的临床妊娠率和着床率.极体活检时能获得较高的受精率和继续发育率,故推荐使用机械法进行活检.
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用X、Y双色探针行人胚分裂球植入前诊断
目的:运用X、Y双色探针行人类胚胎分裂球植入前诊断,探讨荧光原位杂交技术在人类胚胎植入前诊断中的应用价值.方法:对常规获得的胚胎,采用胚胎活检或直接行胚胎透明带的溶解,获取胚胎分裂球采用X、Y双色着丝粒探针进行荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)分析.结果:FISH分析成功率为79.49%,有价值结果获得率为23.98%.采用活检方法固定率、杂交率、完整信号率和有价值结果获得率分别为84.06%、77.59%、33.33%、21.74%;直接消化透明带固定率、杂交率、完整信号率和有价值结果获得率分别为77.17%、80.61%、40.51%、25.20%.两者相比无明显差异.结论:X、Y双色探针荧光原位杂交技术适用于胚胎植入前单个胚胎分裂球的遗传学诊断.
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氟化物转化细胞的超微结构观察
研究氟化物的致突变性和潜在致癌性，探讨其诱变机理。方法：应用NaF诱导转化金黄地鼠胚胎细胞(SHE)，以扫描和透射电镜观察其超微结构。结果：该细胞群中少数细胞凋亡，大部分细胞则已逃脱凋亡转化成恶性细胞。结论：氟化物对哺乳动物细胞可能具有诱变致癌性。
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小鼠胚胎切割技术在人类辅助生殖中的应用研究
目的：：探讨将胚胎切割方法尽早应用于临床。方法：应用显微切割刀和酶消化透明带显微玻璃针分割两种方法：对2、4、8细胞期和桑椹期的胚胎分割为二分胚；将2、4、8细胞期的胚胎切割成卵裂球；同时将2细胞期的胚胎连续2次分割培养；切割的二分胚和卵裂球在 M16溶液中行胚胎体外培养，观察其发育情况，达囊胚期植入子宫。结果：小鼠2、4、8细胞期的切割成功率分别为98.0%、86.6%、77.2%、66.1%，发育率为61.5%、80%、84.8%、89.3%；小鼠2、4、8细胞期切成的卵裂球发育至桑椹胚的成功率随着细胞数的增多而减少。小鼠2细胞期卵裂球的全能性优于4、8细胞期卵裂球。各细胞期半胚的发育率明显好于卵裂球的发育率。连续有两次切割2细胞期的胚胎发育到桑椹胚为15%。发育到囊胚的8细胞期和桑椹胚期的半胚移入假孕母鼠体内妊娠率分别为33.3%和60%。结论：显微玻璃针在切割成功率及后期的细胞成活率上优于纤维切割刀的切割方法。
