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宿主因子莫罗尼白血病病毒10蛋白抑制异嗜性鼠白血病病毒相关病毒的复制
本研究探讨宿主因子莫罗尼白血病病毒10(Moloney leukemia virus 10 MOV 10)蛋白对异嗜性鼠白血病病毒相关病毒(Xenotropic murine leukemia virus-related virusis,XMRV)复制的抑制作用,以及MOV 10抑制XMRV复制的初步机制和关键结构域.通过转染、感染、免疫印迹(Western blotting)及实时定量PCR(Real-time PCR)方法检测MOV10对XMRV的抑制作用及机制,结果显示MOV 10可明显抑制XMRV,并且这种抑制作用具有特异性.经进一步证实,MOV 10包裹进XMRV病毒中,随之在病毒感染细胞时发挥抑制作用;MOV 10可以抑制XM-RV的DNA产生;MOV 10发挥抑制作用的关键结构域是MOV 10本身RNA解旋酶的7个保守结构域.以上的研究结果表明MOV 10对XMRV具有明显的抑制作用,初步阐明了MOV 10抑制XMRV复制的机制,明确了MOV 10发挥抑制作用的关键结构域.本研究进一步证实了MOV 10具有广谱的抗逆转录病毒的活性,在宿主对抗逆转录病毒感染时发挥重要作用.
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宿主限制性因子MOV10对HBV复制的影响
目的 研究宿主限制性因子莫罗尼白血病病毒10蛋白(Moloney leukemia virus 10,MOV10)对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的调控作用.方法 首先在肝癌细胞Huh7中转染HBV复制质粒,探讨HBV复制和MOV10表达的相关性;接着在Huh7中通过siRNA干扰或过表达MOV10,提取病毒核心颗粒的DNA,通过荧光定量PCR分析病毒复制水平的变化;进一步构建MOV10保守结构域Ⅱ的酶活突变体(D645A、E646Q和G648A),检测突变后对MOV10抗病毒作用的影响;在人肾上皮细胞293细胞中共转染HBV复制质粒和MOV10表达质粒,通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)研究MOV10与HBV RNA的结合.结果 肝癌细胞Huh7转染HBV复制质粒后,MOV10蛋白水平增高;肝癌细胞Huh7中干扰内源性MOV10后,HBV复制水平升高1.5倍,而Huh7细胞中过表达MOV10,显著抑制了HBV的复制;MOV10结构域Ⅱ突变体同样显著抑制HBV的复制;MOV10可以与HBV 3.5 kb RNA结合.结论 在肝癌细胞中,宿主限制性因子MOV10的表达与HBV复制相关,其抑制HBV复制的作用不依赖于其解旋酶活性,可能与HBV 3.5 kb RNA结合有关.
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RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及细胞中的表达及意义
目的 探讨RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中的表达变化.方法 应用real-time PCR和Western blot检测MOV10的表达变化.结果 RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织中,在Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中高表达.结论 RNA结合蛋白MOV10可能参与调控阿尔茨海默病的病理过程.
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Mov10稳定表达肝癌细胞株的建立及其生物学研究
目的 构建稳定表达Mov10蛋白的HepG2细胞株,探讨Mov10在肝癌细胞增殖和侵袭等生物学行为中的作用.方法 将含Mov10基因的真核表达载体pCMV-Mov10-GFP质粒,采用脂质体介导法转染至人肝癌细胞系HepG2,经过G418抗性筛选阳性克隆.采用qPCR、Western blot技术检测Mov10的表达,免疫荧光技术观察稳定株Mov10的细胞分布.通过MTS、平板克隆形成试验、体外侵袭能力检测观察稳定细胞株的增殖情况、克隆形成能力和侵袭能力.结果 成功构建了表达Mov10蛋白的稳定细胞株HepG2-Mov10.内源性及外源性Mov10蛋白主要分布于细胞质.稳定细胞株HepG2-Mov10较对照组细胞增殖速度快(P＜0.05),体外侵袭能力强(P＜0.05).稳定细胞株HepG2-Mov10、HepG2-GFP和细胞株HepG2的克隆形成能力分别为(56.7±17.3)％、(38.3±12.1)％、(31.3±8.1)％,HepG2-Mov10细胞与后两者间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建稳定表达Mov10的细胞株HepG2-Mov10,发现Mov10能促进肝癌细胞增殖并提高克隆形成能力和侵袭能力.
