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表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒伴随病毒的产生
来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是近年来发现的一种新的报告基因,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1].重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点,是目前比较理想的基因治疗载体.构建表达GFP的rAAV载体(rAAV-GFP)对于应用rAAV进行基因转移和基因治疗研究非常必要,如评估rAAV生产系统的生产效率、估计rAAV的转导效率、研究rAAV进入体内后的分布及表达情况等.
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脂质体转基因应用的研究进展
脂质体(liposome)特别是阳离子脂质体(cationic liposome)作为一种基因转运工具得到了广泛的应用。与其它非病毒基因转运系统一样,它具有生产简便、毒性低、无感染危险等优点[1]。脂质体介导的转染技术已被广泛应用于将外源性基因导入哺乳动物细胞的研究中。本文就近年来脂质体在真核细胞和真核生物中转基因应用的研究进展做一回顾。 一、在治疗肿瘤方面的应用:脂质体作为一种转基因的载体,被人们纷纷应用于通过转移不同的外源基因来达到治疗各种肿瘤的目的。Meye等[2]用阳离子脂质体将表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的外源基因转入自行建立的两种肉瘤细胞株(L MS6-93,US8-93)中,转染后24小时,高达37%的细胞表达GFP,24~48小时转染效率高,72小时后GFP表达下降。该实验表明,对于粘附生长的肿瘤细胞用脂质体转染是一种有效的转基因手段。Kurane等[3]针对腺癌设计了一种高度特异的转基因方法:他们用抗Lewis Y抗原(Lewis Ya ntigen,LYA)的单克隆抗体与含有嵌合的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)启动子的质粒和阳离子脂质体的复合物,转染能产生CEA且LYA阳性的腺癌细胞株,结果获得的转基因表达比不产生CEA且LYA阴性的腺癌细胞株高200倍。更有意义的是,Li等[4]发现即便不用脂质体转运外源基因而单独用脂质体处理细胞后,即可明显诱导内源性干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)产生干扰素。脂质体在宿主细胞内诱导干扰素合成的这种能力,对肿瘤性疾病的基因治疗是非常有用的。
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犬急性脊髓损伤后神经前体细胞移植
一、材料与方法经端粒酶转染人胚胎脑室下区(SVZ)细胞建立永生化的神经前体细胞系,并转基因表达绿色荧光蛋白(GFP)用于标记和示踪.
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肝脏再生是受复杂有序信号调控的结果--从发现肝星状细胞可促进肝脏再生谈起
2014年12月 Kordes 等[1]在《临床研究杂志》上发表了题为《肝星状细胞促进祖细胞和肝脏再生》的研究报告。他们采用维甲酸依赖性荧光激活性细胞分类法,从能够表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大鼠中分离和纯化这些维甲酸存储性(hepatic stellate cells,HSCs),然后将 GFP+HSCs 移植至野生型(wild-type,WT)大鼠肝损伤模型中。WT大鼠肝损伤模型的制作方法是在2-乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene,2AAF)或惹卓碱(retrorsine)存在的条件下进行部分肝切除,这两种模型均支持以干细胞为基础的肝脏修复。结果显示:(1)移植的 HSCs 可形成间充质组织、祖细胞、肝细胞和胆管细胞,从而促进宿主动物的肝脏再生;(2)移植的 HSCs 也能使得胆红素代谢功能缺陷的 GUNN 大鼠恢复代谢胆红素能力;(3)将 HSCs 移植到宿主动物的骨髓,可以从骨髓中分离到 HSC 衍生的细胞,并可将其再次成功移植到新的宿主动物的受损肝脏中;(4)培养的 HSCs 在分化为具有胆酸合成和运输功能的肝细胞的过程中,可短暂呈现类似于祖细胞的特点。这些结果表明 HSCs 具有多潜能活性,代表了一种肝祖细胞的新来源,可以充当具有肝胆细胞等特性的祖细胞(progenitor cells)群,促进肝脏再生[1]。鉴于这项研究的新颖设计和重大发现,2015年8月 Shupe 和 Petersen[2]在《肝脏》杂志上就此发表了专门评论。
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pYL-绿色荧光蛋白质粒在卡介苗中的表达
我们将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因利用pYL-GFP质粒转导到卡介苗(BCG)内形成重组BCG-GFP,通过其在BCG内部表达绿色荧光蛋白作为标记蛋白,探讨BCG的作用过程和机制提供一种新的方法.